抑霉唑是一种高效内吸性广谱杀菌剂，被广泛应用于采收后的各种水果和蔬菜，以防止果蔬在运输和贮存过程中腐烂变质，起到防腐保鲜的作用。研究发现，人体长期摄入抑霉唑会引起内分泌系统功能紊乱，对神经系统及肝脏也有影响，成为危害人类健康的一大隐患。许多发达国家对抑霉唑限制使用并将其列入监控范围，我国最新修订的《GB 2763-2019食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定柑橘类水果中抑霉唑残留限量为5.0 mg/kg。

        迪马科技参考国家标准《GB 23200.113-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》和《GB/T 20769-2008 水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了沃柑中抑霉唑的检测方法，采用标准中的ProElut Carb/NH2固相萃取柱和QuEChERS净化管净化，Leapsil色谱柱结合UPLC-MS/MS色谱分析，方法定量限为10.0 μg/kg，可供广大分析工作者参考。

柑橘中抑霉唑的检测 UPLC-MS/MS法      

1、适用范围
        本方案适用于沃柑等橘子样品中保鲜剂抑霉唑的检测。

2、标准溶液配制
(1) 标准储备液：准确称取适量标准品，用甲醇配制成1.0 mg/mL的标准储备液；
(2) 标准中间液：分别吸取适量标准储备液，用甲醇配制成10.0 μg/mL和0.5 μg/mL的标准中间液。

3、固相萃取法处理
3.1提取
(1) 样品粉碎需要粉碎全果，带皮粉碎，称取样品20.0 g于100 mL烧杯中，加入40 mL乙腈。混匀，高速匀浆均质2 min；
(2) 加入5~7 g NaCl振荡2 min，6000 rpm离心2 min；
(3) 取出上层清液10 mL，40 ℃下减压蒸至近干；
(4) 加入3 mL乙腈:甲苯=3:1 复溶，待净化。

3.2净化—— ProElut CARB/NH₂ 6 mL (Cat#: 64105)
a活    化： 加入5 mL乙腈:甲苯=3:1，弃去流出液；
b上    样： 加入待净化液，收集流出液；
c 淋    洗： 用6 mL乙腈:甲苯=3:1分三次润洗旋蒸瓶，然后加入柱中，收集流出液；
d洗    脱： 加入25 mL乙腈:甲苯=3:1，收集流出液；
e重新溶解： 40 ℃减压蒸干，加入2.5 mL甲醇复溶，过0.22 µm PTFE滤膜 (Cat#: 37178)，上机分析。
注：同方法制备基质匹配标准溶液

4、QuEChERS法前处理
4.1提取
(1) 样品粉碎需要粉碎全果，带皮粉碎，称取样品10.0 g于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈。混匀，振荡5 min；
(2) 加入萃取盐包* (Cat#: 64521s) 振荡1 min， 6000 rpm离心2 min；
(3) 取出上层清液6 mL待净化。
*萃取盐包：4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠、0.5 g柠檬酸氢二钠

4.2净化——ProElut QuE 15 mL Tube (885 mg MgSO4，150 mg PSA，15 mg Carb) (Cat#: 64621)
        将待净化液加入到15 mL ProElut QuEChERS净化管，涡旋混合1 min，6000 rpm离心5 min，准确移取2 mL上清液于5 mL氮吹管中，45 ℃水浴中氮气吹至近干(大约100 μL以下)，甲醇定至1 mL，混匀，过0.22 µm PTFE滤膜 (Cat#: 37178)，上机分析。
注：同方法制备基质匹配标准溶液。

5、分析条件
UPLC 条件
色谱柱：Leapsil C18, 100 x 2.1 mm, 2.7 μm (Cat#: 86005)
流  速：0.3 mL/min   
进样量：1 μL  
柱  温：40 ℃
流动相：A:  0.1%甲酸水    B: 乙腈
梯度

质谱条件

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

沃柑中抑霉唑添加回收结果(%)

图1 抑霉唑标准品20.0 μg/L的XIC色谱图

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