Apoptosis Activator 2强诱导caspase-3激活， PARP分裂， DNA断裂，导致细胞破坏(Apaf-1依赖性的)，IC50约为4 μM，抑制HMEC， PREC和MCF-10A细胞活性。

靶点

Caspase-3

体外研究

Apoptosis Activator 2 (20 μM)处于降低的cyto c浓度，增加凋亡体中的Apaf-1组分1.5倍，增至33％。Apoptosis Activator 2 (20 μM)处于cyto c的降低水平，增加caspase-3的活化程度4倍。Apoptosis Activator 2强烈诱导caspase-3活化，PARP裂解，和DNA分裂，并最终杀死细胞，IC50为4 μM。Apoptosis Activator 2 诱导PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 和 NCI-H23凋亡，IC50分别为50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM 和 35 μM。Apoptosis Activator 2抑制大多数测试的肿瘤细胞系，10 μM时抑制50-100%细胞生长。Apoptosis Activator 2通过触发凋亡体的形成而诱导细胞死亡。En1的表达水平对培养的中脑腹侧的生存率没有显著影响。通过凋亡的DNA梯状电泳和TUNEL检测测评Apoptosis activator 2 (10 μM)诱导AGS细胞凋亡。Apoptosis activator 2(10 μM)通过anti-TROP2抗体共轭的脂质体，增强对细胞凋亡的诱导。Cyclohexamide (10 μg/mL) 或 zVAD (50 μM)作用于培养的神经元，显著防止 Apoptosis Activator 2毒性。Apoptosis activator 2(3 μM)导致众多神经元发生核固缩，说明细胞死亡涉及细胞凋亡。DHT(10 nM) 或 E2(10 nM)作用于培养的神经元，显著防止Apoptosis Activator 2毒性。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.2665 mL

16.3324 mL

32.6648 mL

5 mM

0.6533 mL

3.2665 mL

6.5330 mL

10 mM

0.3266 mL

1.6332 mL

3.2665 mL

50 mM

0.0653 mL

0.3266 mL

0.6533 mL

无细胞凋亡检测:
制备HeLa细胞细胞质提取物。Apoptosis Activator 2溶于DMSO中，分加到96孔微量滴定板中，终浓度为1mM（DMSO终浓度为1% vol/vol）。溶于HEB Buffer (50 mM Hepes, pH 7.4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl2)的细胞质提取物的250μg总蛋白，2 mM DTT, 2 μM cyto c, 和 0.5 μM DEVD-AFC(Asp-Glu-Val-Asp-7-氨基-4-三氟甲基香) 底物加到每孔中，总体积为150 μL。实验板在37°C下温育,在 LJL Biosystems 酶标仪上按10分钟间隔读取荧光值。

细胞实验

• Cell lines: 神经元
• Concentrations: ~3 μM
• Incubation Time: 2 小时
• Method: 使用手动机械式计数器计数显微镜范围内的所有存活细胞。使用重要的染料钙黄绿素乙酰甲酯进行阳性染色，计数细胞存活情况。每个培养孔中，在四个不重叠的区域计数存活的细胞。每孔活细胞计数为100-200不等。所有实验都至少重复3次。使用单因素ANOVA，然后通过Fisher LSD检验用（显著性P<0.05）进行组间比较，统计分析原始细胞计数数据。细胞活力表示为活细胞与空白对照组的百分比。