Aclidinium Bromide与人源毒蕈碱受体AChR M1， M2， M3， M4和M5结合，Ki值分别为0.1 nM， 0.14 nM， 0.14 nM， 0.21 nM和0.16 nM。

特性

近似等效于Tiotropium，对毒蕈碱受体亚型比Ipratropium有效8-16倍。

靶点

体外研究

[3H]Aclidinium与M2的同质受体结合，Kd为0.34 nM，Bmax为3.13 pmol/mg，与M3结合，Kd为0.34 nM，Bmax为3.13 pmol/mg。 Aclidinium (< 100 nM)剂量依赖性抑制乙酰胆碱诱导的离体豚鼠气管的收缩。在离体的豚鼠气管中，Aclidinium显示出起始作用，t1/2为6.8分钟，tmax为35.9分钟。 Aclidinium在所有物种的血浆样品中是水解的，37℃下，在大鼠，豚鼠，狗和人的血浆中，表观半衰期分别为11.7 分钟，38.3 分钟，1.8 分钟和2.4 分钟。 在人支气管成纤维细胞中，Aclidinium (0.1 μM)抑制乙酰胆碱和TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原上调，并抑制α-SMA mRNA和蛋白质表达。在人支气管成纤维细胞中，Aclidinium (0.1 μM)抑制TGF-β1诱导的ChAT表达上调。在人支气管成纤维细胞中，Aclidinium (0.1 μM)抑制乙酰胆碱和TGF-β1诱导的ERK1/2磷酸化作用和RhoA-GTP形成的增加。在人肺成纤维细胞中，Aclidinium预处理防止M1和M3的上调，但不影响乙酰胆碱或TGF-β1诱导的M2下调。在人肺成纤维细胞中，Aclidinium (0.1 μM)剂量依赖性抑制TGF-β1和乙酰胆碱诱导的细胞增殖。

体内研究

在麻醉的豚鼠体内，乙酰胆碱诱导的支气管收缩模型中，Aclidinium显示出起始作用，IC50 (95% CI)为140微克/毫升， tmax为30分钟。在有意识的比格犬体内，Aclidinium (500 微克/千克)给药1小时后诱导心率最大增加55%。在麻醉的豚鼠体内，超过120分钟的研究期间，Aclidinium (1 毫克/毫升)产生一个有效持久的气管保护作用(72%–88.4%)。

奥替溴铵

MB1620

罗库溴铵

MB4265

富马酸非索罗定

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7713 mL

8.8566 mL

17.7132 mL

5 mM

0.3543 mL

1.7713 mL

3.5426 mL

10 mM

0.1771 mL

0.8857 mL

1.7713 mL

50 mM

0.0354 mL

0.1771 mL

0.3543 mL

亲和力测试:
[3H]NMS 与表达人毒蕈碱受体亚型之一的细胞膜制剂结合，Aclidinium对不同人毒蕈碱受体亚型在平衡时的亲和力，通过其置换[3H]NMS的能力测定。对M1，M2，M3，M4，和M5受体膜制剂的蛋白质浓度分别为8.1微克/孔，10.0微克/孔，4.9微克/孔，4.5微克/孔，以及5.0微克/孔。对不同毒蕈碱受体亚型，这些测试在[3H]NMS浓度近似等于放射性配体解离常数(Kd)下进行。[3H]NMS的浓度，对M1和M4的测试为0.3 nM，对M2，M3，和M5的测试为1 nM。重复测定两份一系列拮抗剂浓度(10−14到10−5 M)以得到竞争曲线。非特异性结合在阿托品(1 μM)存在下测定。试验试剂溶解在测试结合缓冲液中(含有钙和镁的磷酸盐缓冲盐溶液)，总体积为200微升。室温下在96孔微量滴定板中培育2小时或6小时 (M1–M4和 M5，分别)，以确保达到平衡，将150微升等份反应液转移到GF/C滤板，用含有0.05%聚乙烯亚胺的清洗缓冲液(50 mM Tris，100 mM NaCl，pH 7.4)预处理1小时。结合的和游离的[3H]NMS通过快速真空过滤分离，随后用冰预冷的清洗缓冲液清洗4次。在加入30微升OptiPhase Supermix前，过滤器干燥30分钟，放射性通过MicroBeta Trilux微孔板闪烁计数器定量。

细胞实验

Cell lines: 人支气管成纤维细胞

• Concentrations: 100 nM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 人支气管成纤维细胞增殖，如先前概述，根据制造说明使用细胞增殖酶联免疫吸附测定BrdU试剂盒，由DNA合成时基于BrdU整合的比色免疫测定。细胞以3×103细胞/孔的密度接种在96孔板，并培育24小时。随后将细胞暴露在不同实验条件下。使用微孔板分光光度计定量490nm处的吸光度。增殖数据是指每孔BrdU标记的细胞DNA含量的吸光度值。刺激被表示为未处理的对照组基底生长的x倍的增殖。

动物实验

Animal Models: 比格犬

• Formulation: 气溶胶溶液
• Dosages: 500微克/千克
• Administration: 通过喷雾器给药