SB203580是一种p38 MAPK抑制剂，在THP-1细胞中IC50为0.3-0.5 μM，对SAPK3(106T)和SAPK4(106T)选择性低10倍，且阻断PKB磷酸化，IC50为3-5 μM。

特性

SB203580是第一个被报道的p38抑制剂。

靶点

体外研究

SB203580作用于人类T细胞,鼠CT6 T细胞, 或BAF F7 B细胞，抑制IL-2诱导的增殖，IC50为3-5 μM。SB203580也抑制IL-2诱导的p70S6K激活, IC50 > 10 μM。SB203580也抑制PDK1活性，IC50为3-10 μM，这种抑制存在剂量依赖性。SB203580抑制MAPKAPK2中p38-MAPK的刺激，IC50 为0.07 μM, 然而抑制完整SAPK/JNK活性时，IC50为3-10 μM。SB203580 高浓度时激活ERK通路,随后增强NF-κB转录活性。SB203580作用于人类肝癌细胞(HCC)，诱导自体吞噬。

体内研究

SB203580作用于缺血性损伤，保护猪的心肌层。SB203580有效保护携带系统性红斑狼疮的MRL/lpr鼠和治疗疾病。

MB4046

VX-702

MB1084

达马莫德;BIRB796

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6495 mL

13.2475 mL

26.4950 mL

5 mM

0.5299 mL

2.6495 mL

5.2990 mL

10 mM

0.2649 mL

1.3247 mL

2.6495 mL

50 mM

0.0530 mL

0.2649 mL

0.5299 mL

细胞受体激酶磷酸化实验 :
4 μg羊PKBα抗体固定在25 μL蛋白G-亲和层析柱上过夜(或1.5 小时) ，用Buffer A (50 mM Tris, pH 为7.5, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 0.5 mM Na3VO4, 0.1% β-巯基乙醇，1% Triton X-100, 50 mM NaF, 5 mM焦磷酸钠, 0.1 mM苯甲磺酰氟, 1 μg/mL抑蛋白酶肽, 抑肽素, 亮抑酶肽,及1 μM微囊藻素)冲洗。固定的PKB抗体和0.5 ml细胞溶解物温育1.5小时，用含0.5 M NaCl的0.5 mL Buffer A冲洗三次, 再用0.5 mL Buffer B (含50 mM Tris-HCl, pH为7.5, 0.03% (w/v) Brij-35, 0.1 mM EGTA, 及 0.1% β-巯基乙醇)冲洗二次,最后用100 μL实验稀释buffer冲洗二次; 5×实验稀释buffer包含100 mM MOPS, pH为7.2, 125 mM β-甘油磷酸, 25 mM EGTA, 5 mM原钒酸钠, 及5 mM DTT。10 μL实验稀释buffer，40 μM蛋白激酶A抑制肽, 100 μM PKB-特定底物肽,及10 μCi [γ-32P]ATP，加到PKB酶免疫复合物中。反应在室温下震荡温育20分钟，40 μL反应物转移到其他试管中，加入20 μL 40%三氯乙酸，终止反应。在室温下混合，温育5分钟，40 μL转移到P81磷酸纤维素纸上，亲和处理30秒 。P81纸在0.75%磷酸中洗三次，然后在室温下加到丙酮中。 使用闪烁计数器测量γ-32P 渗透率。

细胞实验

• Cell lines: CT6细胞, BA/F3 F7细胞
• Concentrations: 0-30 μM
• Incubation Time: 1小时
• Method:

CT6细胞和BA/F3 F7细胞在RPMI培养基中冲洗三次，然后培养在含5%胎牛血清，生长因子，抗生素，β-巯基乙醇的RPMI培养基中。2-5×106个CT6细胞悬浮在含5%胎牛血清的2 ml RPMI培养基上, 用SB203580预处理。然后加入20 ng/ml重组人类IL-2，在37 oC下刺激细胞5分钟，离心30秒，溶解于合适buffer中。稳定表达IL-2受体β链缺失突变的BA/F3细胞维持在含谷氨酸，5%胎牛血清和0.2 μg/mL G418的RPMI培养基中。大规模冲洗细胞，过夜处理，在用IL-2激活前再次冲洗。通过测定[3H]胸苷的渗透率，进行细胞增殖实验。

动物实验

• Animal Models: 携带系统性红斑狼疮的雌性MRL/lpr鼠和雌性C57BL/6鼠
• Formulation: 溶在饮用水中(250 μM)
• Dosages: 0.4mL/天
• Administration: 口服处理