A-966492是一种新型有效的PARP1和PARP2抑制剂，Ki分别为1 nM和1.5 nM。

特性

A-966492为有应用前景的，结构多样的苯并咪唑类似物，作为临床前期的典型。

靶点

体外研究

A-966492是最有效的PARP抑制剂之一。在所有细胞实验中，A-966492有效抑制PARP-1，EC50为1nM，Ki值为1 nM，作用于PARP-2时，Ki值为1.5 nM。A-966492作用于PARP酶具有极好的药效,尤其作用于C41细胞。A-966492明显增强TMZ的效果，这种作用存在剂量依赖性。A-966492是口服生物有效性的，可以跨多物种，跨血脑屏障，分布在肿瘤组织中。A-966492为有应用前景的，结构多样的苯并咪唑类似物。

体内研究

在体内，A-966492和Temozolomide联用作用于B16F10皮下黑色素瘤模型具有极好的药效，和Carboplatin联用作用于MX-1乳腺癌模型也具有极好的药效。此外，A-966492具有极好的药物属性，和TMZ及Carboplatin联用，作用于临床前期模型时具有高效性，作用于BRCA1缺陷的MX-1 肿瘤模型具有单药剂活性。A-966492也有效与作用于Sprague−Dawley鼠, 小猎犬,和食蟹猴。A-966492口服生物有效性达34−72%，半衰期为1.7−1.9小时。体内，A-966492明显增强 TMZ作用于鼠B16F10同源黑色素瘤模型的效果。

PJ34.HCl

MB1643

Rucaparib;AG-014699

MB3750

UPF 1069

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0831 mL

15.4154 mL

30.8309 mL

5 mM

0.6166 mL

3.0831 mL

6.1662 mL

10 mM

0.3083 mL

1.5415 mL

3.0831 mL

50 mM

0.0617 mL

0.3083 mL

0.6166 mL

PARP酶实验:
酶反应在含50 mM Tris, pH 为8.0, 1 mM二硫苏糖醇(DTT), 和4 mM MgCl2的buffer中进行。PARP反应包含1.5 μM [3H]-NAD+(1.6 μCi/mmol), 200 nM生物素化的组蛋白H1, 200 nM slDNA,和1 nM PARP-1或4 nM PARP-2 酶。在100 μL的96孔板上进行使用SPA检测的自反应。加入50 μL 2X NAD+底物混合到含PARP和DNA的50 μL2X酶混合物中，开始反应。加入150 μL 1.5 mM Benzamide，反应终止。170 μL终止反应混合物转移到链霉素包被的板上, 温育1小时，使用TopCount微板闪烁计数器计数。测定Ki值，绘制不同底物浓度的抑制曲线。

细胞实验：

• Cell lines: C41 细胞
• Concentrations: 10nM 左右
• Incubation Time: 30分钟
• Method:

C41细胞在96孔板上用A-966492处理30分钟，使用1 mM H2O2损伤DNA，持续10分钟，而激活PARP。用冰冻的PBS冲洗一次细胞，和预冷的甲醛/丙酮 (7:3)在-20oC下混合10分钟。烘干后，用PBS水化实验板中混合物，使用溶于PBS-Tween(0.05%) (阻断液)的5%脱脂干奶粉在室温下阻断30分钟。细胞和PAR抗体在阻断液中室温下温育60分钟，然后用PBS-Tween-20冲洗5次,然后和荧光素5(6)-异硫氰酸酯(FITC)-联合的二抗和1 μg/mL 40,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI) 在阻断液中室温下温育60分钟。用PBS-Tween-20冲洗5分钟后，使用荧光微板计数器分析FITC和DAPI的波长。使用细胞数(DAPI)归一化PARP活性(FITC信号)。

动物实验：

• Animal Models: 45%基质胶和45% Spinner MEM培养基中 0.2 cc 量的1:10稀释的肿瘤糊浆皮下注射到雌性SCID鼠腹侧
• Formulation: —
• Dosages: 每天12.5, 25,和50 mg/kg,持续14天
• Administration: 口服处理