380.91

化学式

C23H25ClN2O

CAS号

915385-81-8

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

76 mg/mL warmed (199.52 mM)

Ethanol

28 mg/mL (73.5 mM)

Water

Insoluble

ABC294640是一种口服生物可利用的选择性sphingosine kinase-2 (SphK2)抑制剂，IC50约为 60 μM。

靶点

体外研究

ABC294640显著改变MDA-MB-231细胞中神经酰胺/S1P的比率，与SK活性的抑制一致。ABC294640抑制肿瘤细胞增殖，IC50值范围大约为6 -48 μM，并且损害肿瘤细胞迁移，伴随微丝损失。在A-498，PC-3，和MDA-MB-231细胞中，ABC294640诱导非凋亡细胞死亡，溶酶体形态学改变，自噬体形成，并增加酸性囊泡。在MCF-7 和ER-转染的HEK293细胞中，ABC294640减少E2-刺激的ERE荧光素酶活性。

体内研究

在负荷乳腺癌异种移植物的小鼠中，ABC294640 (100 mg/kg, p.o.)显著减少肿瘤生长，与S1P水平的消耗相关。在负荷A-498异种移植物的严重联合免疫缺陷小鼠中，ABC294640延长肿瘤生长，并提高自吞噬标志物。ABC294640防止肝脏移植诱导的炎症和先天性与获得性免疫之间的串扰，主要物质沉淀和恶化的移植损伤，并改善肝功能，提高存活率

鞘氨醇激酶试验:
ABC294640和DMS的IC50值通过新开发的基于HPLC的SK活性试验测定。简而言之，测试化合物与重组SK1 或SK2 和NBD-Sph在同工酶选择性试验缓冲液中培育，其含有1 mg/ml无脂肪酸的牛血清白蛋白，100 μM ATP，和400 μM MgCl2。该产品，即NBD-S1P，通过HPLC从NBD-Sph中分离，其中Waters 2795 HPLC系统由Waters 2495荧光检测器，C8 Chromolith RP-8e 柱(100 × 4.6 mm)，1 ml/min流动相(乙腈/20 mM 磷酸钠缓冲液，pH2.5，45:55)组成。荧光性在465 nm激发光和531 nm发射光下监测。NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P)比率用于测量SK活性。SK-同工酶选择性试验缓冲液每个包含20 mM Tris，pH7.4，5 mM EDTA，5 mM EGTA，3 mM β-巯基乙醇，5% 丙三醇，1× 蛋白酶抑制剂和1×磷酸酶抑制剂。对于SK1试验缓冲液，加入0.25% (终) Triton X-100；对于SK2 缓冲液，加入1 M (终) KCl。试验在室温下进行2小时，然后加入1.5体积甲醇以终止激酶反应。10分钟后，样品在20,000g下离心以沉淀蛋白，并将上清液通过HPLC分析。在测量ABC294640抑制SK2的Ki实验中，ADP Quest试验体系用于测量不同浓度sphingosine和ABC294640存在下的激酶活性。为测定ABC294640对细胞SK活性的作用，将接近融合的MDA-MB-231细胞血清饥饿培养过夜，然后用不同浓度的ABC294640处理。然后细胞与1 μM终浓度的[3H]sphingosine培育。细胞摄取外源性sphingosine，其通过SK活性转化为S1P，而[3H]S1P通过萃取从[3H]sphingosine中分离，并通过闪烁计数定量。

细胞实验：

• Cell lines: 1025LU，Hep-G2，A-498，MCF-7，Caco-2，MDA-MB-231，HT-29，Panc-1，DU145，T24，和 SK-OV-3 细胞系
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 72小时
• Method: 为测定测试化合物对增殖的作用，细胞接种到96微孔板，并使其贴壁生长24小时。将不同浓度的ABC294640加入每个孔，细胞再培育72小时。在该时期结束时，活细胞的数量通过磺酰罗丹明结合试验测定。被杀死细胞的百分比以相对于对照组培养基，磺酰罗丹明-结合的下降百分比计算。抑制曲线的回归分析使用GraphPad Prism进行。

动物实验：

• Animal Models: 负荷JC肿瘤的雌性 BALB/c 小鼠
• Formulation: 0.375% Polysorbate-80溶于PBS
• Dosages: ~100 mg/kg
• Administration: p.o.

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6253 mL

13.1265 mL

26.2529 mL

5 mM

0.5251 mL

2.6253 mL

5.2506 mL

10 mM

0.2625 mL

1.3126 mL

2.6253 mL

50 mM

0.0525 mL

0.2625 mL

0.5251 mL