Pictilisib (GDC-0941) 是一种有效的PI3Kα/δ抑制剂，在无细胞试验中IC50为 3 nM，对p110β (11倍)和p110γ (25倍)具有适度的选择性。

靶点

体外研究

GDC-0941也等效作用于PI3Kα和 PI3Kδ和PI3Kα突变型E545-K和H1047-R,也选择性作用于PI3Kβ(10倍)和 PI3Kγ(25倍), 选择性更高地作用于PI3K II, III, 和IV类成员，包括, C2β, Vps34, DNA-PK和mTOR。GDC-0941 作用于U87MG, PC3, 和 MDA-MB-361 细胞，有效抑制Akt磷酸化，IC50分别为46 nM, 37 nM,和 28 nM。GDC-0941抑制U87MG, A2780, PC3, 和MDA-MB-361细胞增殖，IC50分别为 0.95 μM, 0.14 μM, 0.28 μM, 和0.72 μM。GDC-0941处理，有效抑制对Trastuzumab敏感和不敏感的HER2扩增细胞增殖，IC50为149-944 nM,与 Trastuzumab敏感性无关。GDC-0941抑制含PIK3CA突变的HER2扩增的细胞增殖，IC50<500 nM, 且有效抑制抗trastuzumab 的HER2 扩增乳腺癌细胞增殖和活力。GDC-0941 显著抑制HCT116, DLD1和 HT29细胞生长，GI50分别为1081 nM, 1070 nM 和157 nM。

体内研究

在微粒体中，GDC-0941仅有有限的代谢，其口服生物利用度为78%。GDC-0941 每天按 75 mg/kg剂量处理携带人U87MG 恶性胶质移植瘤的雌性NCr无胸腺小鼠，显著抑制生长，肿瘤生长抑制率为 83%。GDC-0941 每天按 150 mg/kg剂量口服处理携带HER2扩增的抗Trastuzumab的MDA-MB-361.1移植瘤 的小鼠，抑制肿瘤生长，且显著延迟肿瘤衰退，与肿瘤中强诱导型凋亡相关。GDC-0941 每天按75 mg/kg剂量处理携带自发性B细胞滤泡性淋巴瘤的PTEN+/-LKB1+/hypo小鼠，持续2周，诱导肿瘤体积下降~40%，伴随着AKT, S6K 和SGK(血清和糖皮质激素蛋白激酶)蛋白激酶的磷酸化被切除。GDC-0941抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡和抑制中心母细胞数。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9469 mL

9.7344 mL

19.4689 mL

5 mM

0.3894 mL

1.9469 mL

3.8938 mL

10 mM

0.1947 mL

0.9734 mL

1.9469 mL

50 mM

0.0389 mL

0.1947 mL

0.3894 mL

闪烁接近检测:
使用p85α调节亚基，使重组人PI3Kα, PI3Kβ, 和PI3Kδ在 Sf9 杆状病毒系统中共表达，在谷胱甘肽-琼脂糖凝胶上进行亲和层析而纯化GST-融合蛋白。重组人 PI3Kγ表达作为单体 GST融合，也想上述相似方法纯化。GDC-0941 溶于DMSO，加到含200 μg硅酸钇(Ysi) 聚赖氨酸SPA 磁珠, 4 mM MgCl2, 1 mM 二硫苏糖醇 (DTT), 1 μM ATP, 0.125 μCi [γ-33P]-ATP, 和4% (v/v) DMSO的20 mM Tris-HCl (pH 7.5)上，总体积为 50 μL。PI3Kα (5 ng), PI3Kβ(5 ng), PI3Kδ(5 ng), 或PI3Kγ(5 ng)的重组GST-融合 ，加到实验混合物中，开始激酶反应。在室温下温育1小时后, 加入150 μL PBS终止反应。混合物在2000 rpm 转速下离心2分钟，然后使用Wallac Microbeta计数器读数。在 MDL Assay Explorer系统中使用S型，剂量-反应曲线，计算进行至少2次独立重复实验，取平均值，作为IC50值。

细胞实验

• Cell lines: SKBR-3, BT474-M1, AU-565, HCC-1419, ZR75-30, KPL-4, JIMT-1, BT474-EEI, HCC-1954, MCF-7, CALU-3, SKOV-3, 和MKN-7
• Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为~10 μM
• Incubation Time: 48,和72小时
• Method:

使用不同浓度 GDC-0941处理细胞48,和 72小时。通过CellTiter-Glo Luminescent细胞活性检测实验测定细胞增殖/活力。通过Western Blot分析pAKT (Ser473), cleaved caspase-3, 和cleaved PARP通过 Caspase-Glo 3/7实验和细胞死亡检测 ELISAplus 实验分别测定caspase 3/7活性, 和凋亡。

动物实验

• Animal Models: 移植MDA-MB-361.1细胞的NCR裸鼠, 皮下移植BT474-M1 细胞的SCID, C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid 小鼠
• Formulation: 溶于10% DMSO, 5% Tween-20, 85% 水
• Dosages: ~150 mg/kg/day
• Administration: 口服饲喂