Vemurafenib (PLX4032, RG7204)是一种新型有效的B-RafV600E抑制剂，IC50为31 nM。Vemurafenib对B-RafV600E的选择性比对野生型B-Raf的选择性高10倍，在细胞实验中，选择性可高100倍以上。

特性

PLX4032是新型有效的B-RAFV600E 肿瘤蛋白抑制剂。

靶点

体外研究

PLX4032抑制B-RAFV600E, C-RAF, 和 野生型B-RAF, IC50分别为31 nM, 48 nM, 和100 nM。PLX4032 也抑制一些非-RAF激酶,包括ACK1, KHS1,和SRMS, IC50 为18 nM 到51 nM。PLX4032作用于黑色素瘤细胞系，抑制效果依赖于B-RAF突变状态，因为PLX4032有效抑制含B-RAFV600突变的细胞, 包括V600E, V600D, V600K, 和V600R, 但是对野生型或其他突变没有作用效果。PLX4032作用于MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, 和A2058细胞时，IC50为20 nM 到 1 μM。0.1 μM 到30 μM PLX4032 也抑制MEK1/2 和ERK1/2磷酸化作用。PLX4032高效作用于黑色素瘤的治疗 ，因为PLX4032有效抑制B-RAFV600E。PLX4032作用于结肠癌细胞，抑制B-RAF V600E导致 EGFR激活的快速回应，可用于补偿PLX4032抑制的细胞增殖。

体内研究

PLX4032按6 mg/kg-20 mg/kg 剂量作用于B-RAFV600E-突变鼠移植瘤模型，抑制肿瘤生长。PLX4032按12.5 mg/kg-100 mg/kg剂量作用于携带LOX, Colo829, 和A375移植瘤小鼠，抑制肿瘤生长，延长小鼠寿命。

GDC-0879

MB5133

PLX4720

CL-10148

RAF265 (CHIR-265)

CL-10173

Raf265 derivative

MB4070

SB590885

RAF激酶活性测定:
通过测量生物素化的BAD蛋白磷酸化而测定野生型RAF和突变型的激酶活性。在20 mM Hepes (pH 7.0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01% (v/v) Tween-20, 50 nM 生物素-BAD 蛋白，和 1 mM ATP 的混合物中室温下进行反应。加入5 μL 含20 mM Hepes (pH 7.0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA, 0.3% (w/v) 牛血清蛋白 (BSA)的溶液，5分钟后，反应终止。终止溶液也包含p-BAD (Ser112) 抗体,链霉亲和素包被的供体小珠，蛋白A 受体小珠。抗体和小珠在终止溶液中黑暗环境下室温预温育30分钟。 最终抗体被稀释2000倍，每个小珠的终浓度为10 μg/mL。重复做三次单独纯化蛋白实验，去不同两批的平均值作为突变活性。

细胞实验：

• Cell lines: MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, 和 A2058 细胞
• Concentrations: 0–10 μM , 溶于 DMSO
• Incubation Time: 5 天
• Method:

通过MTT 实验测评细胞增殖。细胞按每孔1000到5000个接种在96孔板上，体积为180 μL。PLX4032按最终实验浓度的10倍储备在含1% DMSO的培养基中。细胞接种24小时后, 加入20 μL适当稀释的PLX4032。接种6天后，进行增殖实验。计算抑制百分数，根据抑制百分数与浓度的对数的回归分析测定IC50值。

动物实验：

• Animal Models: 携带LOX, Colo829, 和A375移植瘤细胞的无胸腺裸鼠
• Formulation: 配制成微沉淀散粉 (MBP), 按指定浓度悬浮在含2% Klucel LF的水溶液中，然后使用HCl调节pH为4
• Dosages: 12.5 mg/kg–100 mg/kg
• Administration: 口服饲喂，每天两次