PluriSIn #1 (NSC 14613)是一种stearoyl-coA desaturase 1 (SCD1)抑制剂，选择性消除hPSCs。

靶点

 SCD1

体外研究

PluriSIns #1作用于hPSCs，具有强效的，快速的，选择性的细胞毒性。PluriSIn #1激活的细胞凋亡是中央细胞死亡机制。PluriSIn #1作用于hPSCs，导致ER应激。PluriSIns #1(20 μM) 作用于hPSCs，诱导蛋白质合成降低~30%。PluriSIns #1作用于hPSCs，诱导硬脂酰辅酶A脱氢酶（SCD1）活性降低~65%。PluriSIns #1 (20 μM)抑制未分化的hPSCs形成畸胎瘤，PluriSIns也抑制mPSCs，且抑制小鼠胚胎发育。

MK-8245

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

4.6896 mL

23.4478 mL

46.8955 mL

5 mM

0.9379 mL

4.6896 mL

9.3791 mL

10 mM

0.4690 mL

2.3448 mL

4.6896 mL

50 mM

0.0938 mL

0.4690 mL

0.9379 mL

SCD1活性检测:
细胞按每孔50k 到100k的密度接种在6孔板中，24小时后，孔中加入20 μM PluriSIn #1 或 0.2% DMSO-对照。在37°C下含 5% CO2的环境中温育12小时后,移除旧的培养基，使用PBS洗涤细胞,加入包含 2.3 μM 0.75 UCi [1-14C] 硬脂酸的新培养基。细胞在37°C下含 5% CO2的环境下温育达4小时。温育结束后 ，除去培养基，使用2 mL PBS洗涤细胞三次。加入2 mL正己烷：异丙醇（3:2 v:v）的混合物，细胞在37°C下含 5% CO2的环境中温育30分钟。随后加入2 mL Folch溶液（氯仿：甲醇，2:1,v:v）。液体转移到试管中，加入1 mL水进行两相分配。较低的有机相蒸发，用于脂质皂化，游离的[1-14C] 硬脂酸(底物) 和 [1-14C]油酸(形成的产物进行)TLC分离。从细胞中提取的脂类加到TLC板上，预浸在10% NO3Ag 中，在120°C下60分钟时激活。加入未标记的硬脂酸和油酸到各种的上样点，作为载体。作为内部识别标准。实验板使用氯仿:MeOH:AcH:DDW (90:8:1:0.8)的溶剂混合物进行跑胶。在TLC板上喷洒2′,7′-二氯荧光素溶液，通过U.V.检测游离脂肪酸。刮下硬脂酸和油酸相对应的斑点，使用闪烁计数器计算放射性。根据底物向产物的转化百分率和转换成pmol/min/106细胞，计算SCD1脱氢酶活性。

细胞实验

• Cell lines: 人类 iPSC 细胞系 BJ-iPS28
• Concentrations: ~20 μM
• Incubation Time: 1天
• Method: 使用0.5%戊二醛固定细胞，然后使用溶解在0.1 M硼酸（pH8.5）中的亚甲基蓝进行染色，测定相对细胞数量。使用0.1 M盐酸进行颜色提取，通过测量650 nM处的吸光度，对染色（与细胞数成正比）进行定量。