Roscovitine (Seliciclib,CYC202)是一种有效的，选择性CDK抑制剂，作用于Cdc2，CDK2和CDK5时，无细胞试验中IC50分别为0.65 μM，0.7 μM和0.16 μM，对CDK4/6几乎没有作用。

靶点

体外研究

Roscovitine作用于细胞周期蛋白依赖性激酶具有高效性和高度选择性，作用于cdc2/cyclin B, cdk2/cyclin A, cdk2/cyclin E和cdk5/p53时IC50分别为0.65,0.7,0.7和0.16 μM。纳摩尔级Roscovitine作用于海星卵母细胞和海胆胚胎，可逆抑制在前中期间转变, 在体外作用于非洲爪蟾卵提取物，抑制M期促进因子活性和体外DNA合成,且抑制哺乳动物细胞系增殖，IC50为16 μM。浓度为7.5, 12.5和 25 mM的 Roscovitine作用于肾小球系膜细胞,导致CDK2活性分别降低25,50% 和100%，这种作用存在剂量依赖性。最新研究显示Roscovitine作用于盘基网柄菌，抑制cdk5激酶活性,细胞增殖,多细胞发展,和cdk5核转运, 不会影响cdk5蛋白表达。

体内研究

Roscovitine按50 mg/kg剂量作用于Ewing’s肉瘤家族(ESFT)移植瘤，明显抑制肿瘤生长。[4] Roscovitine作用于携带MCF7移植瘤的裸鼠，增强抗癌Doxorubicin抗癌效果,不会提高毒性，机制是使细胞周期停滞而不是引起凋亡。

SNS-032 (BMS-387032)

MB4353

THZ1

MB4229

夫拉平度(Alvocidib)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.8213 mL

14.1064 mL

28.2127 mL

5 mM

0.5643 mL

2.8213 mL

5.6425 mL

10 mM

0.2821 mL

1.4106 mL

2.8213 mL

50 mM

0.0564 mL

0.2821 mL

0.5643 mL

酶实验:
激酶活性实验在30oC下buffer C中进行。从数据中除去空白值，在10分钟的温育期中测定渗透到蛋白受体中的磷酸摩尔数，来计算活性。对照组用适当稀释的DMSO处理。在一些情况下, SDS/PAGE后通过自动射线照相术测定底物磷酸化。p34cdc2/cyclin B通过亲和色谱从 M期海星卵母细胞中纯化。使用 1 mg 组蛋白Hl/mL,在15 μM [γ-32P]ATP存在时进行实验，终浓度为 30 μL。在 30oC下温育10分钟, 25-μL上清液 转移到Whatman P81磷酸纤维素纸上, 20秒后, 用10mL磷酸/L水冲洗过滤器5次，每次至少5分钟。湿式过滤器转移到 6 mL闪烁管,加入5 mL ACS闪烁液，使用Packard 计数器测定放射性。测定在10分钟温育期中组蛋白H1渗透放入磷酸摩尔数评估激酶活性或者最大活性百分数。感染不同杆状病毒的sf9昆虫细胞抽提物中再生p33cdk2/cyclin A和p33cdk2/cyclinE。Cyclins A 和E是谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，复合体从谷胱甘肽-琼脂糖珠上纯化。使用 1 mg/mL 组蛋白Hl/mL,在15 μM [γ-32P]ATP存在时，进行激酶活性实验10分钟，终体积为30 μL，测定p34cdc2/cyclin B激酶。p33cdk5/p35从牛脑中纯化,除了Mono S-色层分离一步法。 Superose 12柱的活性片段汇集，终浓度为25 μg 酶/mL。使用1 mg/mL 组蛋白Hl, 在15 μM [γ-32P]ATP存在时，进行激酶活性实验10分钟，终体积为 30 μL，测定p34cdc2/cyclin B激酶。

细胞实验

• Cell lines: 白血病, 非小细胞肺癌,结肠癌, 中枢神经系统肿瘤， 恶性黑色素瘤,卵巢癌，肾癌, 前列腺癌，胸腺癌细胞系
• Concentrations: 0.01到100 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 包括9种肿瘤类型的60种人类肿瘤细胞系培养24小时，然后用 0.01-100 μM Roscovitine持续处理48小时。进行sulforhodaminine B蛋白实验测评毒性。

动物实验

• Animal Models: 右后侧皮下注射A4573细胞的CD1 nu/nu鼠
• Formulation: Roscovitine 溶于无水甲醇或DMSO，然后用 10% Tween-80, 20% N-N-二甲基乙酰胺, 和70% PEG 400稀释
• Dosages: ≤50 mg/kg
• Administration: 腹腔注射