CCT007093 是强效的PPM1D (WIP1)抑制剂，其IC50为 8.4 μM。

靶点

体外研究

CCT007093选择性有效抑制过表达PPM1D的人肿瘤细胞系(MCF-7，KPL-1，和MCF-3B)。CCT007093通过激活p38激酶的活性诱导细胞死亡。CCT007093与紫杉醇结合，对4种耐紫杉醇的三重阴性乳腺癌(TNBC)细胞系产生协同抑制作用。CCT007093选择性促进乳腺癌细胞和皮肤转化的异位表达Wip1的角质细胞的细胞凋亡， 同时减弱皮肤角质细胞和Wip1裸细胞模型中UV介导的凋亡应答。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.6712 mL

18.3560 mL

36.7121 mL

5 mM

0.7342 mL

3.6712 mL

7.3424 mL

10 mM

0.3671 mL

1.8356 mL

3.6712 mL

50 mM

–

–

–

体外磷酸酶试验:
重组PPM1D (20-50 pmol)在Tris缓冲液(50 mM，pH 8)，NaCl (100 mM)，β-巯基乙醇 (1 mM) 或 DTT (1 mM) 中稀释，并用MnCl2 (0, 1, 10 and 20 mM) 或MgCl2 (0 和 40 mM)处理。在适当情况下，加入抑制剂PPM1D(10-50 μM)，试验混合物在室温下培育30分钟。然后加入重组磷酸化的P38 (200 pmol)，混合物在37℃下培育1小时。反应通过加入过量乙二胺四乙酸(EDTA)淬灭，十二烷基硫酸钠样品装载缓冲液，并在95℃下煮沸5分钟，然后凝胶电泳并蛋白免疫印记法测定。

细胞实验：

• Cell lines: MCF-7，KPL-1，和 MCF-3B 细胞
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 14天
• Method: 细胞用pSUPER质粒转染，额外的质粒表达，杀稻瘟素耐药基因(pEFBsd)摩尔比为10:1。将细胞接种在10厘米板中，转染24小时后。杀稻瘟素选择(5 微克/毫升)在转染48小时后起始，每3天重新加满。菌落固定在甲醇中，14天后用结晶紫着色。将菌落在Colcount上定量，测定存活比率(SF)。