Copanlisib (BAY 80-6946)是一个高效的泛I型 PI3K抑制剂，其对PI3Kα/β/γ/δ抑制的IC50分别为0.5, 3.7, 6.4, and 0.7 nM。Phase 3。

靶点

体外研究

BAY 80-6946是PI3K抑制剂，具有抗肿瘤活性。BAY 86-9766抑制HuCCT-1 (KRASG12D) 和EGI-1 (KRASG12D) 细胞系增殖，IC50分别为147 nM 和137 nM。

体内研究

BAY 80-6946 耐受性良好，MTD(最大耐受剂量)为0.8 mg/kg。PK（药代动力学）研究结果支持每周给药。按MTD处理，在第一个24小时期间出现2/3级高血糖。PK, 临床SD和FDG-PET 数据与有效处理和PI3K 通路抑制情况一致。

740Y-P

MB3878

AS-252424

MB5532

BYL719

MB3572

CAY10505

MB3881

PIK-90

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0811 mL

10.4054 mL

20.8108 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

PI3Kα和PI3Kβ放射性脂质激酶检测:
p110α生化检测是一种放射性测定，测量33P渗透进p110α底物磷脂酰肌醇（PI）的程度。His标记的N-末端截短的(ΔN 1-108) p110α和同样截短的缺乏p85结合域的p110β(ΔN 1-108) 蛋白在Sf9细胞中表达，且纯化到50%以上纯度。为了获得 IC50值,使用 MaxiSorp 板在以下条件下在384孔板中进行反应。每孔使用2 μg在氯仿稀释的摩尔比为1:1的磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酰丝氨酸（PS）包被实验板。将实验板置于通风橱中过夜，蒸发有机溶液。将实验板密封在4°C贮存1个月。每孔加入7.5 ng截短的p110α蛋白，每孔中含9 μL 实验 buffer (50mM MOPSO pH 7.0,100 mM NaCl, 4mM MgCl2, 0.1%(w/v)BSA)，除了对照组只含实验 buffer。1μL 溶于DMSO的实验化合物从稀释液中转移，获得8点剂量反应 (0.0, 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1.0, 3.0 和 10 μM 终浓度BAY化合物)。加入含 20 μCi/mL [γ-33P]-ATP 的40 μM ATP 溶液开始反应，反应在室温下温和混合进行2小时。 加入 5μL 25 mM EDTA储存液终止反应。不使用洗涤剂清洗实验板，而使用384孔实验板洗涤器，然后每孔加入25μL UltimaGold 闪烁使用BetaPlate液体闪烁计数器测定渗透进固定化PI底物的放射性。

细胞实验：

Cell lines: KPL4, BT474, T47D, BT20, MCF7, MDA-MB-468, SK-Br-3, LNCaP, PC3, Colo205, HT29, HCT116, A549, H460, U87MG, 786O.

• Concentrations: 0.0, 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1.0, 3.0 和 10 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: 药物处理72小时后，使用Cell Titer-Glo 发光法细胞活力检测试剂盒测定细胞增殖。细胞按每孔500-1000个细胞接种到 384孔板中，孔中含 25 μL 生长培养基。对于每种细胞系的测定，细胞接种到单独的实验板上，在t=0小时和t=72小时测定发光值。在37°C下温育过夜，每孔加入25μL Cell Titer-Glo 溶液测定t=0时样品的发光值，转移实验板到摇床上，在室温下进行10分钟，然后使用发光检测仪（最大光检测在428 nm处测定）在Wallac Victor2 1420 Multilable HTS计数板上对实验板进行读数。使用在生长培养基中稀释的化合物（终体积为30 μL）处理t=72小时的剂量板。细胞在37°C下温育72小时。每孔加入30μL Cell Titer-Glo溶液测定t=72小时样品的发光值，然后将细胞置于摇床上在室温下进行10分钟，然后使用Victor发光检测仪读读取发光值。进行数据处理，实验组和对照组中t=72小时发光值减去t=0时发光值。实验组和对照组的发光值百分比差异用来测定生长抑制百分数。

动物实验：

Animal Models: Rats bearing KPL4 or HCT116 xenografts

• Formulation: PEG400/acidified water (0.1 N HCl, pH 3.5; 20/80, v/v) or 5% mannitol
• Dosages: 6 mg/kg
• Administration: i.v.