Peficitinib (ASP015K, JNJ-54781532)是一种具有生物活性的 JAK 抑制剂。Phase 3。

靶点

体外研究

ASP015K抑制IL-2-诱导的人T细胞增殖，比EPO-诱导的人红白血病细胞的增殖具有更高的效能。在人全血中，ASP015K抑制STAT5磷酸化(pSTAT5)。

体内研究

在大鼠AIA模型中，ASP015K (p.o.)显著减少足肿胀和踝关节骨质破坏概率。

ZM 39923 HCl

MB2615

Upadacitinib(ABT-494)；乌帕替尼

MB3926

Baricitinib (LY3009104, INCB028050)

MB3928

Momelotinib (CYT387)

MB5455

Ruxolitinib(INCB018424) phosphate

MB3932

S-Ruxolitinib (INCB018424)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0638 mL

15.3191 mL

30.6382 mL

5 mM

0.6128 mL

3.0638 mL

6.1276 mL

10 mM

0.3064 mL

1.5319 mL

3.0638 mL

50 mM

0.0613 mL

0.3064 mL

0.6128 mL

• 使用链霉抗生物素蛋白包被的96孔板进行人JAK1，JAK2，JAK3，TYK2-结构域测定。 反应混合物含有15mM Tris-HCl（pH 7.5），0.01％吐温20,2mM二硫苏糖醇，10mM MgCl 2,250nM生物素 – Lyn-底物-2（对于JAK1,2和3）或生物素-IRS1-底物（ 对于TYK2）和ATP（终浓度为200μM[JAK1]，10μM[JAK2]，8μM[JAK3]和4μM[TYK2]）。 将培立替尼或托法替尼溶解于DMSO中。 通过添加激酶结构域引发反应，然后在室温下孵育1小时。 使用磷酸酪氨酸特异性ELISA，使用HRP-缀合的抗磷酸酪氨酸抗体（HRP-PY-20）测量激酶活性，作为生物素-Lyn-底物-2或生物素-IRS-底物的磷酸化速率。 Peficitinib的TYK2激酶测定在ATP浓度为10μM时进行。

细胞实验

• 将来自雄性Lewis大鼠的脾细胞悬浮于补充有10％胎牛血清和50μM2-巯基乙醇的RPMI1640中，密度为1.5×10 6个细胞/ mL。将大鼠脾细胞与伴刀豆球蛋白A在37℃下培养24小时以诱导IL-2受体表达。然后将脾细胞与指定浓度的IL-2和培立替尼或托法替尼在96孔组织培养板中孵育。孵育3天后，将alamarBlue®加入每个测试孔中，然后孵育4-6小时。在545nm的激发波长和590nm的发射波长下测量荧光强度。所有实验一式三份进行，并且实验分别进行四次或一次用于使用Peficitinib或tofacitinib的测定。对于每个个体，为细胞制备用细胞和培养基单独培养的孔，并且为对照制备不含JAK抑制剂的IL-2刺激细胞。为了计算JAK抑制剂的抑制百分比，空白和对照分别被指定为100％和0％抑制。

动物实验

• Peficitinib溶于0.5％甲基纤维素。
• 大鼠
• 将7周龄雌性Lewis大鼠用于佐剂诱导的关节炎（AIA）模型。 测量每只大鼠的体重和左后爪体积（MK-101PR体积计），并且该值用于将动物分配到六组中的一组（n = 10）。 通过将液体石蜡中的结核分枝杆菌H37RA菌株（0.5mg /大鼠）悬浮液注入右后足垫，在第0天在这些组中的5个中诱导关节炎。 其余组未注射佐剂（正常组，n = 10）。 对于口服给药方案，注射佐剂的组中的四个每天一次接受溶解在0.5％甲基纤维素（MC）中的Peficitinib（1,3,10和30mg / kg）。 正常组和对照组的大鼠仅接受0.5％的MC 。