Maraviroc是一种CCR5拮抗剂，作用于MIP-1α，MIP-1β和RANTES，无细胞试验中IC50分别为3.3 nM，7.2 nM和5.2 nM。

靶点

体外研究

Maraviroc 抑制MIP-1β刺激的γ-S-GTP 结合到HEK-293细胞膜上, 说明 Maraviroc 可抑制GDP-GTP 在CCR5/G 蛋白复合体上交换的趋化因子依赖性刺激。Maraviroc 也抑制趋化因子诱导的细胞内钙重新分配的下游事件，作用于 MIP-1β, MIP-1α 和RANTES时，IC50s 为 7 到 30 nM。在相同实验中, Maraviroc 即使浓度高达10 μM，也不会触发细胞内钙释放，说明Maraviroc 缺乏 CCR5兴奋剂活性。与此相应地, Maraviroc也不能诱导CCR5内化。Maraviroc 低纳摩尔浓度时，也有效作用于 HIV-1 Ba-L。 Maraviroc 抑制所有 200种假型病毒，平均IC90为13.7 nM。在浓度高达其IC50的1000倍时，Maraviroc对其他chemokine receptors (CCR1, 2, 3, 4, 7, 8; CXCR1, 2) 没有相关临床程度的抑制作用

体内研究

Maraviroc 作用于大鼠的半衰期为 0.9小时，作用于犬类的半衰期为2.3小时。 随后Maraviroc按2 mg/kg剂量口服给药犬类，1.5小时后达到 Cmax(256 ng/ml)，生物有效性为40%。Maraviroc作用于大鼠，大约 30% 给药剂量从肠道吸收。[1]雌性RAG-hu小鼠阴道内部加入 Maraviroc凝胶后，再阴道注入HIV-1 1小时。Maraviroc 凝胶处理的小鼠完全免受HIV-1 感染，而安慰剂处理的小鼠则全部感染。说明Maraviroc 完全保护小鼠免受 HIV-1 感染。在安慰剂处理的病毒感染小鼠内，CD4 T细胞明显下降，而Maraviroc 凝胶处理小鼠中水平稳定。

马拉维若-d6

MB25753

3-羟甲基马拉维若-d6

MB25755

4-羟苯基马拉维若-d6

MB25750

脱[1-(4,4-二氟代环己烷甲酰胺)-1-苯丙基]马拉维若-d6

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9468 mL

9.7339 mL

19.4678 mL

5 mM

0.3894 mL

1.9468 mL

3.8936 mL

10 mM

0.1947 mL

0.9734 mL

1.9468 mL

50 mM

0.0389 mL

0.1947 mL

0.3894 mL

趋化因子与 CCR5结合的抑制作用:
使用稳定表达受体或膜及其制品的昆虫HEK-293细胞测量125I-标记的 MIP-1α, MIP-1β,和 RANTES 与CCR5结合情况。细胞按2 × 106 个细胞/ml的密度再悬浮在结合buffer (50 mM HEPES 含1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 和 0.5%牛血清蛋白[BSA]，调节pH为 7.4) 中。为了制备膜，PBS冲洗的细胞再悬浮在 裂解 buffer (20 mM HEPES, 1 mM CaCl2, 1 片 COMPLETE /50 mL, pH 7.4)中，然后在Polytron 手持匀浆器中搅匀, 在40,000× g下超速离心30分钟，再悬浮在 结合 buffer中，蛋白浓度为0.25 mg/mL (96-孔板的每孔中含 12.5 μg 膜蛋白)。制备125I-放射性标记的 MIP-1α, MIP-1β, 和 RANTES ，在 结合 buffer中稀释，终浓度为400 pM。每孔加入Maraviroc 稀释液，终体积为100 μL, 实验板温育1小时, 通过预阻断和冲洗的 Unifilter 板过滤，计数，烘干过夜。

细胞实验：

• Cell lines: PHA刺激的PBMC或PM-1细胞
• Concentrations: 0-1 μM
• Incubation Time: 5天或7天
• Method:

在24孔组织培养板上进行药物敏感性试验。在DMSO中制备重复的8点连续稀释Maraviroc，实验中DMSO终浓度为 0.1% (vol/vol)。PHA刺激的PBMC或PM-1细胞感染细胞，在37oC下进行1小时。细胞随后稀释一次，3.6 × 105 PBMC 或2.0 × 105 PM-1细胞加到含稀释 Maraviroc的每孔中。实验板在37oC下在含5% CO2 (vol/vol) 环境下温育5天（实验室适应株）或7天（原始分离株）。所有实验中含Saquinavir (一种 HIV-1 蛋白酶抑制剂) 和RANTES。

动物实验：

• Animal Models: 人性化的 BALB/c-Rag2−/−γc−/−和BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu)小鼠
• Formulation: 溶于PBS，进行无菌过滤，然后调整浓度为4 mg/mL (7.8 mM)。加入3.4% 羟基-乙基纤维素（HEC）凝胶制剂，在2.2% HEC 凝胶中获得终浓度为5 mM 的Maraviroc 。
• Dosages: ~64 μg
• Administration: 25μL凝胶配方小心地加到小鼠的阴道穹窿中。