Palbociclib (PD0332991) Isethionate是一种高度选择性的CDK4/6抑制剂，无细胞试验中IC50为11 nM/16 nM，对CDK1/2/5，EGFR，FGFR，PDGFR， InsR等没有抑制活性。

特性

PD 0332991治疗多种癌症，特异性抑制CDK4/6，是第一种有前途的抑制剂。

靶点

体外研究

PD 0332991对CDK4/6具有绝对选择性，对其他CDKs几乎没有抑制活性。PD 0332991作用于MDA-MB-435乳腺癌细胞，有效降低Rb在Ser780 和 Ser795位点磷酸化，IC50分别为66 nM和63 nM。PD 0332991通过抑制细胞进入S期，有效抑制细胞生长，抑制 DNA复制。PD 0332991抑制胸苷渗透进Rb阳性人类乳腺癌(如MDA-MB-435, MCF-7), 结肠癌 (H1299), 和肺癌(Colo-205) 及白血病(CRRF-CEM和K562)的DNA中，IC50值为0.04-0.17 μM。PD 0332991显著增强MDA-MB-453在G1期的百分比。]PD 0332991作用于CD138+原发性骨髓瘤细胞，初级非转化的B细胞，MM1.S和CAG HMCLs细胞系，抑制Rb磷酸化，IC50分别为 <0.1 μM, 0.05 μM, 和 60-70 nM。PD 0332991作用于CD138+原发性骨髓瘤细胞和初级非转化的B细胞，诱导细胞停滞在G1期。PD 0332991诱导MM1.S细胞停滞在G1期，IC50为~0.05 μM。PD 0332991优先抑制Luminal雌激素受体阳性(包括HER2阳性)人类乳腺癌细胞系。PD 0332991作用于大部分敏感的细胞系，促进pRb和cyclin D1基因表达，且降低CDKN2A(p16)基因表达。PD 0332991作用于条件性抗ER抑制的细胞系，增强对Tamoxifen的敏感性。

体内研究

PD 0332991(150 mg/kg)作用于Colo-205结肠癌移植瘤，诱导肿瘤快速衰退，肿瘤生长相应延迟。PD 0332991(150 mg/kg)作用于MDA-MB-435乳腺癌，诱导全部肿瘤停滞和杀死细胞。PD 0332991(150 mg/kg)处理携带SF-295胶质母细胞瘤，和ZR-75-1乳腺癌和PC-3前列腺肿瘤模型(完全抑制肿瘤生长)的小鼠，显著诱导肿瘤衰退。PD 0332991 (150 mg/kg)处理 MDA-MB-435乳腺癌超过24小时，抑制Rb在Ser780位点磷酸化。PD 0332991(150 mg/kg)处理Colo-205 移植瘤，下调四种E2F调节的基因CDC2, CCNE2, TK1, 和 TOP2A表达。PD 0332991也快速抑制骨髓瘤生长。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7432 mL

8.7160 mL

17.4319 mL

5 mM

0.3486 mL

1.7432 mL

3.4864 mL

10 mM

0.1743 mL

0.8716 mL

1.7432 mL

50 mM

–

–

–

CDK活性实验:
在96孔过滤板中进行动力学测评，测定CDK实验的IC50值。所有的CDK-cyclin激酶复合物在昆虫细胞中通过杆状病毒感染而表达，并进行纯化。实验底物是与GST(GST•RB-Cterm)融合的pRb组分(792–928位氨基酸)。总反应体积为0.1 mL，包含终浓度20 mM Tris-HCl,pH 7.4, 50 mM NaCl,1 mM 二硫苏糖醇,10 mM MgCl2，含0.25 μCi[γ-32P]ATP的25 μM ATP(作用于 CDK4-cyclin D1, CDK6-cyclin D2, 和 CDK6-cyclin D3), 20 ng 酶, 1 μg GST•RB-Cterm, 及适度稀释的抑制剂。每孔加入全部组分，除了[γ-32P]ATP，置于混合器中2分钟。加入[γ-32P]ATP开始反应,在25°C下温育15分钟。加入0.1 mL 20% 三氯乙酸终止反应, 实验板置于4°C至少1小时，使底物沉淀。每孔使用 0.2 mL 10%三氯乙酸洗涤 五次，使用β计数器测定渗透的放射性。

细胞实验

• Cell lines: 人类乳腺癌细胞MDA-MB-435
• Concentrations: 2 μM
• Incubation Time: 6 天
• Method: 细胞按一式两份每孔5,000 到10,000个细胞接种在24孔板中，接种后，加入不同浓度的PD 0332991。对照组不加入药物。温育末期，细胞胰蛋白酶化，并置于等渗溶液中，并立即使用Coulter Z2粒子计数器计数。

动物实验

• Animal Models: 人类结肠癌移植瘤Colo-205
• Formulation: 乳酸钠缓冲溶液(50 mM, pH 4.0)
• Dosages: 150 mg/kg
• Administration: 每天口服处理