GNF-2是一种高选择性，非ATP竞争性的Bcr-Abl抑制剂，对Flt3-ITD， Tel-PDGFR， TPR-MET和Tel-JAK1转化的肿瘤细胞没有作用活性。

靶点

体外研究

GNF-2抑制Bcr-abl阳性细胞生长，IC50值为273 nM (K562) 和 268 nM (SUP-B15)，这种作用具有剂量依赖性。GNF-2抑制Ba/F3.p210E255V Ba/F3.p185Y253H细胞生长，IC50分别为268 nM 和 194 nM。GNF-2 (1 μM)诱导 Ba/F3.p210 细胞和 Ba/F3.p210E255V 细胞发生细胞凋亡。GNF-2抑制Bcr-abl细胞酪氨酸磷酸化，IC50 为267 nM，这种作用具有剂量依赖性。GNF-2 (1 μM) 作用于Ba/F3.p210细胞，显著降低phospho-Stat5水平。GNF-2结合到 Bcr-abl的烷基结合袋中。GNF-2 抑制非烷基化的c-Abl的激酶活性效果比抑制烷基化 c-Abl 好，通过结合到激酶域的C端半段结构的烷基结合袋中。GNF-2 (10 μM) 需要BCR和/或 c-Abl SH3 和/或 SH2 域，用来抑制BCR-Abl依赖性的细胞增殖。GNF-2,而非甲基化的GNF-2 类似物，使c-Abl结合到3T3成纤维细胞分离的 细胞提取物中。GNF-2 (10 μM)显著抑制 CrkII酪氨酸磷酸化，这种作用存在剂量依赖性。GNF-2作用于表达 c-AblG2A 的细胞，抑制CrkII 磷酸化，IC50为 0.051 μM。GNF-2 (10 µM) 与Imatinib (1 µM) 联用降低抗1 µM Imatinib 的细胞数，降低至少90%。 GNF-2 作用于表达p210Bcr–Abl 和 p210Bcr–Ab突变的BafF3 细胞，抑制自磷酸化和细胞增殖。GNF-2 (8 nM)与 GNF-5 (20 nM) 联用，增强对Abl64–515激酶活性的抑制效果。

Bafetinib (INNO-406)

MB3956

DCC-2036 (Rebastinib)

MB3959

PD173955

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6715 mL

13.3576 mL

26.7151 mL

5 mM

0.5343 mL

2.6715 mL

5.3430 mL

10 mM

0.2672 mL

1.3358 mL

2.6715 mL

50 mM

0.0534 mL

0.2672 mL

0.5343 mL

结合实验:
重组蛋白(100 nM) 或免疫沉淀的蛋白在激酶buffer (20 mM HEPES (pH 7.4), 50 mM KCl, 0.1% CHAPS, 30 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1 mM DTT, 和 1% 甘油)中稀释。稀释的蛋白等分与DMSO或化合物在室温下预温育30分钟，然后加到 K-LISA PTK EAY 反应板中。 加入0.1 mM ATP开始激酶反应，反应在室温下进行30分钟。通过SDS-PAGE 和荧光成像分析或放射自显影检测GST-Abltide的磷酸化。

细胞实验

• Cell lines: Ba/F3.p210, Ba/F3.p210E255V 和 Ba/F3.p185Y253H 细胞
• Concentrations: 10 μM
• Incubation Time: 48 小时
• Method: 细胞(0.3–0.6×106/mL) 按一式两份或一式三份接种在含浓度不断增高的GNF-2 (5 nM–10 μM)的96孔板中。在37°C 含5% CO2 的环境下温育48小时后，通过MTT比色法测定GNF-2对细胞活性的影响。测定IC50值。