CH5424802是有效的ALK抑制剂，IC50为1.9 nM,对L1196M突变型敏感，作用于ALK比 PF-02341066, NVP-TAE684 和PHA-E429选择性高。

靶点

ALK

ALKF1174L

ALKR1275Q

IC50

1.9 nM

1 nM

3.5 nM

体外研究

CH5424802作用于ALK 为ATP竞争性的，解离常数(KD)为2.4 nM。CH5424802对ALK 和L1196M 具有强大的抑制效果，Ki分别为0.83 和1.56 nM。 CH5424802作用于表达EML4-ALK的NCI-H2228 NSCLC细胞，抑制ALK自磷酸化。CH5424802 也抑制STAT3 和AKT,而不是 ERK1/2的磷酸化。CH5424802 完全抑制STAT3在Tyr705位点的磷酸化。CH5424802优先有效作用于表达EML4-ALK的NCI-H2228细胞，而不作用于融合ALK的阴性 NSCLC细胞系，包括单层培养的HCC827细胞(EGFR外显子19缺失), A549细胞(KRAS突变), 或NCI-H522细胞(EGFR 野生型, KRAS 野生型, 和ALK野生型)。CH5424802作用于 NCI-H2228球体细胞，引起凋亡标记—caspase-3/7样激活。CH5424802抑制含NPM-ALK融合蛋白的两种淋巴瘤细胞, KARPAS-299和SR生长,为不影响不含ALK融合的 HDLM-2淋巴瘤细胞生长。CH5424802 作用于KARPAS-299具有高度靶向选择性和更强的抗增殖活性。CH5424802抑制KAPRAS-299，IC50为3 nM, 抑制KDR， IC50为1.4 μM。CH5424802代谢稳定性很高。

体内研究

CH5424802口服处理，抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，ED50为0.46 mg/kg。CH5424802按20 mg/kg剂量处理，引起肿瘤快速衰退，衰退达168%,处理11天后(在第28天)每个鼠中的肿瘤体积<30 mm3, 维持有效的抗肿瘤效果，且在4周的无药处理期间，不会出现肿瘤再生长。CH5424802 处理小鼠的半衰期和口服生物有效性分别为8.6 小时和 70.8%。按6 mg/kg重复剂量处理，在2,7,和24小时后，平均血浆水平达到1.7,1.5,和0.3 nM。CH5424802处理抑制肿瘤生长。CH5424802按20 mg/kg剂量处理 KARPAS-299 和 NB-1，在第20天，肿瘤生长抑制达 119% 和104%。CH5424802 抑制STAT3磷酸化，这种作用存在剂量依赖性(2-20 mg/kg)。CH5424802处理的移植瘤中，观察到AKT磷酸化部分降低。

ASP3026

MB3330

PF-06463922

MB4539

RXDX-101

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0720 mL

10.3601 mL

20.7202 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

体外激酶抑制检测:
在CH5424802存在时，通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）分析或荧光偏振（FP）法测量磷酸化各种底物肽的能力，而测评抑制各种激酶（除了MEK1和 Raf-1）的能力。在CH5424802存在时，通过定量分析重组ERK2 蛋白对底物的磷酸化而测评对MEK1的抑制活性。在 CH5424802存在时，通过测定激酶磷酸化MEK1的能力而测评对Raf-1的抑制活性。

细胞实验

• Cell lines: NSCLC, A549 和 HCC827 细胞
• Concentrations: 0-1 μM
• Incubation Time: 5天
• Method: NSCLC, A549 和HCC827细胞接种在96孔板中过夜，与不同浓度CH5424802按指定时间温育。球体细胞生长抑制实验中，细胞接种在球板上，温育过夜，然后在指定时间用化合物处理。通过发光细胞活性检测存活细胞。使用Caspase-Glo 3/7 检测试剂盒进行Caspase-3/7检测。

动物实验

• Animal Models: 携带NCI-H2228细胞的 SCID 或裸鼠
• Formulation: 0.02 N HCl, 10% DMSO, 10% Cremophor EL, 15% PEG400, 和 15% HPCD (2 – 羟丙基-β-环糊精)
• Dosages: 20 mg/kg
• Administration: 口服处理