PD0325901 (PD325901)是选择性的，ATP非竞争性的MEK抑制剂，IC50为0.33 nM,比CI-1040作用于ERK1和ERK2磷酸化效果高500倍左右。

靶点

MEK (Cell-free assay)

IC50

0.33 nM

体外研究

PF-0325901比另一种MEK抑制剂CI-1040具有更高的渗透率。与CI-1040相比，PD 0325901可以到达体系的更深层。PD0325901是非ATP竞争性的MAPK激酶MEK抑制剂，抑制鼠类结肠26细胞的MEK时IC50为0.33nM。苏氨酸/酪氨酸激酶MEK是RAS/RAF/MEK/ERK信号通路的关键组成部分，在人类肿瘤细胞中通常是激活的。PD0325901精确有效地抑制MEK，作用于MEK1和MEK2时Ki值为1nM。PD0325901作用于细胞ERK1和ERK2的磷酸化效果比CI-1040强到大约500倍。

体内研究

PD0325901阻止细胞黑色素瘤细胞系的生长，使异种移植鼠模型的细胞周期停止在G1期，引起细胞凋亡单独口服25 mg/kg PD032590124后，ERK的磷酸化作用被阻断达到50%以上。PD 0325901的抗癌活性已经被用于更广泛的人类移植瘤的研究中，在研究的人类肿瘤模型中,有6/7被PD 0325901明显抑制。PD0325901抑制恶性黑色素瘤细胞系生长。PD0325901抑制TPC-1细胞和K2细胞生长，GI50分别为11和6.3 nM。PD0325901浓度非常低时(10 nM)也明显抑制携带BRAF突变的PTC细胞生长，且同样浓度时只稍微提高携带RET/PTC1重排的PTC细胞生长。PD0325901作用于多种PTC细胞系，有效抑制ERK1/2磷酸化。

PD184352 (CI-1040)

MB4068

PD318088

MB5132

PD98059

MB4064

Pimasertib (AS-703026)

MB3241

Selumetinib (AZD6244)

MB9629

SL-327

CL-10319

TAK-733

MB5401

Trametinib (GSK1120212)

MB4063

U0126-EtOH

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0739 mL

10.3694 mL

20.7387 mL

5 mM

0.4148 mL

2.0739 mL

4.1477 mL

10 mM

0.2074 mL

1.0369 mL

2.0739 mL

50 mM

0.0415 mL

0.2074 mL

0.4148 mL

体外级联实验:
在有含p44MAPK(GST-MAPK)的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白和含p45MEK(GST-MEK)的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白存在情况下，测定32P渗透到髓鞘碱性蛋白(MBP)的渗透率。实验溶液包括20 mM HEPES,pH 为7.4,10 mM MgCl2,1 mM MnCl2,1 mM EGTA,50 mM [gamma-32P]ATP,10 mg GST-MEK,0.5 mg GST-MAPK,和40 mg MBP，终体积为100 mL。实验进行20分钟后，加入三氯乙酸终止反应，然后通过GF/C过滤器过滤。使用1205 Beta板测定保留在过滤器中的32P。测定不同剂量PD0325901，绘制剂量反应曲线。

细胞实验：

• Cell lines: PTC细胞
• Concentrations: 0.1 nM- 1 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method:

1×104个PTC细胞接种在含1mL培养基的24孔板上，在37oC下温育4天。在实验第一天加入不同浓度MEK抑制剂，重复三次。MTT溶于0.8% NaCl溶液，浓度为5 mg/mL，实验第三天，每孔加入0.2 mL，测定GI50或者测定每天的细胞生长曲线。细胞和MTT在37oC下温育3小时。然后从孔中吸出液体除去。染色的细胞溶于0.5 mL DMSO，然后使用Synergy HT增殖酶标仪在570 nm处测定吸光值。然后测定GI50, 按公式 100×(T − T0)/(C − T0)计算细胞生长。

动物实验：

• Animal Models: 携带PTC细胞的Ncr-nu/nu鼠
• Formulation: 80 mM柠檬酸缓冲液(pH 7)
• Dosages: 20-25 mg/kg
• Administration: 口服饲喂