参考《GB 31656.6-2021 食品安全国家标准 水产品中丁香酚残留量的测定 气相色谱－质谱法》
丁香酚是一类具有丁香花味道的液体化合物，具有抑菌、杀病毒的作用。水产领域使用丁香酚是利用其可抑制水产品中枢神经系统的功能，在水产品繁育、手术和运输环节，可显著降低应激反应并减少剧烈挣扎造成的鱼、虾类损害，使成活率大大提高。由于丁香酚存在一定毒性，非法使用容易在鱼、虾体内残留，食用后对人体健康造成危害。
2021年9月16日农业农村部发布《中华人民共和国农业农村部公告 第388号》 36项食品安全国家标准，自2022年2月1日起实施，其中包含丁香酚的测定。迪马科技参考《GB 31656.6-2021 食品安全国家标准 水产品中丁香酚残留量的测定 气相色谱－质谱法》，建立了SPE-GC-MS测定水产品中丁香酚残留量的方法。使用乙腈提取，乙腈饱和过的正己烷除脂，ProElut C18固相萃取柱净化；定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg，回收率符合标准要求。
本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。
1、适用范围
本方案适用于鱼、虾可食组织中丁香酚残留量的检测，定量限为10 μg/kg。
2、标准品配制
1. 丁香酚标准储备液1000 μg/mL：准确称取10 mg标准品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，配制成1000 μg/mL的丁香酚标准储备液；
2. 内标储备液500 μg/mL：准确称取5 mg标准品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，配制成500 μg/mL的内标储备液；
3. 丁香酚标准工作液1.0 μg/mL：准确移取丁香酚标准储备液，用乙酸乙酯稀释为浓度1.0 μg/mL的丁香酚标准工作液；
4. 内标工作液1.0 μg/mL：准确移取内标储备液，用乙酸乙酯稀释为浓度1.0 μg/mL的内标工作液。
3、提取
1. 取2 g样品于50 mL塑料离心管中，加入内标工作液0.1 mL和10 mL乙腈，涡旋1 min，超声10 min，4000 rpm离心5 min，收集上清液于另一50 mL离心管中；
2. 向下层残渣中再加入10 mL乙腈，按步骤(1)重复提取一次，合并上清液；
3. 加入10 mL正己烷(乙腈饱和)，脱脂，涡旋1 min，4000 rpm离心5 min，取乙腈层，按上述方法重复脱脂一次；
4. 将乙腈层在45 ℃水浴下缓慢通入氮气吹至近干，加入10 mL 10%甲醇水溶液，混匀，待净化。
4、净化——ProElut C18 300 mg/3 mL (Cat.#: 63167)
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(1)活 化： |
依次加入3 mL甲醇、3 mL水，弃去流出液； |
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(2)上 样： |
将待净化液加入柱中，弃去流出液； |
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(3)淋 洗： |
加入3 mL水，弃去流出液，抽干小柱5 min； |
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(4)洗 脱： |
加入3 mL甲醇，收集流出液； |
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(5)重新溶解： |
将洗脱液在45 ℃水浴下缓慢通入氮气吹干，用乙酸乙酯定容至1 mL，供GC-MS分析。 |
5、分析条件
色谱柱：DM-5MS, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm (Cat.#: 8221)
进样口温度：280 ℃
升温程序：初始温度70 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升温至120 ℃，再以10 ℃/min升温至170 ℃，保持3 min
载气：氦气，流速：1.00 mL/min
进样方式：不分流进样，进样量：2.0 μL
离子源温度：280 ℃
接口温度：280 ℃
溶剂延迟：5 min
电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1
表1 选择离子监测组表
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通道 |
起始时间(min) |
结束时间(min) |
选择离子(m/z) |
|
1 |
6.50 |
8.00 |
164,104,103,167,149,121 |
6、添加回收结果
鱼、虾中丁香酚残留量检测的添加回收结果(内标法计算)(%)
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基质 |
添加水平50 μg/kg 加标量：丁香酚工作液1.0 μg/mL, 加100 μL |
添加水平10 μg/kg 加标量：丁香酚工作液1.0 μg/mL, 加20 μL |
|
鱼 |
99.69 |
98.51 |
|
虾 |
98.46 |
102.87 |
%e5%9b%be.png)
丁香酚标准品100 ng/mL的XIC(m/z 164)图
丁香酚-d3内标100 ng/mL的XIC(m/z 167)图
标准曲线的制备：
精密量取丁香酚标准工作液、内标工作液适量，用乙酸乙酯稀释成浓度为4 μg/L、10 μg/L、40 μg/L、100 μg/L、400 μg/L、800 μg/L丁香酚系列标准工作液。标准工作液中氘代丁香酚的含量均为100 μg/L。现配现用。取系列标准工作液进样，以丁香酚和氘代丁香酚峰面积比值为纵坐标，对应丁香酚浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。求回归方程和相关系数。
Y = 0.9518499X + 5.068258e-003
R^2 = 0.9998966
相关产品信息
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名称 |
规格 |
货号 |
|
标准品 |
||
|
丁香酚/丁子香酚[97-53-0] Eugenol |
100 mg |
46582 |
|
丁子香酚-D3[1335401-17-6]Eugenol-d3 |
5 mg |
E938642-5mg |
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样品前处理 |
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|
ProElut C18 |
300 mg/3 mL 50/pkg |
63167 |
|
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
244358 |
|
1,3,6 mL柱管通用连接器 |
15/pk |
4803 |
|
考克(控制流量) |
15/pk |
4806 |
|
真空/正压两用泵，无油 |
1/pk |
99011 |
|
抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米,2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
99013 |
|
色谱柱 |
||
|
DM-5MS |
30 m x 0.25 mm x 0.25 μm |
8221 |
|
高纯试剂·缓冲盐 |
||
|
乙腈 HPLC级 |
4 L |
50101 |
|
乙腈 LC-MS级 |
4 L |
50163 |
|
甲醇 HPLC级 |
4 L |
50102 |
|
甲醇 LC-MS级 |
4 L |
50164 |
|
正己烷 HPLC级 |
4 L |
50115 |
|
乙酸乙酯 HPLC级 |
4 L |
50104 |
|
通用消耗品 |
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|
瓶架/白色 |
50孔 |
52401A |
|
瓶架/蓝色 |
50孔 |
52401B |
|
样品瓶 (棕色/螺纹) |
2 mL, 100/pk |
1034 |
|
样品瓶盖/含垫 (已经组装) |
100/pk |
1035 |
|
GC 进样针, 尖头 |
5 μL |
H87900 |
红色产品货号#1034、#1035火热促销中……