TW-37是一种新型的非肽类抑制剂，作用于重组Bcl-2，Bcl-xL和Mcl-1，无细胞试验中Ki分别为0.29 μM， 1.11 μM和0.26 μM。

特性

TW-37是新型非肽类小分子 Bcl-2抑制剂。

靶点

体外研究

TW-37靶向作用于Bcl-2 中与促凋Bcl-2蛋白结合的亡BH3结合槽, 作用于Bcl-2和Mcl-1比作用于Bcl-xL亲和力和选择性高， Ki 分别为0.29 μM, 0.26 μM 和1.11 μM。在体外, TW-37作用于从淋巴瘤患者体内得到的原发性细胞 和抗de novo化疗的WSU-DLCL2 淋巴瘤细胞系，具有抗增殖和促凋亡效果，而对正常外周血淋巴细胞则没效果。TW-37作用于内皮细胞，抑制细胞生长和细胞死亡，IC50约为1.8 μM，但是相同浓度TW-37处理成纤维细胞则没效果。此外, TW37按相同的低浓度作用于MCF-7, LNCaP, 和SLK肿瘤细胞系，具有抗增殖效果，所用药物浓度比抑制内皮细胞生长所需浓度低。

体内研究

TW-37按40 mg/kg最大耐受剂量(MTD)单独静脉注射给药SCID小鼠，注射三次，增强Cyclophosphamide-Doxorubicin-Vincristine-Prednisone(CHOP)方案抑制肿瘤的效果。TW-37静脉注射处理含人血管新生的SCID小鼠，通过降低功能性人血管 密度而产生抗血管生成效果。TW-37与MEK抑制剂的联合用药，协同性的抑制了小鼠中黑色素瘤细胞的生长。

MB7269

ABT-199(GDC-0199)

MB4611

ABT-263 (Navitoclax)

MB3970

HA14-1

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7431 mL

8.7154 mL

17.4307 mL

5 mM

0.3486 mL

1.7431 mL

3.4861 mL

10 mM

0.1743 mL

0.8715 mL

1.7431 mL

50 mM

0.0349 mL

0.1743 mL

0.3486 mL

重组 Bcl-2,Bcl-XL,和 Mcl-1蛋白荧光偏振结合实验:
为了进行次实验,使用 6-羧基荧光琥珀酰亚胺酯(FAM-Bid)标记的Bid 衍生的21个残基 BH3肽 QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR，及人Bcl-2,Bcl-X L,和 Mcl-1衍生的重组蛋白。FAM-Bid 作用于Bcl-2, Bcl-XL和Mcl-1蛋白时，Ki 分别为11 nM ,25 nM, 和 5.7 nM。Bcl-XL竞争性结合实验与Bcl-2实验一样，除了以下不同：30 nM Bcl-XL 蛋白和2.5 nM FAM-Bid肽溶于以下实验[50 mM Tris-Bis (pH 7.4) 和0.01%牛gamma-球蛋白]。

细胞实验

• Cell lines: HDMECs
• Concentrations: 0到100 μM
• Incubation Time: 96小时
• Method: 进行sulforhodamine B(SRB)毒性实验。通过分析生长曲线而测定毒性实验最佳细胞密度。HDMECs接种在96孔板上，使其粘附过夜。药物在EGM2-MV中稀释，然后分层加到细胞中cells,按指定时间温育。另外, HDMECs 与TW37和0 到100 ng/mL重组人VEGF(rhVEGF)165或0 到100 ng/mL 重组人CXCL8共温育。在板上加入冰冻三氯乙酸 (终浓度为10%)，与细胞在4oC下温育1小时。加入溶于1%乙酸的0.4% SRB，对细胞蛋白进行染色，然后在室温下温育30分钟。使用1% 乙酸冲洗，移除未结合的SRB，然后烘干实验板。结合的SRB再溶解在10 mM 无缓冲 Tris-碱中，然后使用酶标仪在 560 nm测定吸光值。每组实验进行至少三次独立重复实验，获得实验数据。 

动物实验

Animal Models: 移植了SK-Mel-147黑色素瘤的小鼠

• Formulation: 悬浮于1:1 Tween 80/ethanol中，使用前用0.9%的生理盐水稀释十倍。
• Dosages: ~40 mg/kg
• Administration: 静脉注射或腹腔注射