BGJ398 (NVP-BGJ398)是一种有效的，选择性FGFR抑制剂，作用于FGFR1/2/3，在无细胞试验中IC50为0.9 nM/1.4 nM/1 nM，作用于FGFR比作用于FGFR4和VEGFR2选择性高40倍以上，对Abl， Fyn， Kit， Lck， Lyn和Yes几乎没有抑制活性。Phase 2。

靶点

体外研究

BGJ398抑制FGFR3-K650E，IC50 为4.9 nM。此外, BGJ398 也抑制VEGFR2。BGJ398 抑制其他激酶，包括ABL, FYN, KIT, LCK, LYN 和 YES，IC50分别为2.3 μM, 1.9 μM, 0.75 μM, 2.5 μM, 0.3 μM和1.1 μM。在细胞水平, BGJ398 抑制FGFR1-, FGFR2-Q, 和FGFR3-依赖的BaF3 细胞增殖，IC50分别为2.9 μM, 2.0μM和2 μM。BGJ398在特定酪氨酸残基，包括FGFR-WT, FGFR2-WT, FGFR3-K650E, FGFR3-S249C 和 FGFR4-WT处，干扰自磷酸化，IC50分别为4.6 nM, 4.9 nM, 5 nM, 5 nM 和168 nM。BGJ398 抑制过量表达野生型(WT)FGFR3的癌细胞，如RT112, RT4, SW780 和JMSU1 的增殖，IC50分别为5 nM, 30 nM, 32 nM 和15 nM。

体内研究

BGJ398按10和30 mg/kg剂量, 分别处理原位移植膀胱癌模型，持续12天，则抑制肿瘤生长，和引起淤血。BGJ398按10 mg/kg剂量处理实验动物，体重没有改变，按30 mg/kg剂量处理，则体重增加10%。BGJ398磷酸盐按 4.25和8.51 mg/kg剂量口服处理给药携带RT112肿瘤的雌性Rowett大鼠。BGJ398显著降低 pFRS2 和pMAPK水平，这种作用存在剂量依赖性。BGJ398显著抑制bFGF刺激的血管生成，这种作用存在剂量依赖性。然而, BGJ398不损害VEGF诱导的血管形成。

AZD4547

MB5516

BGJ398(NVP-BGJ398)

MB7546

BLU9931

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7842 mL

8.9209 mL

17.8418 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

放射性激酶实验:
在有放射性标记ATP存在时，通过纯化的GST-融合FGFR3-K650E激酶域，测定合成底物的磷酸化，而测定激酶活性。通过混合10 μL 3倍浓度BGJ398 溶液和10 μL相应底物混合物 (肽底物, ATP 和 [γ33P]ATP)测定酶活性。在实验buffer中加入10 μL 3倍浓度酶溶液开始反应。实验组成的终浓度如下：10 ng GST-FGFR3-K650E, 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 3 mM MnCl2, 3 mM MgCl2, 1 mM DTT, 250 μg/mL PEG 20000, 2 μg/mL 聚(EY) 4:1, 1% DMSO 及0.5 μM ATP (γ-[33P]-ATP 0.1 μCi)。包括BGJ398的终体积为30 μL的实验混合物根据过滤结合(FB)法在96孔板上室温下进行实验10分钟。加入20 μL 125 mM EDTA终止酶反应,按如下测定33P 渗透到肽底物的量: 30 μL 终止反应混合物转移到Immobilon-PVDF 膜上，之前用甲醇浸泡膜5分钟，用水冲洗,用0.5% H3PO4浸泡5分钟, 然后安装在真空歧管中。点样,连接真空，然后使用0.5% H3PO4 (200 μL)冲洗细胞。 移除膜，在摇床上使用1% H3PO4 处理四次，再使用乙醇处理一次。烘干膜，在膜上每孔覆盖 10 μL闪烁液。封闭实验板，在微板闪烁计数板上读数。通过线性回归分析 BGJ398抑制百分数，而计算IC50值。

细胞实验

• Cell lines: 鼠BaF3细胞系
• Concentrations: 0 μM-0.1 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: Murine 鼠BaF3细胞系接种在含10% FBS, 4.5 g/L葡萄糖, 1.5 g/L碳酸氢钠, 和Pen/Strep的 RPMI-1640培养基上。每周细胞传代两次。使用荧光素酶生物发光法检测测定BGJ398调节的抑制BaF3细胞增殖和活性。BaF3或 BaF3 Tel-TK细胞按每孔4250个细胞接种到384孔板上，在新鲜培养基中使用μFill液体分配器每孔加50 μL。BGJ398 在DMSO中连续稀释，然后排列在384孔板中。使用pintool传输设备使50 nL BGJ398 转移到含细胞的实验板上，然后实验板在37oC(5% CO2) 下温育48小时。然后加入25 μL Bright-Glo,使用 Analyst-GT测定荧光。测定IC50值。
  (Only for Reference)

动物实验

• Animal Models: 携带亲本RT112细胞系的无胸腺裸鼠
• Formulation: PEG300/D5W (2:1, v/v)
• Dosages: 10 mg/kg/qd和30 mg/kg/qd
• Administration: 口服处理