1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7292 mL

13.6459 mL

27.2918 mL

5 mM

0.5458 mL

2.7292 mL

5.4584 mL

10 mM

0.2729 mL

1.3646 mL

2.7292 mL

50 mM

0.0546 mL

0.2729 mL

0.5458 mL

GW2580是选择性CSF-1R抑制剂，作用于c-FMS时，IC50为30 nM,比作用于b-Raf, CDK4, c-KIT, c-SRC, EGFR, ERBB2/4, ERK2, FLT-3, GSK3, ITK, JAK2等的选择性高150到500倍。

靶点

c-FMS

IC50

30 nM

体外研究

0.06 μM GW2580在体外完全抑制人类CFMS激酶。GW2580抑制CSF-1刺激的M-NFS-60骨髓瘤细胞，血清刺激的NSO骨髓瘤细胞，CSF-1刺激的新鲜分离的人单核细胞，和VEGF刺激的人脐静脉血管内皮细胞的生长，IC50分别为0.33, 13.5, 0.47 和 12 μM。1 μM GW2580作用于人类破骨细胞，大鼠颅骨，和大鼠胎儿长骨的培养基，完全抑制CSF-1诱导的小鼠M-NFS-60骨髓细胞和人单核细胞的生长，且完全抑制骨退化。GW2580作用于RAW264.7小鼠巨噬细胞，抑制CSF1R磷酸化，IC50约为10 nM。GW2580也抑制TRKA活性，IC50为0.88 μM。

体内研究

GW2580（按40 mg/kg剂量口服处理小鼠0.5小时），抑制外源性CSF-1促进LPS诱导的TNF-α生成的能力，抑制达63％。GW2580处理小鼠，然后再使用CSF-1处理，完全抑制CSF-1提高小鼠IL-6 产量的能力。GW2580(80 mg/kg 口服处理)完全抑制腹腔内CSF-1依赖性的M-NFS-60肿瘤细胞的生长。GW2580(80 mg/kg)口服处理，每天两次，持续一周，然后注射巯基乙酸4天，降低了45％巨噬细胞的积。GW2580(50 mg/kg)处理佐剂性关节炎模型，为期21天，每天处理2次，按0到 21天, 7 到 21天, 或 14 到 21天的日程处理，抑制关节结缔组织和骨破坏。GW2580(160 mg/kg)处理移植的3LL肺肿瘤，诱导全部的CD45+ CD11b+ 骨髓细胞, CD11b+ F4/80+TAMs, 和 CD11b+ Gr-1+ MDSCs减少2倍以上。GW2580(80 mg/kg)处理，Vegf-a (抑制35%) 和 Mmp9 (抑制 70%)表达, 以及肿瘤的血管密度(CD31染色)。GW2580与anti-VEGFR-2抗体联合疗法，协同降低肿瘤生长。DC101单独处理，仅降低了35％肿瘤生长，DC101和GW2580联用处理，显著协同降低肿瘤生长，降低约70％。

cFMS酪氨酸激酶实验:
10 μM 酶, 100 μM ATP,和 5 mM MgCl2在50 mM Tris HCL中在室温下温育90分钟，通过自磷酸化而使酶激活。使用圆底聚苯乙烯96孔板，在Biomek 2000上进行酶反应，反应体积为45 μL。每孔加入溶于1 μL DMSO的化合物或只加入DMSO，孔中有含50 mM Mops(3-[N-Morpholino] 丙磺酸)的30 μL 1.5×底物反应混合物，pH 7.5, 15 mM MgCl2, 6 μM 肽底物, 生物素-EAIYAPFAKKK-NH2 7.5 mM DTT, 75 mM NaCl, 10 μM ATP, 和 0.5 μCi(1 Ci = 37 GBq)[33P-γ] ATP。加入15 μL 稀释的酶溶液开始反应，最终酶浓度为20 nM。EDTA加入到对照孔中。反应进行40分钟，加入等体积的0.5％磷酸终止反应，75 μL转移到已用 100μL 0.5％的磷酸预湿的96孔磷酸纤维素过滤板上。实验板在Millipore过滤板真空歧管上过滤，然后使用磷酸溶液洗涤三次，随后加入40 μL闪烁液。实验板进行密封，然后使用Packard Topcount NXT闪烁计数器进行计数。

细胞实验

• Cell lines: MCSF依赖性小鼠骨髓M-NFS-60细胞系
• Concentrations: ~20 μM
• Incubation Time: 3 天
• Method: 细胞自旋减慢后，按2×106细胞/mL置于培养基中饥饿处理24小时，一天后开始细胞生长实验。进行M-NSF60 细胞生长实验的培养基缺乏MCSF。实验第二天，溶于DMSO 的10 mM GW2580稀释至20μM ，与0.2％DMSO在含10％血清的培养基中，连续稀释，获得一个10点浓度曲线。M-NFS-60 细胞按0.5×106细胞/mL再悬浮于含10％血清和20 ng/mL小鼠MCSF的培养基中。细胞(50 μL)加到含抑制剂(50 μL)的孔中，3天后，每孔加入,10 μL WST-1 试剂。温育4小时后，在440 nm处测定吸光度，计算含全培养基和饥饿培养基的孔中的细胞生长差异。

动物实验

• Animal Models: 携带骨髓癌移植瘤 M-NFS-60的小鼠
• Formulation: 0.5%羟丙基甲基纤维素和 0.1% Tween 80
• Dosages: 80 mg/kg
• Administration: 口服处理，每天两次

TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

Off white powder

Identification

HNMR

Purity(HPLC)

≥98%

Conclusion

Passed