OSU-03012 (AR-12)是一种有效的重组PDK-1(phosphoinositide-dependent kinase 1)抑制剂，无细胞试验中IC50为5 μM，比OSU-02067作用效果高2倍。

特性

OSU-03012是celecoxib衍生物，比celecoxib的抗癌活性高,但是不能抑制COX2。

靶点

体外研究

OSU-03012诱导PC-3细胞凋亡，IC50为5 µM，且降低免疫沉淀的p70S6K的活性。Celecoxib完全抑制肿瘤细胞生长,浓度至少需要50 μM，而OSU-03012浓度为3-5 μM时即可完全抑制多种肿瘤细胞生长。与作用于正常的胶质细胞相比，OSU-03012作用于神经胶质瘤细胞更有效促进细胞死亡。OSU-03012和电离辐射使caspase非依赖性的细胞死亡增多。OSU-03012促进组织蛋白酶B从溶酶体中释放，及AIF从线粒体中释放。在蛋白激酶R类的内质网激酶-/-细胞中, OSU-03012的药效减弱，和BID的分裂下降有关，且阻断组织蛋白酶B和AIF释放到细胞质中。OSU-03012抑制甲状腺癌细胞(NPA, WRO, 和ARO细胞) 增殖和迁移，且诱导凋亡，结果导致S期细胞增多，G2期细胞没有增多。OSU-03012为ATP竞争性抑制剂，作用于甲状腺癌细胞，抑制PAK活性和AKT磷酸化。OSU-03012抑制肝细胞癌细胞系包括Huh7, Hep3B和HepG2细胞生长，IC50<1 μM。OSU-03012作用于Huh7细胞，不抑制PDK1或AKT 活性，也不诱导细胞凋亡，但是诱导自噬。而且，用OSU-03012处理后，引起活性氧(ROS)积累。最新研究显示OSU-03012可增强(Bcr)-Abl 突变细胞系对imatinib诱导的凋亡的敏感性。

体内研究

OSU-03012 按200 mg/kg剂量作用于 Huh7 移植瘤，抑制57.59%的肿瘤生长。[4] OSU-03012 作用于MDA-MB-435/LCC6移植瘤。明显降低EGFR 蛋白表达，下降约48%，也阻止YB-1结合到EGFR启动子上。[6] 口服处理OSU-03012，抑制HMS-97神经鞘移植瘤的生长达55%。

BX-795

MB3973

BX-912

MB3972

GSK2334470

MB1370

PS48

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1718 mL

10.8589 mL

21.7179 mL

5 mM

0.4344 mL

2.1718 mL

4.3436 mL

10 mM

0.2172 mL

1.0859 mL

2.1718 mL

50 mM

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PDK-1激酶实验:
根据重组PDK-1的活力进行无细胞实验,对照组用DMSO，实验组 用OSU-03012,激活PDK-1的下游激酶血清和糖皮质激素调节的激酶, 反之, 用 [γ-32P]ATP使Akt/血清和糖皮质激素调节的激酶特定肽底物RPRAATF磷酸化。使用P81磷酸纤维素纸，使32P-磷酸化的肽底物从残余的[γ-32P]-ATP 中分离，用0.75%磷酸冲洗三次后，用闪烁计数器计数。

细胞实验

• Cell lines: PC-3细胞
• Concentrations: 0-10 μM
• Incubation Time: 约为72小时
• Method: 使用MTT实验测定OSU-03012作用于PC-3 细胞活力的效果，做6次平行实验。细胞生长在含10% FBS的RPMI 1640培养基中，在96孔板中培养24小时，然后在含1%血清RPMI 1640培养基中用溶在DMSO（终浓度≤0.1%)中的不同浓度OSU-03012 (0-10 µM)在不同时间间隔(~72小时)处理。对照组用DMSO处理。移除培养基, 在10%含FBS的 RPMI 1640培养基中加入200 μL 0.5 mg/mL MTT，然后在含CO2的环境中37oC下温育2小时。移除上清液，减少的MTT染料溶解在200 μL DMSO中。 用计数板在570nm 处测定吸光值。

动物实验

• Animal Models: 携带Huh7移植瘤的雄性BALB/c 裸鼠
• Formulation: 溶解在0.5%甲基纤维素, 0.1% Tween-80
• Dosages: 100-200mg/kg.
• Administration: 每天饲喂处理