PU-H71是有效的选择性HSP90抑制剂，IC50为51 nM。

特性

Purine-based, HSP90-selective inhibitor.

靶点

体外研究

PU-H71(1 μM)有效抑制三阴性乳腺癌(TNBC) 细胞系MDA-MB-468, MDA-MB-231, 和HCC-1806生长，IC50分别为65, 140 和 87 nM。PU-H71(1 μM) 分别杀死80%, 65%,和80%的MDA-MB-468, MDA-MB-231, 和 HCC-1806 细胞。PU-H71 (0.25-1 μM)诱导肿瘤驱动的分子降解和失活，包括EGFR, IGF1R, HER3, c-Kit, Raf-1和 Akt。1 μM PU-H71处理24小时，增强MDA-MB-468细胞在G2-M期百分比，达到69％，通过减少CDK1和Chk1表达来介导的。PU-H71作用于TNBC，通过下调Akt和 Bcl-xL，及抑制其活性，而诱导细胞凋亡。0.5 和 1μM PU-H71作用于MDA-MB-231细胞，降低蛋白酶体介导的IRAK-1和TBK1水平，NF-κB活性分别降低约84%和90%。PU-H71显著抑制MDA-MB-231细胞入侵，1 μM时抑制90％。PU-H71 (2.5 μM) 产生内质网（ER）应激，及通过XBP1 mRNA剪接（2.3倍），激活未折叠蛋白反应（UPR），且上调Grp94(3.7倍), Grp78(4.9倍), 和CHOP(48倍) 蛋白表达和ATF4(1.8倍) mRNA表达。PU-H71 (1 μM)作用于HeLa细胞，诱导细胞凋亡的线粒体途径，通过caspase而非calpain激活介导。为了应对PU-H71诱导的内质网应激，在黑色素瘤，子宫颈癌，结肠癌，肝癌和肺癌细胞，而非正常人成纤维细胞中触发细胞凋亡。PU-H71可以克服Bcl-2抗性而诱导细胞凋亡。PU-H71 (30 n M) 作用于LI(1 μg/mL LPS 和 5 ng/mL IFN γ)刺激的星形胶质细胞，通过抑制NF-κB 激活，而显著降低NOS2活性(降低60%) 和表达。PU-H71作用于小胶质细胞和星形胶质细胞，具有相似的作用效果，50nM PU-H71显著降低LPS依赖性的亚硝酸盐释放。

体内研究

PU-H71按75 mg/kg剂量处理MDA-MB-231 模型, 100％完全起作用，处理37天后，肿瘤被疤痕组织所取代，伴随着降低许多增殖和抗凋亡分子，EGFR, HER3, Raf-1, Akt, 和 p-Akt分别降低80％，95％，99％，80％和65％。PU-H71 (75 mg/kg, 每周三次)抑制96%肿瘤生长，降低60%肿瘤细胞增殖，与存活和高浸润性潜能相关的 活化Akt降低85%，细胞凋亡增加6倍。

STA-9090;STA9090

MB1634

17-AAG

MB4678

AT13387

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9517 mL

9.7586 mL

19.5171 mL

5 mM

0.3903 mL

1.9517 mL

3.9034 mL

10 mM

0.1952 mL

0.9759 mL

1.9517 mL

50 mM

0.0390 mL

0.1952 mL

0.3903 mL

HSP90 结合试验:
在黑色96孔微量滴定板中进行测量。通过破坏细胞膜制备细胞裂解液，冷冻在-70°C下，在添加蛋白酶和磷酸酶抑制剂的HFB[20 mM Hepes (K), pH 7.3, 50 mM KCl, 5 mM MgCl2, 20 mM Na2MoO4, 0.01% Nonidet P-40]中溶解细胞提取物。使用荧光标记的Geldanamycin(Cy3B-GM)(3 nM) 处理量不断增多的细胞裂解液，记录饱和曲线。导致极化（mP）的裂解液的量对应于竞争研究中的90％-99％结合配体。每组96孔板包含3 nM Cy3B-GM, 细胞裂解液(通过Western blot分析，使用从 HeLa 细胞纯化的Hsp90作为标准，测定量且归一化为总Hsp90) 和试验Hsp90 抑制剂，终浓度为100 μL。实验板在摇床上4°C下放置24小时，记录mP中的荧光偏振（FP）值。置换50% Cy3B-GM所需的浓度定义为EC50值。使用Analyst GT酶标仪进行FP测量。

细胞实验

• Cell lines: 人类三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231
• Concentrations: ~5μM
• Incubation Time: 3 天
• Method:

指数生长的MDA-MB-231细胞接种到黑色96孔微量滴定板中，在含对照（DMSO）或化合物的培养基中在指定时间在37°C下温育。每组实验条件下，实验板含3个重复孔，孔中为100μL培养基，其中每孔接种8×103个细胞。Hsp90 抑制剂处理细胞后，实验板平衡至室温（20-25°C）约30分钟，然后每孔加入100 μL CellTiter-Glo 试剂。实验板在定轨摇床上混合2分钟，然后在室温下温育15分钟到2小时。使用Analyst GT酶标仪测量每孔的发光值。

动物实验

• Animal Models: 人类三阴性乳腺癌移植瘤MDA-MB-231
• Formulation: PBS
• Dosages: 75 mg/kg
• Administration: 腹腔注射