德立替尼  E-3810是 VEGFR 和 FGFR 的双重抑制剂，有效和选择性地抑制VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，FGFR1，FGFR2，IC50分别为7 nM，25 nM，10 nM，17.5 nM，82.5 nM。

靶点

体内研究

与VEGFR和FGFR自身磷酸化的抑制活性一致，E-3810有效抑制VEGF和bFGF刺激的HUVEC增殖，IC50分别为40和50nM。 此外，E-3810还抑制CSF-1R，IC50为5 nM。 E-3810有效抑制FGFR2活性（Ki <0.05μM），随后是PDGFRα活性（Ki =0.11μM）。 对于DDR2，LYN，CARDIAK，CSBP（2），EPHA2和YES获得的Ki值在0.26和8μM之间。

体外研究

E-3810，连续7天口服20mg / kg，与载体处理的小鼠的反应相比，完全抑制（P <0.01）bFGF诱导的血管生成反应。 E-3810显示广谱活性，在所有测试的异种移植物（HT29结肠癌，A2780卵巢癌，A498，SN12K1和RXF393肾癌）中具有活性，具有剂量依赖性的肿瘤生长抑制。 E-3810显着延缓了治疗期间的生长，但是当治疗暂停时肿瘤恢复生长; 在少数情况下，观察到肿瘤消退。 以15mg / kg的剂量给予的E-3810的活性在MDA-MB-231乳腺癌上进行皮下移植，在肿瘤质量达到350至400mg的晚期进行。 该肿瘤异种移植物对E-3810非常敏感，在整个30天的治疗期间具有完全的肿瘤稳定性。 与其他肿瘤模型一样，肿瘤在撤出E-3810后以与对照肿瘤相似的速率再生长。

Foretinib (GSK1363089)

MB3943

Golvatinib (E7050)

MB3945

Ki8751

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2548 mL

11.2742 mL

22.5484 mL

5 mM

0.4510 mL

2.2548 mL

4.5097 mL

10 mM

0.2255 mL

1.1274 mL

2.2548 mL

50 mM

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• 基于辐射测量过滤器结合测定，使用“激酶分析仪”服务测量激酶选择性。 简而言之，使用对应于每种所选激酶的Michaelis-Menten常数（Km）的ATP浓度测试五种不同浓度的E-3810（0.1μM，0.3μM，1μM，3μM和10μM），如下所示。 条件[ATP] = Km，计算抑制剂的解离常数（Ki）的通式 – 即Ki = IC50×Km /（[ATP] + Km） – 可以简化为Ki = IC50 / 2。 因此，在我们的测定中，测量的IC 50与Ki成正比。 激酶抑制表示为在不存在抑制剂的情况下与在抑制剂存在下测定的活性百分比。 使用GraphPad Prism使用非线性回归分析来分析绘制效应百分比对E-3810的对数浓度的Sigmoid浓度 – 响应曲线以获得IC 50值，并且使用上述公式计算Ki值。

细胞实验

• 指数增长的HUVEC或NHI3T3细胞被播种到96孔板的密度3到6 103个细胞/ 100μL /在完全培养基。在没有血清饥饿的实验中，在播种后24小时内，细胞暴露于不同浓度的E-3810浓度的VEGF165 (50 ng/mL)或bFGF (20 ng/mL)配体下，72小时后通过MTS比色法评价药物的抗增殖作用。在血清饥饿条件下，去除播种完全培养基24小时后，PBS洗涤3轮后，细胞在1% BSA培养基中培养。18到24小时后，细胞被处理。指数增长的A2780、A498 SN12KI,HepG2细胞被播种到96孔板在3到5 103细胞/ 100μL /在完全培养基。24小时后用不同浓度的药物治疗72小时，用MTS评估抗增殖效果。

动物实验

• 小鼠
• MDA-MB-231荷瘤小鼠随机分组，其肿瘤质量约为350至400毫克，接受E-3810（15 mg / kg），Brivanib和舒尼替尼，用于抗肿瘤活性试验的剂量，持续10天。 在第7天的抗血管生成剂量后4小时，以20mg / kg的剂量静脉内注射紫杉醇，并且在所有组（每组包括3只动物）中在1,4和24小时后收集肿瘤和血浆样品。 在指定的取样时间，麻醉小鼠，从眼眶后丛收集血液到肝素化管中，分离血浆部分。 通过颈椎脱位杀死小鼠，切除肿瘤并快速冷冻。 通过高效液相色谱（HPLC）分析样品，在230nm下进行UV检测。