PH-797804是一种新型吡啶酮p38α抑制剂，无细胞试验中IC50为26 nM；比作用于p38β选择性高4倍以上，不抑制JNK2。

靶点

体外研究

PH-797804作用于人类单核U937细胞系，阻断LPS诱导的TNF-α产生和p38 激酶活性，IC50为5.9 和 1.1 nM。浓度高达1μM作用于U937 细胞，JNK 通路(c-Jun 磷酸化)或ERK 通路(ERK 磷酸化)观察不到抑制效果。PH-797804作用于原代大鼠骨髓细胞，抑制RANKL-和M-CSF诱导的破骨细胞形成，这种作用存在浓度依赖性,IC50=3 nM。PH-797804 作用于以下靶点的IC50 值大于200 μM: CDK2, ERK2, IKK1, IKK2, IKKi, MAPKAP2, MAPKAP3, MKK7 (>100μM), MNK, MSK (>164 μM), PRAK, RSK2, 及 TBK1,说明PH-797804的活性是特定的。

体内研究

Endotoxin全身给药大鼠和食蟹猴，引起的急性炎症反应可通过口服PH-797804得到有效抑制。PH-797804治疗模型疾病模型，处理10天，具有强大的抗炎活性，作用于链球菌细胞壁诱导的关节炎及大小鼠胶原诱导的关节炎，显著降低关节发炎和相关的骨质流失。剂量-反应分析显示作用于大鼠和食蟹猴的ED50分别为0.07 mg/kg和0.095 mg/kg。PH-797804作用于人类Endotoxin 挑战模型，抑制LPS诱导的TNF-α, IL-6, 和MK-2活性，这种作用存在剂量和浓度依赖性。

VX-702

MB4048

VX-745

MB1084

达马莫德;BIRB796

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0951 mL

10.4756 mL

20.9512 mL

5 mM

0.4190 mL

2.0951 mL

4.1902 mL

10 mM

0.2095 mL

1.0476 mL

2.0951 mL

50 mM

0.0419 mL

0.2095 mL

0.4190 mL

P38 激酶检测:
使用树脂捕获检测法测定p38 激酶引起的表皮生长因子受体肽(EGFRP)或GST-c-Jun 的磷酸化。反应混合物含25 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM 醋酸镁, ATP (按指定浓度), 0.05 到0.3 μCi [γ-33P]ATP, 0.8 mM 二硫苏糖醇, 及200 μM EGFRP 或 10 μM GST-c-Jun 用于p38α激酶反应。加入25 nM p38α 激酶反应开始，终体积为50 μl。p38α激酶反应在 25oC下进行30分钟。在这些条件下，p38α激酶的产物形成与时间成线性关系。反应停止，在900 mM 甲酸钠, pH 3.0中加入150 μl AG 1 × 8 离子交换树脂移除未反应的[γ-33P]ATP。一旦充分混合，溶液精致5分钟。50-μl含磷酸化的底物从混合物中移除，转移到96孔板中。每孔加入MicroScint-40 闪烁液(150 μl)，使用 TopCount NXT微板闪烁和发光计数器测定放射活性。

细胞实验

Cell lines: 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（S）

• Concentrations: —
• Incubation Time: —
• Method:

使用MTT法测定细胞活力。使用ELISA酶标仪在实验波长为570 nm，参考波长为630 nm的情况下测定吸光值。

动物实验

• Animal Models: LPS诱导的慢性炎症大鼠模型
• Formulation: PH-797804在0.5%甲基纤维素和0.025% Tween-20中制备成悬浮液
• Dosages: 0.001-1 mg/kg
• Administration: 口服饲喂