Ki8751是有效的，选择性VEGFR2抑制剂，IC50为0.9 nM, 作用于VEGFR2比作用于c-Kit, PDGFRα和FGFR-2选择性高40倍以上,对EGFR, HGFR和 InsR没有抑制活性。

靶点

VEGFR-2

PDGFRα

c-Kit

IC50

0.9 nM

67 nM

40 nM

体外研究

Ki8751 有效且选择性抑制VEGFR-2，IC50为0.9 nM。Ki8751也抑制 PDGFRα,c-Kit,和 FGFR-2,具有更高的IC50值(40 nM–170 nM)。除了以上激酶, Ki8751不会抑制其他激酶，包括 HGFR, EGFR,和 InsulinR,即使浓度为 10 μM。1 nM–100 nM Ki8751作用于人类人脐静脉内皮细胞(HUVECs), Ki8751(1 nM–100 nM) 有效降低VEGF刺激的细胞增殖和血管通透性。10 nM Ki8751作用于转移性结肠直肠癌(CRC) 细胞MIP, RKO, SW620, 和SW480, 而不是HCT116,促进细胞衰老。

体内研究

Ki8751 按20 mg/kg 剂量作用于携带GL07, St-4, LC6, DLD-1, 和A375人类移植瘤的小鼠，抑制肿瘤生长。Ki8751按5 mg/kg剂量作用于携带LC-6移植瘤的裸鼠，完全抑制肿瘤生长，且不影响鼠体重。

特征

Ki8751是新型有效的血管内皮生长因子受体-2 (VEGFR-2)选择性抑制剂。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1303 mL

10.6517 mL

21.3033 mL

5 mM

0.4261 mL

2.1303 mL

4.2607 mL

10 mM

0.2130 mL

1.0652 mL

2.1303 mL

50 mM

0.0426 mL

0.2130 mL

0.4261 mL

细胞激酶实验:
通过转染人类KDR获得NIH3T3 细胞。细胞按每孔1.5×104个培养在I型胶原包被的96孔板上。用含0.1% FCS的DMEM培养基更换原来培养基。Ki8751在DMSO中稀释，加到每孔中，然后培养。加入rhVEGF，终浓度为100 ng/mL,在37oC下对细胞进行刺激处理。用PBS(pH 7.4)冲洗细胞, 加入50 μL增溶缓冲液 (20 mM HEPES (pH 7.4), 150 mM NaCl, 0.2% Triton X-100, 10% 甘油, 5 mM Na3VO4, 5 mM乙二胺四乙酸钠, 和2 mM Na4P2O7)，制备细胞抽提物。另外, 50 μL含5 μg/mL 抗磷酸酪氨酸抗体(PY20)的PBS (pH 7.4) 加到孔板上，用于进行ELISA。板冲洗后, 加入300 μL阻断溶液。然后细胞抽提物转移到板上。加入 anti-VEGFR-2抗体和过氧化物酶标记的兔免疫球蛋白抗日。加入过氧化物酶的发色底物，使用读数板在450 nm 处测定吸光值。测定每孔的VEGFR-2磷酸化活性。测定抑制 VEGFR-2 磷酸化的浓度，计算IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: HUVECs
• Concentrations: 1 nM-100 nM
• Incubation Time: 1小时
• Method:

为了测评Ki8751抑制VEGF刺激的HUVEC增殖效果, HUVECs按每孔4000个细胞接种在I型胶原预包被的96孔板上，每孔为200 μL。24小时后, 用Ki8751处理细胞1小时，然后用20 ng/mL rhVEGF刺激处理。然后在37oC下温育72小时，然后每孔用 1 μCi[3H]胸甘进行脉冲处理，然后再温育14小时。进行细胞实验使用液体闪烁计数器测定氚的渗透率。