OSI-930是有效的Kit, KDR 和CSF-1R抑制剂，IC50分别为80 nM, 9 nM 和 15 nM,对Flt-1, c-Raf 和 Lck具有适度的抑制活性，对PDGFRα/β, Flt-3 和 Abl抑制活性较低。

靶点

FLT1
(Cell-free assay)

KDR 
(Cell-free assay)

CSF-1R
(Cell-free assay)

LCK
(Cell-free assay)

C-Raf
(Cell-free assay)

FLT1
(Cell-free assay)

IC50

8 nM

9 nM

15 nM

22 nM

41 nM

8 nM

体外研究

在体外, OSI-930有效抑制重组受体酪氨酸激酶活性，作用于Kit, KDR, Flt, CSF-1R, c-Raf 和Lck时，IC50 分别为80 nM, 9 nM, 8 nM, 15 nM, 41 nM 和22 nM。 OSI-930 作用于HMC-1 细胞系，抑制细胞增殖，IC50为14 nM，而作用于不表达组成型激活的突变受体酪氨酸激酶的COLO-205细胞，不会显著抑制生长。而且, OSI-930 也诱导 HMC-1细胞凋亡，EC50为 34 nM。最新研究显示OSI-930使纯化重组细胞色素P450 (P450) 3A4失活， Ki为24 μM ，这种作用存在时间和浓度依赖性。

体内研究

OSI-930按最大有效剂量200 mg/kg口服饲喂处理给药多种临床前期移植瘤模型。包括HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 和 U251 移植瘤模型，具有有效的抗肿瘤活性。

Telatinib

MB3934

Semaxanib(SU-5416 )

MB3997

ZM306416

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2551 mL

11.2755 mL

22.5510 mL

5 mM

0.4510 mL

2.2551 mL

4.5102 mL

10 mM

0.2255 mL

1.1275 mL

2.2551 mL

50 mM

0.0451 mL

0.2255 mL

0.4510 mL

蛋白激酶实验:
使用ELISA实验法(Kit, KDR, PDGFRα, 和PDGFRβ)或辐射测量法进行蛋白激酶实验。ELISA 法使用聚 (Glu:Tyr) 作为底物，结合到96孔板表面，然后使用抗磷酸酪氨酸抗体结合HRP测定磷酸化。使用ABTS 作为过氧化物酶底物，通过在 405/490 nm处测定吸光值，而测量结合的抗体。所有实验使用昆虫细胞或细菌表达的纯化重组激酶催化区。实验中使用的Kit和EGFR蛋白是内部制备的，其他酶(PDGFRα,PDGFRβ,和 KDR)是购买的。在昆虫细胞中，重组 Kit蛋白表达作为NH2末端-谷胱甘肽S转移酶融合蛋白， 最初纯化为非磷酸化(非激活) 酶，具有较高ATP (400 μM)的Km值。在一些实验中通过与 1 mM ATP在30oC下温育1小时,而制备酶的活性形式（酪氨酸磷酸化的）。磷酸化蛋白通过脱盐柱，除去大部分ATP，然后储存在含 50% 甘油的buffer中，储存−80oC下。由此产生的制备液比初始非磷酸化的制备液具有相对较高的特定活性，而 ATP (25 μmol/L) 的Km值较低。在200 μM ATP和不同浓度 OSI-930存在时，非磷酸化的酶在30oC下温育，然后测量OSI-930抑制Kit自磷酸化的情况。移除等样到SDS-PAGE样本缓冲液中，然后在100oC下加热5分钟，终止反应。通过对全部Kit和磷酸化的Kit进行免疫印迹，而测定Kit磷酸化程度。

细胞实验

• Cell lines: HMC-1 和 COLO-205
• Concentrations: 0 到1 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞增殖和凋亡实验中，细胞接种在96孔板中，然后在不同浓度 OSI-930 存在时，温育2到3天。使用CellTiterGlo荧光定量测量细胞内ATP含量，而测定抑制细胞生长的情况。通过酶 caspase 3/7 实验定量测量 OSI-930诱导caspase 依赖性凋亡的情况。 使用大鼠主动脉环内皮生长实验监测OSI-930抑制血管生成的情况。从 CO2-安乐死雄性大鼠获得部分主动脉，然后体外培养在胶原蛋白基质中。1型大鼠尾胶原溶于0.1% 乙酸 3 mg/mL, 与0.125 体积胶原(0.05 N NaOH, 200 mM HEPES, 260 mM NaHCO3), 0.125 体积培养基 199, 0.0125体积 1 mol/L NaOH, 和1% GlutaMax 混合，在上述混合液中制备胶原蛋白基质。主动脉环嵌入含0.4 mL 胶原蛋白基质的6孔板中，0.5 mL内皮细胞基本培养基和适量OSI-930加到6孔板中，主动脉环温育10天，通过在主动脉组织区域周围一系列同心圆内测定生长区，然后通过图像数字化测量血管生长。

动物实验

• Animal Models: HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 和U251 细胞皮下注射到CD1 nu/nu小鼠
• Formulation: OSI-930 溶于Labrafil M 1944 CS 或 PEG-400/水 (50:50)
• Dosages: ≤200 mg/kg
• Administration: 口服处理