277.38

化学式

C15H19NO2S

CAS号

885434-70-8

稳定性

室温 powder

5 mg/mL

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

HJC0350 is a potent inhibitor of the Exchange Protein directly Activated by cAMP (EPAC) family member EPAC2. HJC0350 blocks EPAC2 in enzymatic and cell-based assays, with no detectable acitivity against EPAC1, or protein kinase A (PKA).

靶点

体外研究

HJC0350选择性阻断cAMP诱导的EPAC2激活，但是不抑制cAMP介导的PKA激活。在HEK293/EPAC2-FL细胞中，HJC0350也会抑制007-AM介导的细胞中EPAC2的激活。

MN-214是HMN-176的前体药物,改变了Plk1的细胞空间定位。

靶点

Polo样激酶(Plk)1

IC50

118 nM (IC50，作用于肿瘤细胞)

体外研究

HMN-214是口服药物前体，可快速转化为HMN-176。而HMN-214在体外的实验数据很少。然而, HMN-176为HMN-214的活性代谢形式,具有广谱抗癌活性，有效作用于多种癌细胞，包括 HeLa, PC-3, DU-145, MIAPaCa-2, U937, MCF-7, A549,和WiDr,平均IC50为118 nM。HMN-176 作用于耐药的人和鼠细胞系，包括P388/CDDP, P388/VCR, K2/CDDP,和 K2/VP-16时,具有毒性，IC50为143 nM–265 nM。3 μM HMN-176作用于HeLa细胞，使细胞周期停在G2/M 期。HMN-176 作用于抗Adriamycin的K2/ARS 细胞,抑制细胞生长，IC50 为2 μM。3 μM HMN-176下调多元抗药性基因(MDR1)的表达,因为NF-Y转录因子与 MDR1 启动子的结合被干扰。2.5 μM HMN-176 作用于人RPE1和CFPAC-1 细胞,延迟合适纺锤体装配检验点的形成。250 nM-2.5 μM HMN-176抑制减数分裂纺锤体装配。2.5 μM HMN-176 也抑制人中心体形成微管。这些结果说明 HMN-176 是通过干扰有丝分裂过程中中心体调节的MT装配而发挥抗癌活性。

体内研究

HMN-214是HMN-176 的口服药物前体，具有较高的口服吸收性。因此, 在体内实验时，用HMN-214 代替HMN-176。HMN-214按30 mg/kg剂量处理小鼠，不会引起明显的神经毒性。HMN-214 按10 mg/kg–20 mg/kg剂量作用于携带PC-3, A549, 和WiDr移植瘤的小鼠，抑制肿瘤生长。HMN-214 按10 mg/kg–20 mg/kg剂量作用于携带多元抗药性KB-A.1细胞的裸鼠模型，显著抑制MDR1 mRNA 表达。

特征

HMN-214 是HMN-176的口服药物前体， 是口服有效的Polo样激酶(Plk)1 抑制剂。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3559 mL

11.7794 mL

23.5588 mL

5 mM

0.4712 mL

2.3559 mL

4.7118 mL

10 mM

0.2356 mL

1.1779 mL

2.3559 mL

50 mM

–

–

–

体内Spisula卵母细胞纺锤体的装配:
为了用延时视频显微镜观察，10% v/v Spisulao卵母细胞悬浮液在过滤的海水中制备。加入溶于 DMSO的 HMN-214，终浓度为 0.25 μM, 在室温下温育10分钟，使用70 mM KCl激活卵母细胞。加入HMN-214或HMN-176 或DMSO制备适当浓度 KCl 储液，在终悬液中维持适当浓度。Oocyte卵母细胞悬液在载玻片上制备，使用Zeiss Axiophot偏振光显微镜，配备20X/0.50 NA物镜和Hamamatsu SIT-摄像机及联合Metamorph 图像处理软件进行检测。用于免疫荧光(IMF)研究, 在不同时间点(0, 4, 8, 16, 25, 35, 和 45 分钟),转移卵母细胞悬液等分到固定液 (0.6% Brij-58, 4% 甲醛, 100 mM PIPES, 5 mM EGTA, 1 mM MgCl2, 用NaOH调pH 为 6.8) 中，维持15分钟，在PBS中冲洗,然后在PBS中用 3% 牛血清蛋白进行“封锁”。为了观察微管，用原代大鼠α-tubulin抗体标记卵母细胞，在PBS中清洗,然后用抗鼠抗体联合的Alexa Fluor 488的二抗进行标记。在最后洗涤步骤之一中加入1 μg/mL Hoechst 33342，用于观察染色体。用Zeiss AxioImager Z1 系统，配备40X/1.3 NA 物镜，联合Axiovision软件观察卵母细胞。

细胞实验

• Cell lines: HeLa, PC-3, DU-145, MIAPaCa-2, U937, MCF-7, A549,和WiDr 细胞
• Concentrations: 0-10 μM, 溶于DMSO
• Incubation Time: 72小时
• Method: 细胞按每孔3×103-1×104个接种在96孔板上。第二天，加入 HMN-214或 HMN-176稀释液，温育72小时。通过MTT实验测定对细胞生长的抑制情况，获得IC50值。

动物实验

• Animal Models: 携带PC-3, A549,和WiDr移植瘤的雄性BALB/c裸鼠
• Formulation: 溶于0.5%甲基纤维素
• Dosages: 10 mg/kg-20 mg/kg
• Administration: 口服饲喂

358.18

化学式

C17H9Cl2N3O2

CAS号

302803-72-1

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

71 mg/mL (198.22 mM)

Ethanol

1 mg/mL (2.79 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

HPI-4 (Ciliobrevin A)是hedgehog通路的拮抗剂，抑制Shh诱导的Hh信号通路（Smo下游）的激活。

靶点

体外研究

HPI-4并不直接靶向Smo。它能抑制内源性Gli1和Gli2的活性，但并不直接作用于这些转录因子（GLIs）。HPI-4显著地抑制神经祖细胞的增殖，在小脑颗粒神经元前体细胞中减少细胞周期蛋白D1、Gli1、Gli2、N-Myc的转录本细胞水平。HPI-4通过干扰纤毛发生发挥作用。HPI-4的处理大大减少人类软骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。此外，HPI-4干扰HH信号通路所介导的纤毛发生、抑制原纤毛相关的蛋白IFT88的表达。HH下游效应分子GLI2受到抑制，阻止甲状旁腺素相关的蛋白，影响MAPK/ERK调节的基质金属蛋白酶（MMP2和MMP9）。

体内研究

在斑马鱼模型中，纤毛发生抑制剂HPI-4可有效阻止胰腺纤维化和破坏。

314.34

化学式

C17H18N2O4

CAS号

1429651-50-2

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

62 mg/mL (197.23 mM)

Ethanol

38 mg/mL warmed (120.88 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

HPOB是一种有效的，选择性 HDAC6抑制剂，IC50为56 nM，选择性比对其它HDACs高30多倍。

靶点

体外研究

在正常(HFS)和转化的(LNCaP，A549，和U87)细胞中，HPOB诱导α-微管蛋白，而对组蛋白没有作用，抑制细胞生长，而不抑制细胞活性。在HFS细胞中，HPOB增强etoposide，doxorubicin，或SAHA诱导的转化细胞死亡。在转化细胞中，HPOB也会通过凋亡通路增强etoposide诱导的转化细胞死亡。

体内研究

负荷CWR22人前列腺癌异种移植物的小鼠体内，HPOB (300 mg/kg/d i.p.)，与SAHA结合时，抑制已生成肿瘤的生长，而单独使用时，不产生显著的抑制作用。

HS-173 是强效的PI3Kα抑制剂，其IC50为0.8 nM。

特性

PI3Kα-选择性抑制剂。

靶点

体外研究

HS-173在T47D，SK-BR3，和MCF7细胞中表现出有效的抗增殖作用，IC50 分别为0.6，1.5，和7.8 μM。 HS-173完全抑制癌细胞系(Hep3B和SkBr3)中PI3K通路。此外，在体外试验中，HS-173通过影响细胞周期分布并激活半胱天冬酶诱导细胞凋亡，并阻断VEGF诱导的血管生成。 Sorafenib 和 HS-173联合治疗对胰腺癌细胞具有协同抗癌作用。

体内研究

HS-173减少小鼠体内血管形成。 HS-173显著减弱体内肝纤维化的发展，通过阻断PI3K/Akt信号。

740Y-P

MB4504

AZD8186

MB4351

PI-3065

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3671 mL

11.8354 mL

23.6709 mL

5 mM

0.4734 mL

2.3671 mL

4.7342 mL

10 mM

0.2367 mL

1.1835 mL

2.3671 mL

50 mM

0.0473 mL

0.2367 mL

0.4734 mL

PI3-激酶试验:

• PI3K试验使用激酶Glo Max发光激酶试剂盒进行，其量化PI3K反应产生的ADP的量。简而言之，活性PI3K (100 纳克)与化合物在激酶缓冲液(25 mM MOPS [pH 7.0], 5 mM MgCl2，和 1 mM EGTA)，和10微克l-α-磷脂酰肌醇(PI)中预培养5分钟。在加入PI之前，将其用超声处理缓冲液(25 mM MOPS [pH 7.0]，1 mM EGTA)在水中声处理20分钟，使其形成胶束。加入10 μM ATP启动反应，运行180分钟。为终止激酶反应，加入相同体积的Kinase-Glo Max缓冲液。10分钟后，板在GloMax板阅读器上读数进行发光检测。

细胞实验

• Cell lines: T47D，SK-BR3，MCF7 细胞
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞活性通过MTT试验测定。简而言之，T47D细胞接种于96孔板培育24小时。然后，除去培养基，细胞用DMSO处理作为对照，用不同浓度的抑制剂处理用于测定。DMSO在培养基中的终浓度≤0.1% (v/v)。细胞培养48小时后，每孔中加入20微升MTT溶液(5毫克/毫升)，在37℃下再培育4小时。形成的甲瓒晶体溶解在DMSO(100 微升/孔)中，恒定摇动5分钟。随后板在540nm下在酶标仪上读取。每个分析使用三个重复的孔。半数抑制浓度(IC50，定义为抑制50%细胞生长的药物浓度)通过剂量反应曲线评估。为评价化合物对细胞增殖的作用，MTT分析前，T47D细胞用化合物(0.1−100 μM)培养48小时。

动物实验

• Animal Models: CCl4-诱发的肝纤维化雄性 BALB/c 小鼠
• Formulation: 溶解于DMSO，然后混合(DMSO:PEG400:D.W. = 1:5:4).
• Dosages: ~20毫克/千克
• Administration: 口服给药

379.39

化学式

C20H18FN5O2

CAS号

934343-74-5

稳定性

3 years -20°C powder

75 mg/mL (197.68 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6358 mL

13.1791 mL

26.3581 mL

5 mM

0.5272 mL

2.6358 mL

5.2716 mL

10 mM

0.2636 mL

1.3179 mL

2.6358 mL

50 mM

0.0527 mL

0.2636 mL

0.5272 mL

NVP-HSP990（HSP990）是一种新型有效的选择性 HSP90抑制剂，对HSP90α/β的IC50分别为0.6 nM和0.8 nM。

特性

NVP-HSP990是口服有效的HSP90抑制剂，结构上与其他临床HSP90抑制剂不同。

靶点

体外研究

NVP-HSP990基于2-氨基-4-甲基-7,8-二氢吡啶[4,3-d]嘧啶-5(6H)-酮骨架，其结构与其它已知的HSP90抑制剂不同。NVP-HSP990与HSP90的ATP结合域N端结合。NVP-HSP990对三个HSP90亚型(HSP90α, HSP90β, 和GRP94)具有单位数毫摩尔级的IC50值，对第四个(TRAP-1)的IC50值为320 nM，其对不相关的酶，受体和激酶具有选择性。NVP-HSP990使HSP90-p23复合物游离，耗尽客户蛋白c-Met，并诱导c-Met放大的GTL-16胃肿瘤细胞中的Hsp70。NVP-HSP990有效抑制人细胞系和各种类型初级肿瘤的生长。NVP-HSP990显示出对HSP90客户蛋白的剂量和时间依赖性作用。NVP-HSP990抑制所有GIC系胶质瘤肿瘤起始细胞(GIC)的增殖，IC50值范围大约为10到500 nM之间。Olig2是与细胞分化有关的功能标记，并响应相关联的NVP-HSP990， 在Olig2高的GIC 系中，NVP-HSP990减弱胞增殖。此外，NVP-HSP990通过减少CDK2和CDK4，并增高凋亡相关的分子，破坏细胞周期控制机制

体内研究

NVP-HSP990呈现出类似药物的制药和药理学性能，具有较高的口服生物活性。在GTL-16异种移植模型中，单一口服给药15毫克/千克NVP-HSP990诱导持续的c-Met下调和Hsp70上调。在重复剂量研究中，NVP-HSP990处理导致GTL-16的肿瘤生长抑制，也会对其他被明确的致癌HSP90客户蛋白驱动的人肿瘤移植模型产生生长抑制

HSP90 结合，ATPase，和选择性试验:
HSP90对HSP90α，SP90β，和Grp94的抑制效能通过AlphaScreen竞争试验测定，对TRAP-1的活性通过ATPase试验测定。

细胞实验：

• Cell lines: GICs
• Concentrations: ~1 μM
• Incubation Time: 7天
• Method: 解离的GICs以10个细胞/微升接种于6孔板，并用不同浓度的NVP-HSP990培养7天。形成的肿瘤群解离为单个细胞，并使用0.2％的台盼蓝排除血细胞计数器计数。

动物实验：

• Animal Models: GTL-16，NCI-H1975，BT474，和 MV4;11 肿瘤异种移植裸鼠或SCID小鼠模型
• Formulation: 100% 聚乙二醇 polyethylene glycol (PEG400)
• Dosages: 15毫克/千克
• Administration: 口服

I-BET-762是一种BET (bromodomain and extra terminal domain)蛋白抑制剂， IC50约为35 nM，抑制巨噬细胞产生促炎蛋白，抑制急性炎症，对其他溴区结合域包含的蛋白具有高度的选择性。

靶点

BET proteins

IC50

35 nM

体外研究

I-BET-762抑制BET(溴区和额外的末端结构域) 蛋白, BRD2, BRD3 和 BRD4, 结合到BET的串联溴区，Kd为50.5-61.3 nM, 在FRET分析中，置换BET串联溴区的一种四乙酰化的H4肽，IC50为32.5-42.5 nM。I-BET-762占据BET蛋白的乙酰基-赖氨酸结合口袋，并抑制BET蛋白结合到乙酰化的组蛋白，从而破坏了炎性基因表达必不可少的染色质复合物的形成。分化过程中的第2天使用I-BET-762处理，改变CD4+T细胞的细胞因子产生，上调一些抗炎基因产物的表达，并下调一些促炎细胞因子的表达。

体内研究

I-BET-762保护防止脂多糖诱导的内毒素休克和细菌诱导的脓毒病。LPS注射后1.5小时，单剂量I-BET处理，可治愈小鼠。I-BET每日两次注射，持续2天，保护小鼠免于脓毒症引起的死亡。早期I-BET-762处理实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠模型，抑制Th1分化的2D2 T细胞诱发神经性炎症的能力。

I-BET151 (GSK1210151A)

MB3692

PFI-1 (PF-6405761)

MB4419

PLX51107

MB4243

RVX-208(RVX 000222)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3590 mL

11.7952 mL

23.5905 mL

5 mM

0.4718 mL

2.3590 mL

4.7181 mL

10 mM

0.2359 mL

1.1795 mL

2.3590 mL

50 mM

0.0472 mL

0.2359 mL

0.4718 mL

荧光共振能量转移（FRET）滴定:
在有四乙酰化的组蛋白H4肽（200 nM）存在时，在50 mM HEPES pH7.5, 50 mM NaCl, 0.5 mM CHAPS中进行对BRD2 (200 nM), BRD3 (100 nM) 和 BRD4 (50 nM)的I-BET滴定。平衡1小时后，在含0.05% (v/v) BSA 和 400 mM KF的实验缓冲液中加入2nM 铕穴状化合物标记的链霉亲和素和10 nM XL-665标记的anti-6His 抗体，使用FRET检测溴区蛋白：肽相互作用。使用Envision酶标仪（激发菠菜320 nm，发射波长615 nm和665 nm）对实验板进行读数。

细胞实验：

• Cell lines: CD4+ T 细胞
• Concentrations: ~500 nM
• Incubation Time: 60-72 小时
• Method: 从10到12周的小鼠淋巴结和脾中分离CD4+ T细胞，在指定细胞因子存在时，使用与板结合的anti-CD3和anti-CD28抗体活化。在最初激活的60-72小时，包含I-BET-762化合物。在T细胞培养和扩张的5天过程中，化合物稀释到初始浓度的12倍。

动物实验：

• Animal Models: 小鼠
• Formulation: 20% β-环糊精, 2% DMSO，溶于0.9%生理盐水
• Dosages: 30 mg/kg
• Administration: 静脉注射

描述

I-BET151 (GSK1210151A)是一种新型，选择性的BET抑制剂，作用于BRD2，无细胞试验中BRD3和BRD4，IC50分别为0.5 μM， 0.25 μM和0.79 μM。

特性

优化I-BET151，使其有效及选择性靶向作用于BET，同时增强体内药代动力学和终末半衰期，以使延长体内研究。

IC50 & Target

体外

I-BET151有效，选择性作用于多种不同蛋白类型，如COX-2, P450, Aurora B, GSK3β, PI3K-γ, GPCR, 离子通道，转运体。与I-BET762 (GSK525762A)类似, I-BET151 对BRD2, BRD3 和BRD4具有高的结合亲和力，Kd为0.02-0.1 μM,作用于人类外周血单核细胞（PBMC）和全血（WB）以及大鼠WB，显著抑制脂多糖刺激的IL-6细胞因子产生，IC50分别为0.16 μM, 1.26 μM, 和 1.26 μM。I-BET151(0.5 or 5 μM)作用于HL60核提取物，抑制BETs(BRD2, BRD3, BRD4, 和 BRD9)而非23种其他溴区蛋白结合到乙酰化的组蛋白肽。I-BET151有效作用于含不同 MLL融合的细胞系，如MV4;11, RS4;11, MOLM13, 和NOMO1 细胞， IC50为15-192 nM。一致的是，I-BET151完全消除MLL融合驱动的白血病（MOLM13）而非酪氨酸激酶激活（K562）驱动的白血病的菌落形成潜力。I-BET151也有效作用于液体培养和转化MLL-ENL或MLL-AF9的原代小鼠祖细胞的克隆形成实验。I-BET151作用于由不同的MLL融合（分别含MLL-AF9和MLL-AF4的MOLM13和MV4;11）而非K562细胞驱动的MLL融合细胞系，显著诱导细胞凋亡和G0/G1期停滞，可能是由于通过抑制BRD3/4，PAFc和SEC组分招募到转录起始位点（TSS），而抑制BCL-2，C-MYC和CDK6的转录。

体内

I-BET151每天按30 mg/kg剂量处理小鼠，显著抑制鼠类MLL-AF9和人类MLL-AF4白血病肿瘤生长，显著延长寿命。

激酶实验

荧光各向异性（FP）的配体位移检测:
所有组分溶解在50 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl和 0.5 mM CHAPS组成的Buffer中，BRD 2/3/4终浓度为75 nM，荧光配体为5 nM。在Greiner 384孔黑色的低量微孔板中，使用Micro Multidrop 将10 μL反应混合物加入到含100 nL各种浓度I-BET151或DMSO空白对照（1%最终）的孔中，并在黑暗中室温下平衡60分钟。使用 Envision (lex=485 nm，lEM=530 nm；Dichroic=505 nM)读取荧光各向异性。

细胞实验

• Cell lines: MV4;11, MOLM13, NOMO1, RS4;11, HEL, HL60 和 K562
• Concentrations: 溶于DMSO, 终浓度为~100 μM
• Incubation Time: 24,或72小时
• Method:

使用多种不同浓度I-BET151在384孔或96孔板中处理细胞24或72小时。细胞生长抑制实验中，实验板每孔中加入与细胞培养基同等体积的CellTiter-Glo试剂，震荡约2分钟，然后在Analyst GT 或EnVision酶标仪上读取化学发光信号。细胞增殖实验中，每孔加入CellTiter-Aqueous One，然后实验板在37°C下温育4小时。在SpectraMax Gemini酶标仪上490 nm处读取吸光度。 
(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 静脉注射MV4;11细胞的NOD-SCID小鼠,静脉注射MLL-AF9细胞的C57BL/6小鼠 
Formulation: 溶于含5% (v/v) DMSO和10% (w/v) Kleptose HPB的生理盐水中 
Dosages: ~30 mg/kg/day
Administration: 腹腔注射
(Only for Reference)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4071 mL

12.0354 mL

24.0709 mL

5 mM

0.4814 mL

2.4071 mL

4.8142 mL

10 mM

0.2407 mL

1.2035 mL

2.4071 mL

50 mM

0.0481 mL

0.2407 mL

0.4814 mL

I-BRD9 (GSK602)是一种有效的、选择性BRD9抑制剂，其pIC50为7.3。针对BRD4，其pIC50为5.3。

IC50 & Target

体外

I-BRD9是通过结构药物设计方法鉴定出来的，其选择性比对BET家族高700多倍以上，比对高度同源的BRD7高200倍以上。I-BRD9在 Kasumi-1细胞中被用来鉴定受BRD9调控、参与肿瘤、免疫反应途径的相关基因。

OF-1

MB3603

PF-CBP1 HCl

MB4243

RVX-208(RVX 000222)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0098 mL

10.0492 mL

20.0985 mL

5 mM

0.4020 mL

2.0098 mL

4.0197 mL

10 mM

0.2010 mL

1.0049 mL

2.0098 mL

50 mM

0.0402 mL

0.2010 mL

0.4020 mL