MK-5108 (VX-689)是高选择性的Aurora A抑制剂，IC50为0.064 nM，作用于Aurora A比作用于Aurora B/C选择性高220和190倍，抑制TrkA，选择性低100倍。

靶点

Aurora-A

IC50

0.064 nM

体外研究

MK-5108 抑制Aurora-A 活性，是ATP竞争性抑制剂。与其他蛋白激酶相比，MK-5108 高度选择性作用于Aurora-A。MK-5108只有抑制一种激酶(TrkA)时，选择性<100倍。MK-5108抑制Aurora-A时选择性比MLN8054高。与诱导产生pHH3阳性细胞相一致，MK-5108 诱导细胞在G2-M 期累积。MK-5108抑制肿瘤细胞增殖，包括HCC1143, AU565, MCF-7, HCC1806和 CAL85-1，IC50分别为0.42 μM, 0.45 μM, 0.52 μM, 0.56μM 和0.74 μM。MK-5108作用于LEIO285, LEIO505和SK-LSM1细胞，降低细胞活性，这种作用存在剂量依赖性，IC50约为100 nM。MK-5108处理48和72小时后，提高细胞在G2/M 期的比例。与DMSO处理的对照组相比，在相同时间点 MK-5108 显著提高Caspase 3/7活性。MK-5108作用于LEIO505细胞24小时而不是48或72小时，使细胞在G2/M期积累。MK-5108使ULMS 细胞系停在M期,MK-5108降低Gemcitabine作用于LEIO285细胞的IC50值，但是提高Gemcitabine 作用于LEIO505和SK-LMS1细胞的IC50值。

体内研究

MK-5108 按16 mg/kg 和 32 mg/kg剂量处理，诱导产生pHH3阳性细胞。MK-5108按8 mg/kg 和16 mg/剂量处理血浆浓度为1.7 μM 和4.4 μM。MK-5108 处理肿瘤和皮肤组织，2小时后诱导pHH3 产生，到4小时达到最高量。MK-5108 按15 mg/kg和 30 mg/kg剂量处理 显著抑制肿瘤生长，实验组平均肿瘤体积改变与对照组体积改变之比百分数 (%T/C) 处理第11天分别为10% 和−6%, 处理18天 分别为17% 和5% 。MK-5108 按以上两种剂量处理，耐药性都良好，实验动物体重降低都很小。MK-5108断断续续处理携带SW48肿瘤的裸鼠，具有显著的抗癌活性, MK-5108 按15 mg/kg和 45 mg/kg 剂量处理抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，处理第10天%T/C分别为35% 和7%, 处理第27天，%T/C分别为58% 和32%。

SNS-314 Mesylate

MB1641

VX-680/MK-0457，陶扎色替

MB4029

ZM 447439

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1648 mL

10.8239 mL

21.6478 mL

5 mM

0.4330 mL

2.1648 mL

4.3296 mL

10 mM

0.2165 mL

1.0824 mL

2.1648 mL

50 mM

0.0433 mL

0.2165 mL

0.4330 mL

生化激酶实验:
重组His标记的人Aurora-A蛋白在大肠杆菌中表达，然后使用 HisTrap HP柱进行纯化。 购买纯化的重组人Aurora-B和Aurora-C蛋白。在96孔板上进行5次重复实验。在20 μM ATP, 25 μM Tetra-Kemptide [RRR(GLRRASLG)4R-NH2], 每孔1.0 μCi [γ-33P]-ATP, 溶于50 mM Tris-HCl (pH 7.4)的每孔0.1 ng Aurora-A，15 mM Mg(OAc)2,及 0.2 mM EDTA 存在时，在30oC下进行 Aurora-A检测反应40分钟。为了测定 MK-5108抑制Aurora-A的效果，在不同浓度 ATP存在时，测定MK-5108的IC50值。然后，绘制IC50值的图谱，分析ATP浓度对 MK-5108的IC50 值的影响。在 15 μM ATP, 100 μM Kemptide (GLRRASLG-NH2), 每孔1.0 μCi [γ-33P]-ATP,溶于 50 mM Tris-HCl (pH 7.4)的每孔5.0 ng Aurora-B, 15 mM Mg(OAc)2, 及 0.2 mM EDTA存在时，在30oC下进行Aurora-B 检测实验20分钟。 在40 μM ATP, 100 μM Kemptide, 每孔1.0 μCi [γ-33P]-ATP, 溶于10 mM MOPS-NaOH (pH 7.4)的每孔15 ng Aurora-C, 5 mM Mg(OAc)2, 1 mM (±) DTT, 及1 mM EGTA存在时，在 30oC下进行Aurora-C检测实验20分钟。加入2.0% 磷酸, Tetra-Kemptide 终止激酶反应，然后Kemptide被困在在MultiScreen-PH板上。使用0.64%磷酸冲洗孔板5次，然后使用液体闪烁计数器测定放射性。

细胞实验 

Cell lines: HeLa-S3细胞

• Concentrations: 0 μM-1 μM
• Incubation Time: 12 小时
• Method: 使用2 mM胸甘通过双胸苷阻断阻断，使HeLa-S3细胞在G1-S期同步化。冲洗细胞，接种到96孔细胞培养板中。4小时后,每孔中加入等体积的含MK-5108的培养基。 使用Nocodazole (300 nM)作为 100%对照。细胞接种12小时后，与冷甲醇混合过夜。然后使用兔磷酸组氨酸 H3（Ser28）抗体和兔IgG-Cy5抗体进行染色。使用 10 mg/mL 4′,6-联脒-2-苯基吲哚对全部核区进行染色。使用IN细胞分析仪1000和10 倍物镜获得免疫组化染色的图像。获得图像后，分析数据。 

动物实验

Animal Models: 携带HCT116肿瘤的SCID小鼠

• Formulation: 0.5% 甲基纤维素/0.24% SDS
• Dosages: 30 mg/kg
• Administration: 口服处理