SB 743921 是 kinesin spindle protein (KSP)（纺锤体驱动蛋白）抑制剂，Ki为0.1 nM, 对MKLP1, Kin2, Kif1A, Kif15, KHC, Kif4 和 CENP-E几乎没有亲和力。

靶点

SKOV3 细胞

Colo205 细胞

MV522 细胞

MX1 细胞

P388 细胞

IC50

0.2 Nm

0.07 nM

1.7 nM

0.06 nM

14.4 nM

体外研究

SB 743921对于人和鼠的KSP的Ki值分别是0.1 nM 和0.12 nM，而对其它的驱动蛋白MKLP1和Kin2，其Ki值则大于70 μM。SB 743921阻断了功能性有丝分裂纺锤体的组装，因此能将细胞阻断在有丝分裂期并随后导致细胞坏死。SB-743921对ispinesib的效能已经分别在生化和细胞实验中得到改善。

体内研究

在体内SB-743921能有效抑制P388白血病。不同于紫杉烷，SB-743921对广谱肿瘤模型都有显著效应。SB-743921对异种移植人的肿瘤Colo205 (完全回归), MCF-7, SK-MES, H69, OVCAR-3 (完全和部分回归) 和 HT-29, MX-1, MDA-MB-231, A2780 (肿瘤生长延迟)都能产生抑制增长的活性。SB-743921不会引起经常与微管蛋白相关的神经病变。

特征

SB-743921是第二代KSP 抑制剂

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8066 mL

9.0331 mL

18.0662 mL

5 mM

0.3613 mL

1.8066 mL

3.6132 mL

10 mM

0.1807 mL

0.9033 mL

1.8066 mL

50 mM

0.0361 mL

0.1807 mL

0.3613 mL

生化实验:
用大肠杆菌BL21(DE3)表达COOH端标记6个组氨酸的KSP蛋白的马达结构域（1-360位氨基酸）。在microfluidizer中用裂解液[50 mM Tris-HCl; 50 mM KCl, 10 mM 咪唑, 2 mM MgCl2, 8 mM β-巯基乙醇, 0.1 mM ATP (pH 7.4)]裂解菌体，在用Ni-NTA 琼脂糖亲和层析的方法纯化蛋白，并用洗脱液[50 mM PIPES, 10% 蔗糖, 300 mM 咪唑, 50 mM KCl, 2 mM MgCl2, mM β-巯基乙醇, 0.1 mM ATP (pH 6.8) ]将蛋白洗脱下来。丙酮酸激酶-乳酸脱氢酶检测系统能够将ADP外露部分与NADH的氧机偶联，因此可以利用这个系统来测量ATPase的活性的稳定性。然后检测340 nm的吸光度变化。所有生化实验都在PEM25的缓冲液[25 mM Pipes/KOH (pH 6.8), 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA]中进行，而实验涉及微管时则需要另加10 μM SB 743921。可以用中止流仪器通过检测MANT-ATP荧光的减少来检测ADP的释放率。也可以用7-二乙氨-3-((((2顺丁烯二酰亚氨)乙烷基)氨基)羰基)香豆素(MDCC)染料修饰Pi，然后通过中止流仪器检测Pi的释放率。之后可以做出KSP抑制剂的剂量响应曲线，用酶浓度明确修正结果后，就可以估算出KSP抑制剂的Ki值。微管蛋白的聚合则可以通过检测340 nm处吸光度的变化来测量，反应体系为100-μL，在96孔板中进行，并将酶标仪的孵育温度设置成37°C

细胞实验

• Cell lines: HeLa 细胞
• Concentrations: 1 μM
• Incubation Time: 24 小时
• Method: 用含10% FCS的RPMI 1640培养基，在5% CO2的条件下培养包括HeLa细胞在内的所有细胞。在96孔微量滴定板中利用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium 我们检测了48小时内连续稀释的SB 743921对DMSO处理的细胞的生长抑制作用。将用DMSO处理的细胞的吸光度比率当成细胞的生长情况，绘制成浓度对应的四参数曲线。从拟合曲线中可以推测出细胞生长被抑制50%时的药物浓度。可以用碘化丙啶染色及流式细胞技术估测用1 μM SB 743921处理或不用SB 743921处理的HeLa细胞中的DNA含量。还可以用免疫荧光的技术来检测，首先用1 μM SB 743921处理HeLa细胞24小时，再用2% 甲醛固定，通透后再用 DM1-α, anti-γ-tubulin, 和 1 μg/mL 4′,6-diamidino-2-phenylindole染色，再用Alexa 488 secondary goat antirabbit IgG 和 Rhodamine-X goat antimouse IgG孵育，最后拍照得到免疫荧光结果的图片。图片是用DeltaVision Restoration Microscopy System放大600倍得到的。收集Z stacks (0.2 μm) 的结果并把模糊的信息通过约束迭代卷积去除掉。然后把Z stacks压缩成单像平面。

动物实验

• Animal Models: 携带淋巴球性白血病细胞P388的雌性BDF1小鼠
• Formulation: 2% 二甲基乙酰胺 + 2%聚氧乙烯蓖麻油 + 96% 酸化水 [pH 5.0]
• Dosages: 7.5 mg/kg- 30 mg/kg
• Administration: 腹腔注射