国家卫生健康委员会、国家市场监管总局发布关于《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》(GB 29921-2021)等17项食品安全国家标准和1项修改单的公告。其中GB 5009.265-2021《食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定》代替GB 5009.265-2016《食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定》，于2022年03月07日实施。
GB 5009.265-2021与GB 5009.265-2016相比，主要变化如下：
——将原第二法气相色谱-质谱法修订为第一法，修改了测定项目、样品前处理、气相色谱质谱条件、计算方法等；
——将原第一法高效液相色谱法修订为第二法，修改了序号，简化了原理，统一了试样制备。
多环芳烃化合物(PAHs)是一类由2个或2个以上苯环稠合而成的有毒化合物，种类繁多，具有较强致癌作用。食品在高温烘烤熏制，粮谷、植物油和奶粉原料在生产过程中工艺、技术设备及运输过程中受环境污染等原因，都会导致最终含有一定量的多环芳烃，经食用后对人体造成极大危害。
《GB 5009.265-2021 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定》于2022年3月7日实施，迪马科技参考标准第一法，建立了食品中16种多环芳烃的检测，采用ProElut DVB小柱净化，DM-PAH多环芳烃分析专用毛细柱分离检测，定量限与标准方法一致，回收率结果良好。
本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。
1、适用范围
本方案适用于大米粉、猪肉、植物油和婴幼儿配方奶粉中苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、䓛、5-甲基䓛、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘的检测。
定量限：大米粉、猪肉为1.0 μg/kg；植物油为2.0 μg/kg；婴幼儿配方奶粉为0.5 μg/kg。
2、标准品配制
(1). 多环芳烃标准储备液10 μg/mL(溶剂：环己烷)：Cat# 47801。
(2). 多环芳烃标准中间液2.5 μg/mL：吸取多环芳烃标准储备液10 μg/mL 2.5 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
(3). 多环芳烃标准中间液1.0 μg/mL：吸取多环芳烃标准储备液10 μg/mL 1.0 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
(4). 多环芳烃标准中间液500 ng/mL：吸取多环芳烃标准储备液10 μg/mL 0.5 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
(5). 多环芳烃标准中间液200 ng/mL：吸取多环芳烃标准储备液10 μg/mL 0.2 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
(6). 多环芳烃标准中间液100 ng/mL：吸取多环芳烃标准储备液10 μg/mL 0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
(7). 多环芳烃内标储备液100 μg/mL(溶剂：环己烷)：Cat# 47802(D12-苯并[a]蒽、D12-䓛、D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-c,d]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[g,h,i]苝)
(8). 多环芳烃内标中间液200 ng/mL：吸取多环芳烃内标储备液100 μg/mL 0.02 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀。
3、提取
3.1 大米粉
称取5 g样品于50 mL离心管中，加入100 μL多环芳烃内标中间液200 ng/mL，振荡混合后静置30 min，加入5 g无水硫酸钠、20 mL乙酸乙酯-正己烷(1:1)，涡旋提取1 min，超声振荡提取15 min，6000 rpm离心2 min，收集全部上清液至15 mL预称重的离心管中，45 ℃水浴下氮气吹干溶剂得提取物，称重，计算提取物质量，提取物待皂化。
若提取物质量大于1 g，则称出1 g提取物，置于另一15 mL具塞离心管中待皂化。
3.2 猪肉
称取5 g样品于50 mL离心管中，加入100 μL多环芳烃内标中间液200 ng/mL，振荡混合后静置30 min，加入20 g无水硫酸钠，用金属角匙搅拌分散，加入20 mL乙酸乙酯-正己烷(1:1)，涡旋提取1 min，超声振荡提取15 min，6000 rpm离心2 min，收集全部上清液至15 mL预称重的离心管中，45 ℃水浴下氮气吹干溶剂得提取物，称重，计算提取物质量，提取物待皂化。
若提取物质量大于1 g，则称出1 g提取物，置于另一15 mL具塞离心管中待皂化。
3.3 植物油
称取1 g样品于15 mL离心管中，加入100 μL多环芳烃内标中间液200 ng/mL，待皂化。
3.4 婴幼儿配方奶粉
称取2 g样品于50 mL离心管中，加入100 μL多环芳烃内标中间液200 ng/mL，加10 mL水，涡旋溶解，加2 mL氨水充分混匀，在65 ℃水浴中放置10 min，取出冷却至室温。加入10 mL无水乙醇，缓慢混匀，加入8 mL无水乙醚，涡旋振荡5 min，再加入8 mL石油醚(沸程为30 ℃~60 ℃)，涡旋振荡5 min，10000 rpm离心5 min，收集全部上清液至15 mL预称重的离心管中，45 ℃水浴下氮气吹干溶剂得提取物，称重，计算提取物质量，提取物待皂化。
4、皂化
4.1 提取物质量小于或等于0.2 g(大米粉、奶粉)，加5 mL 0.3 mol/L氢氧化钾乙醇溶液，涡旋混匀，室温放置 5 min，加4 mL水、5 mL正己烷，涡旋提取2 min，6000 rpm离心2 min，上层正己烷提取液待净化。
4.2 提取物质量在0.2 g~1.0 g之间(猪肉)，加入5 mL 1.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液，加盖涡旋混匀，放置70 ℃水浴中进行皂化3 min。皂化完成取出用自来水冷却至室温，加4 mL水、5 mL正己烷，涡旋提取2 min，6000 rpm离心2min，上层正己烷提取液待净化。
4.3 植物油试样中加入5 mL 1.5 mol/L氢氧化钾乙醇溶液，加盖涡旋混匀，放置70 ℃水浴中进行皂化3 min。皂化完成取出用自来水冷却至室温，加4 mL水、5 mL正己烷，涡旋提取2 min，6000 rpm离心2min，上层正己烷提取液待净化。
注:苯并[c]芴对碱不稳定,测定苯并[c]芴时，皂化时间视油脂质量而定，以1 g提取物皂化3 min按比例折算
5、净化——ProElut DVB 300 mg/6 mL (Cat.#: 65952)
|
(1)活化： |
依次用3 mL二氯甲烷、3 mL正己烷活化； |
|
(2)上样： |
加入待净化液，弃去流出液；控制流速1 mL/min； |
|
(3)淋洗： |
用5 mL正己烷淋洗，弃去流出液，控制流速1 mL/min； |
|
(4)洗脱： |
加入5 mL二氯甲烷-乙酸乙酯(1:1)，接收全部流出液，控制流速1 mL/min； |
|
(5)重新溶解： |
将流出液在40 ℃水浴下氮气吹干，冷却，加0.1 mL正己烷涡旋溶解残留物，并转移至锥底进样瓶中，供GC-MS测定。 |
6、分析条件
色谱柱：DM-PAH,30 m x 0.25 mm x 0.25 μm (Cat.# 8862)
进样口温度：320 ℃
升温程序：初始温度80 ℃，保持0.5 min，以15 ℃/min升温至220 ℃，再以4 ℃/min升温至330 ℃，保持15 min。
载气：氦气
恒流模式，2.0 mL/min
进样方式：不分流进样
进样量：1.0 μL
离子源温度：230 ℃
接口温度：280 ℃
溶剂延迟：12 min
电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1
表1 选择离子监测组表
|
通道 |
起始时间(min) |
结束时间(min) |
选择离子(m/z) |
|
1 |
15.00 |
16.00 |
213,215,216 |
|
2 |
18.50 |
20.00 |
224,226,227,228,229 |
|
3 |
21.00 |
22.50 |
239,241,242 |
|
4 |
24.00 |
27.50 |
250,252,253 |
|
5 |
31.00 |
34.00 |
274,276,277,278,279 |
|
6 |
37.00 |
42.00 |
300,302,303 |
表2 多环芳烃及相应内标GC-MS测定参考保留时间和监测离子
|
序号 |
名称 |
保留时间 min |
定量 离子 |
定性 离子 |
定量内标 |
内标保留时间 min |
内标 定量离子 |
内标 定性离子 |
|
1 |
苯并[c]芴 |
15.34 |
216 |
213、215 |
D12-苯并[a]蒽 |
18.83 |
240 |
236 |
|
2 |
苯并[a]蒽 |
18.95 |
228 |
226、229 |
||||
|
3 |
环戊并[c,d]芘 |
19.26 |
226 |
224、227 |
D12-䓛 |
19.19 |
240 |
236 |
|
4 |
䓛 |
19.33 |
228 |
226、229 |
||||
|
5 |
5-甲基䓛 |
21.41 |
242 |
239、241 |
||||
|
6 |
苯并[b]荧蒽 |
24.43 |
252 |
250、253 |
D12-苯并[b]荧蒽 |
24.29 |
264 |
260 |
|
7 |
苯并[k]荧蒽 |
24.55 |
252 |
250、253 |
||||
|
8 |
苯并[j]荧蒽 |
24.68 |
252 |
250、253 |
||||
|
9 |
苯并[a]芘 |
26.45 |
252 |
250、253 |
D12-苯并[a]芘 |
26.32 |
264 |
260 |
|
10 |
茚并[1,2,3-c,d]芘 |
31.60 |
276 |
274、277 |
D12-茚并[1,2,3-c,d]芘 |
31.47 |
288 |
284 |
|
11 |
二苯并[a,h]蒽 |
31.63 |
278 |
276、279 |
D14-二苯并[a,h]蒽 |
31.56 |
292 |
288 |
|
12 |
苯并[g,h,i]苝 |
33.06 |
276 |
274、277 |
D12-苯并[g,h,i]苝 |
32.92 |
288 |
284 |
|
13 |
二苯并[a,l]芘 |
37.67 |
302 |
300、303 |
||||
|
14 |
二苯并[a,e]芘 |
39.18 |
302 |
300、303 |
||||
|
15 |
二苯并[a,i]芘 |
40.07 |
302 |
300、303 |
||||
|
16 |
二苯并[a,h]芘 |
40.56 |
302 |
300、303 |
7、添加回收结果
|
目标化合物 |
回收率(%)内标法计算 |
|||||||
|
大米粉 |
猪肉 |
植物油 |
婴幼儿配方奶粉 |
|||||
|
添加水平 1.0 μg/kg |
添加水平 5.0 μg/kg |
添加水平 1.0 μg/kg |
添加水平 5.0 μg/kg |
添加水平 2.0 μg/kg |
添加水平 10 μg/kg |
添加水平 0.5 μg/kg |
添加水平 2.5 μg/kg |
|
|
多环芳烃 中间液 500 ng/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 2.5 μg/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 500 ng/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 2.5 μg/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 200 ng/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 1.0 μg/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 100 ng/mL 加10 μL |
多环芳烃 中间液 500 ng/mL 加10 μL |
|
|
苯并[c]芴 |
69.71 |
74.94 |
81.78 |
85.26 |
77.15 |
80.53 |
98.88 |
90.10 |
|
苯并[a]蒽 |
111.69 |
106.45 |
101.45 |
101.15 |
101.80 |
112.57 |
97.70 |
106.05 |
|
环戊并[c,d]芘 |
112.79 |
107.31 |
115.95 |
112.34 |
117.30 |
97.81 |
110.40 |
121.16 |
|
䓛 |
134.65 |
109.76 |
116.22 |
120.35 |
146.61 |
126.83 |
119.63 |
109.45 |
|
5-甲基䓛 |
109.12 |
105.30 |
105.18 |
121.20 |
101.18 |
104.99 |
92.58 |
106.32 |
|
苯并[b]荧蒽 |
104.76 |
110.61 |
108.26 |
105.74 |
103.44 |
116.52 |
108.48 |
108.62 |
|
苯并[k]荧蒽 |
121.50 |
116.73 |
108.14 |
111.91 |
100.58 |
103.40 |
107.80 |
94.64 |
|
苯并[j]荧蒽 |
110.71 |
108.75 |
98.18 |
103.85 |
113.42 |
108.75 |
112.94 |
91.88 |
|
苯并[a]芘 |
106.80 |
100.13 |
108.81 |
105.33 |
104.71 |
112.75 |
98.88 |
108.00 |
|
茚并[1,2,3-c,d]芘 |
107.42 |
105.11 |
104.50 |
108.20 |
129.60 |
112.40 |
101.76 |
99.68 |
|
二苯并[a,h]蒽 |
110.92 |
95.91 |
97.21 |
107.18 |
97.38 |
108.50 |
101.12 |
103.52 |
|
苯并[g,h,i]苝 |
113.50 |
105.44 |
101.65 |
104.43 |
117.50 |
109.74 |
111.00 |
104.19 |
|
二苯并[a,l]芘 |
123.56 |
137.39 |
136.03 |
144.43 |
136.41 |
108.28 |
145.66 |
106.08 |
|
二苯并[a,e]芘 |
149.04 |
134.34 |
138.36 |
139.95 |
135.33 |
108.65 |
136.24 |
117.37 |
|
二苯并[a,i]芘 |
139.46 |
130.71 |
137.22 |
139.33 |
116.60 |
121.51 |
139.50 |
125.02 |
|
二苯并[a,h]芘 |
122.64 |
130.32 |
130.41 |
136.52 |
114.71 |
107.37 |
136.42 |
135.66 |
16种多环芳烃标准溶液(100 ng/mL)TIC图(内标法)
%e5%9b%be.png)
DM-PAH多环芳烃分析专用柱，分离二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘的XIC(m/z 302)图
%e5%9b%be.png)
国标方法中推荐的DB-EUPAH，分离二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘的XIC(m/z 302)图
8、讨论
多环芳烃分析专用柱：DM-PAH, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm (Cat.# 8862)，对16种PAHs表现出良好的惰性和选择性。DM-PAH多环芳烃分析专用柱应用于16种多环芳烃化合物的分离效果、峰形以及柱效上稍优于国标方法中推荐的DB-EUPAH毛细管柱(柱长20 m，内径0.18 mm，膜厚0.14 μm)。尤其以最后四个物质更为明显。
相关产品信息
|
产品描述 |
规格 |
货号 |
|
标准品 |
||
|
16种多环芳烃混标 (GB 5009.265-2021 第一法) |
10 μg/mL溶于环己烷，1 mL/安瓿 |
47801 |
|
7种多环芳烃内标混标 (GB 5009.265-2021 第一法) |
100 μg/mL溶于环己烷，1 mL/安瓿 |
47802 |
|
16种多环芳烃混标 (GB 5009.265-2021 第二法) |
200 μg/mL溶于乙腈，1 mL/安瓿 |
46960 |
|
样品前处理 |
||
|
无水硫酸钠 (第一法) |
ProElut Na2SO4 500 g |
65584 |
|
固相萃取小柱(聚苯乙烯-二乙烯苯聚合物)或等效净化柱: 6 mL, 300 mg (第一法) |
ProElut DVB 300 mg/6 mL 30/pk |
65952 |
|
N-丙基乙二胺(PSA): 粒径40 μm (第二法) |
ProElut PSA 10 g |
63281 |
|
封尾C18固相萃取填料: 粒径40 μm ~ 63 μm (第二法) |
ProElut C18 10 g |
63181 |
|
弗罗里硅土固相萃取柱: 500 mg, 3 mL (第二法) |
ProElut Florisil 500 mg / 3 mL 50/pk |
65004 |
|
12管防交叉污染真空SPE萃取装置 |
12位 |
244358 |
|
考克 (控制流量) |
15/pk |
4806 |
|
真空/正压两用泵, 无油 |
1/pk |
99011 |
|
抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米, 2 L抽滤瓶及橡胶塞) |
1/pk |
99013 |
|
色谱分析 |
||
|
DB-EUPAH 毛细管柱 20 m x 0.18 mm x 0.14 μm (第一法) |
DM-PAH 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm |
8862 |
|
高纯试剂 |
||
|
乙酸乙酯 HPLC级 |
4 L |
50104 |
|
二氯甲烷 HPLC级 |
4 L |
50117 |
|
无水乙醇 HPLC级 |
4 L |
50108 |
|
环己烷 HPLC级 |
4 L |
50103 |
|
正己烷 HPLC级 |
4 L |
50115 |
|
异辛烷 HPLC级 |
4 L |
50109 |
|
乙腈 HPLC级 |
4 L |
50101 |
|
通用消耗品 |
||
|
有机相型微孔滤膜: 0.22 μm |
FitMax PTFE 13 mm 0.22 μm 100/pk |
30043 |
|
瓶架/白色 |
50 孔 |
52401A |
|
瓶架/蓝色 |
50 孔 |
52401B |
|
样品瓶 (棕色/螺纹) |
2 mL, 100/pk |
1034 |
|
样品瓶盖/含垫 (已经组装) |
100/pk |
1035 |
|
GC 进样针 |
5 μL, 尖头 |
H87900 |
|
HPLC 进样针 |
25 μL, 平头 |
H80645 |
红色产品货号#30043、#1034、#1035火热促销中……
16种多环芳烃混标（GB 5009.265-2021 第一法）
适用于GB 5009.265-2021 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定 第一法 气相色谱-质谱法，10 μg/mL在环己烷中， 1 mL/安瓿，Cat. No.: 47801
|
序号 |
中文名称 |
英文名称 |
CAS |
|
1 |
苯并[c]芴 |
Benzo[c]fluorene |
205-12-9 |
|
2 |
苯并[a]蒽 |
Benz[a]anthracene |
56-55-3 |
|
3 |
环戊并[c,d]芘 |
Cyclopenta[c,d]pyrene |
27208-37-3 |
|
4 |
䓛 |
Chrysene |
218-01-9 |
|
5 |
5-甲基䓛 |
5-Methylchrysene |
3697-24-3 |
|
6 |
苯并[b]荧蒽 |
Benzo[b]fluoranthene |
205-99-2 |
|
7 |
苯并[k]荧蒽 |
Benzo[k]fluoranthene |
207-08-9 |
|
8 |
苯并[j]荧蒽 |
Benzo[j]fluoranthene |
205-82-3 |
|
9 |
苯并[a]芘 |
Benzo[a]pyrene |
50-32-8 |
|
10 |
茚并[1,2,3-c,d]芘 |
Indeno[1,2,3-c,d]pyrene |
193-39-5 |
|
11 |
二苯并[a,h]蒽 |
Dibenz[a,h]anthracene |
53-70-3 |
|
12 |
苯并[g,h,i]苝 |
Benzo[g,h,i]perylene |
191-24-2 |
|
13 |
二苯并[a,l]芘 |
Dibenzo[a,l]pyrene |
191-30-0 |
|
14 |
二苯并[a,e]芘 |
Dibenzo[a,e]pyrene |
192-65-4 |
|
15 |
二苯并[a,i]芘 |
Dibenzo[a,i]pyrene |
189-55-9 |
|
16 |
二苯并[a,h]芘 |
Dibenzo[a,h]pyrene |
189-64-0 |
7种多环芳烃内标混标（GB 5009.265-2021 第一法）
适用于GB 5009.265-2021 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定 第一法 气相色谱-质谱法，100 μg/mL在环己烷中， 1 mL/安瓿，Cat. No.: 47802
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序号 |
中文名称 |
英文名称 |
CAS |
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1 |
D12-苯并[a]蒽 |
D12-Benz[a]anthracene |
1718-53-2 |
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2 |
D12-䓛 |
D12-Chrysene |
1719-03-5 |
|
3 |
D12-苯并[b]荧蒽 |
D12-Benzo[b]fluoranthene |
93951-98-5 |
|
4 |
D12-苯并[a]芘 |
D12-Benzo[a]pyrene |
63466-71-7 |
|
5 |
D12-茚并[1,2,3-c,d]芘 |
D12-Indeno[1,2,3-c,d]pyrene |
203578-33-0 |
|
6 |
D14-二苯并[a,h]蒽 |
D14-Dibenz[a,h]anthracene |
13250-98-1 |
|
7 |
D12-苯并[g,h,i]苝 |
D12-Benzo[g,h,i]perylene |
93951-66-7 |
16种多环芳烃混标（GB 5009.265-2021 第二法）
适用于GB 5009. 265-2016 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定 第二法 高效液相色谱法，200 μg/mL在乙腈中，1 mL/安瓿，Cat. No.: 46960
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序号 |
化合物 |
英文名 |
CAS |
|
1 |
萘 |
Naphthalene |
91-20-3 |
|
2 |
苊烯 |
Acenaphthylene |
208-96-8 |
|
3 |
苊 |
Acenaphthene |
83-32-9 |
|
4 |
芴 |
Fluorene |
86-73-7 |
|
5 |
菲 |
Phenanthrene |
85-01-8 |
|
6 |
蒽 |
Anthracene |
120-12-7 |
|
7 |
荧蒽 |
Fluoranthene |
206-44-0 |
|
8 |
芘 |
Pyrene |
129-00-0 |
|
9 |
䓛 |
Chrysene |
218-01-9 |
|
10 |
苯并[a]蒽 |
Benzo [a] anthracene |
56-55-3 |
|
11 |
苯并[b]荧蒽 |
Benzo [b] fluoranthene |
205-99-2 |
|
12 |
苯并[k]荧蒽 |
Benzo [k] fluoranthene |
207-08-9 |
|
13 |
苯并[a]芘 |
Benzo [a] pyrene |
50-32-8 |
|
14 |
茚并[1,2,3,-c,d]芘 |
Indeno[1,2,3-c,d] pyrene |
193-39-5 |
|
15 |
二苯并[a,h]蒽 |
Dibenzo [a,h] anthracene |
53-70-3 |
|
16 |
苯并[g,h,i]苝 |
Benzo [g,h,i] perylene |
191-24-2 |