Trametinib (GSK1120212)是一种高特异性的，有效的MEK1/2抑制剂，无细胞试验中IC50为0.92 nM/1.8 nM，对c-Raf， B-Raf， ERK1/2没有抑制活性。

特性

药效大于PD0325901或AZD6244

靶点

体外研究

GSK1120212抑制 MBP 的磷酸化，对于不同亚型的Raf和MEK 而言，IC50在0.92 nM-3.4 nM。GSK1120212对c-Raf, B-Raf, ERK1和ERK2的激酶活性没有抑制作用。另外，GSK1120212对于其它98种激酶没有很强的抑制作用。GSK1120212对于人结肠癌细胞系有很强的抑制作用，其中HT-29和COLO205细胞组成型表达有活性的B-Raf突变，这两种细胞对GSK1120212最为敏感，IC50分别是0.48 nM 和 0.52 nM。含有k-Raf突变的细胞系对GSK1120212的敏感性介于如下范围，IC50是2.2-174 nM. 相反地，COLO320 DM细胞中B-Raf 和K-Ras均为野生型，因而即便在10 μM都对GSK1120212有抗性。用GSK1120212处理24小时可以诱导所有敏感细胞的细胞周期停滞在G1期。与此一致，GSK1120212处理使得大部分人结肠癌细胞系中p15INK4b 和/或p27KIP1的表达量上升。GSK1120212能诱导HT-29和COLO205细胞的凋亡，COLO205细胞更为敏感。GSK1120212抑制外周血单核细胞产生肿瘤坏死因子-α和白介素-6。

体内研究

按0.3 mg/kg或1 mg/kg 的剂量口服GSK1120212（一天一次共14天）能有效抑制HT-29肿瘤，1 mg/kg 的剂量可完全抑制肿瘤生长。在癌症组织中，一次口服1 mg/kg GSK1120212能完全抑制ERK1/2的磷酸化，14天后能提高p15INK4b和p27KIP1的表达量。在COLO205肿瘤模型中，0.3 mg/kg剂量的GSK1120212就足以抑制肿瘤生长，1 mg/kg剂量的GSK1120212可以使2/3的老鼠的肿瘤消退至可检测水平之下。0.1 mg/kg剂量的GSK1120212完全抑制佐剂性关节炎(AIA)和II型胶原诱导的关节炎(CIA) Lewis大鼠或DBA1/J小鼠。

MB1886

PD0325901

MB5132

PD98059

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.6250 mL

8.1249 mL

16.2499 mL

5 mM

0.3250 mL

1.6250 mL

3.2500 mL

10 mM

0.1625 mL

0.8125 mL

1.6250 mL

50 mM

–

–

–

Raf-MEK-ERK级联激酶检测:
非磷酸化的髓鞘碱性蛋白（MBP）涂覆到ELISA板上，B-Raf/c-Raf的活性形式与非磷酸化MEK1/MEK2和ERERK2混合在10 μM ATP和12.5 mM MgCl2，其MOPS缓冲液中含有不同浓度的GSK1120212。 MBP的磷酸化是由抗磷酸化的MBP抗体进行检测。

细胞实验

• Cell lines: HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo和COLO320
• Concentrations: 溶解在DMSO中至终浓度约10 μM
• Incubation Time: 3天或4天
• Method: 指数生长的细胞预培养在96孔组织培养板中24小时后用GSK1120212孵育。细胞生长是通过体外毒理学测定试剂盒（基于磺酰罗丹明B）检测。对于细胞凋亡测定，漂浮和贴壁细胞被收集并用70％乙醇固定。用PBS洗涤后，将细重胞悬在100微克/毫升RNA酶和25微克/毫升的碘化丙啶（PI）中，至于37℃黑暗中30分钟。每一个单细胞的DNA含量是用流式细胞仪Cytomics FC500或番石榴EasyCyte来确定。

动物实验

• Animal Models: 雌雄BALB/c-nu/nu小鼠皮下注射HT-29或COLO205细胞
• Formulation: 溶解于10％的Cremophor EL-10％PEG400
• Dosages: 1 mg/kg/day
• Administration: 口服