Necrostatin1

Necrostatin-1;Necrostatin1         
分子式:C13H13N3OS  分子量:259.33

简介: Necrostatin-1是一种有效,选择性和可渗透细胞的坏死性凋亡 (necroptosis) 抑制剂,它通过抑制坏死性凋亡途径中的死亡域受体激酶RIP (RIP1) 起作用。 

别名:Nec-1;4-Imidazolidinone, 5-(1H-indol-3-ylmethyl)-3-methyl-2-thioxo
物理性状及指标:
外观:………………淡黄色至黄色固体
溶解性:……………DMSO:51 mg/mL warmed (196.66 mM);Water Insoluble;Ethanol Insoluble
含量:………………>98%

储存条件: -20℃,避光防潮密闭干燥 

运输条件:2~8℃运输
生物活性

产品描述

Necrostatin-1是特异性的RIP1抑制剂,抑制TNF-α诱导的坏死,EC50为490 nM。

靶点

RIP1

IC50

490 nM (EC50)

体外研究

Necrostatin-1 (1-100 μM) 抑制过表达和内源性的RIP1发生自磷酸化。RIP1是初级细胞靶点,负责Necrostatin-1的抗细胞坏死活性。Necrostatin-1有效抑制多种类型细胞触发的坏死性细胞死亡。Necrostatin-1作为细胞坏死的小分子抑制剂, 作用于jurkat细胞,抑制RIP激酶的诱导细胞坏死,抑制TNF-α诱导的细胞坏死,EC50为490 nM。

特征

Necrostatin-1是抑制细胞坏死的有力工具。

用途及描述 :科研试剂,广泛应用于分子生物学,药理学等科研方面,严禁用于人体。 Necrostatin-1是特异性的RIP1抑制剂,抑制TNF-α诱导的坏死,本品可用于相关领域的科研实验。
储液配置

Necrostatin1

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.8561 mL

19.2805 mL

38.5609 mL

5 mM

0.7712 mL

3.8561 mL

7.7122 mL

10 mM

0.3856 mL

1.9280 mL

3.8561 mL

50 mM

0.0771 mL

0.3856 mL

0.7712 mL

经典实验操作(仅供参考)

激酶实验

RIP1 激酶检测:
RIP1 的磷酸化需要其激酶活性。FLAG标记的野生型(WT)或RIP1(K45M) 突变体失活激酶的表达结构转染到293T细胞中,在有[γ-32P]ATP存在时,RIP1激酶实验在30°C下进行30分钟。样品进行SDS-PAGE,通过放射自显影可观察到RIP1带。对放射性带的相对强度进行量化,并显示比率。在激酶反应的同时,珠样本使用anti-RIP1抗体进行Western Blot分析,确保与激酶反应中等量的蛋白。

细胞实验

  • Cell lines: Jurkat, BALB/c 3T3, SV40-转化的MEF, L929
  • Concentrations: 0.01-100 μM
  • Incubation Time: —
  • Method:

细胞接种在96孔板中(白色板进行发光检测;黑色板进行荧光检测;空白板进行MTT实验)贴壁细胞按每孔5000-10000个细胞的密度接种,悬浮细胞按每孔20,000-50,000个细胞的密度接种,孔中含100 μl合适的无酚红培养基。温育后,使用如下方法之一测定细胞存活率。ATP 实验中,使用购买的发光试剂盒,并使用Wallac Victor II酶标仪分析发光值。Sytox实验中,细胞与 1 μM Sytox Green试剂在37°C下温育30分钟,然后进行荧光读数。随后,增加5 μl 20% Triton X-100溶液到每孔中,产生最大溶解,细胞37°C下温育1小时,然后进行二次读数。Triton处理前和后,计算值的比率。MTT实验,使用CellTiter 96 AQueous 非放射性细胞增殖检测试剂盒。PI排除实验中, 加入2 μg/ml PI 到培养基中,立即使用FACSCalibur分析样品。PI-膜联蛋白V 实验中,使用ApoAlert Annexin V-EGFP 凋亡试剂盒。进行DioC6染色, 细胞与40 nM DiOC6 在37°C下温育30分钟, 洗涤一次,使用FACSCalibur分析。ROS分析中, 细胞与5 μM Dihydroethidium在37°C下温育30分钟, 洗涤一次,使用FACSCalibur分析。

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CAS 号:4311-88-0

英文名字:Necrostatin-1
质量标准:>98%,RIP1抑制剂
分子式:C13H13N3OS
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