TTNPB (Arotinoid Acid)是有效的RAR激动剂, 抑制与[3H]tRA结合,作用于人类RARα, β, 和 γ, IC50分别为5.1 nM, 4.5 nM,和 9.3 nM。

靶点

体外研究

TTNPB以高亲和力结合到核视黄酸受体，抑制[3H]tRA与mRARα, β, 以及γ的结合，其IC50分别为3.8 nM, 4.0 nM, 和4.5 nM。在使用条件培养基72小时后，TTNPB增加JEG-3细胞中小鼠RARs的转录活性，对mRARα, β,以及γ的EC50分别为2.0 nM, 1.1 nM和0.8 nM。TTNPB通过诱导G1细胞周期阻滞，抑制正常人体乳腺上皮细胞（HMECs）和雌激素受体-阳性（ER-阳性）乳腺癌细胞的生长。TTNPB引起ES-D3细胞分化的浓度依赖性减少。

体内研究

TTNPB（0.25毫克/千克）通过诱导细胞凋亡引起MXT-HS和MXT-HI模型的生长抑制。

740Y-P

MB3878

AS-252424

MB3883

AZD6482

CL-11196

BAG956

MB3434

CH5132799

MB3885

CUDC-907

MB3870

GDC-0980 (RG7422)

MB3891

GSK1059615

MB5322

PF-4989216

MB3864

PI-103

CL-10040

TG100713

MB5302

VS-5584

MB5319

XL-147

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.8696 mL

14.3480 mL

28.6961 mL

5 mM

0.5739 mL

2.8696 mL

5.7392 mL

10 mM

0.2870 mL

1.4348 mL

2.8696 mL

结合实验:

• 结合实验如先前所述进行(Allenby et al., 1993, 1994)。简言之，将标记的和未标记的类视黄酸添加到核叶或胞质部分的乙醇中，使加入乙醇的总量在所有试管中保持不变，并且不超过培养基体积的2％。该受体制剂与类视黄醇在4℃下培养4-6小时。平衡态实现之后，交联葡聚糖PD-10脱盐柱被用于从游离的放射性配体中分离结合的放射性配体。对于竞争性结合测定法，不同浓度的未标记的竞争性配体与适当的核小体或胞质溶胶在固定浓度的[3H]tRA (sp. act. 49.3 Ci/mmol)或者 [3H]9-cis RA (sp. act. 24.0 Ci/mmol)存在下被培育。[3H] tRA和[3H]9-cis RA在核受体结合实验中的终浓度为5nM。[3H] tRA在CRABP结合实验中的终浓度为30 nM。计算出的IC50s如上所诉(DeLean et al., 1978)。对于饱和动力学，在100倍摩尔过量对应的未标记类视黄醇存在（非特异性结合）或不存在（完全结合）下，增加浓度的放射性配体([3H]tRA sp. act. 49.3 Ci/mmol, [3H]TTNPB sp. act. 5.5 Ci/ mmol)被加入到适当受体亚型的核叶中。特异性结合被定义为总结合减去非特异性结合。饱和动力学的计算如前所述(Scatchard, 1949; Grippo and Gudas, 1987; Levin et al., 1992)。

细胞实验

• Cell lines: T47D细胞和184细胞
• Concentrations: ~1 μM
• Incubation Time: 8-12天
• Method: 人类乳腺上皮细胞被维持在乳腺上皮基础培养基（MEBM)中, 用乳腺上皮生长培养基（MEGM）试剂盒进行增补。184和184B5细胞被维持在MEBM不含钠-碳酸氢盐(MEBM-SBF)中，用MEGM试剂盒进行增补，异丙肾上腺素(10 μM)，以及转铁蛋白(5 微克/毫升)。MCF10A细胞系被维持在DME/F12中，其包含5%高温灭活的马血清，青霉素/链霉素(100 微克/毫升以及100微克/毫升)，氢化可的松(1.4μM)，胰岛素(10微克/毫升)，霍乱霉素(100纳克/毫升)，以及表皮生长因子(20纳克/毫升)。乳腺肿瘤细胞被维持在改进过的MEM 锌选择性培养基中，其包含10%牛胎儿血清，1%谷氨酸盐，以及1%青霉素/链霉素。对于生长实验，细胞在培养基中用不同的类视黄酸处理特定天数，在T47D细胞中治疗每隔一天发生变化，在184细胞中治疗每两天发生一次变化。细胞增殖由本方案中CellTiter96含水非放射性细胞增殖试验测定。该比色试验确定样本中活细胞的数量。每个代表样本的点以一式四份进行采样。

动物实验

• Animal Models: 对激素敏感（HS)和不敏感（HI）品系的患有乳腺癌的MXT小鼠模型。
• Formulation: 生理盐水
• Dosages: ~0.25 毫克/千克
• Administration: i.p.