Ganetespib (STA-9090)是一种HSP90抑制剂，在OSA 8种细胞中IC50为4 nM，诱导OSA细胞凋亡，而不影响正常的成骨细胞；是STA-1474的活性代谢物。

靶点

体外研究

Ganetespib对恶性肥大细胞系的50%抑制浓度(IC50)比对17-AAG低10-15倍，表明三唑酮类HSP90抑制剂可能比格尔德霉素类抑制剂具有更高的效能。Ganetespib抑制MG63细胞系，IC50为43 nM。Ganetespib结合于Hsp90的N末端ATP结合域，通过引起多重致瘤性Hsp90受体蛋白，包括HER2/neu，突变型EGFR，Akt，c-Kit，IGF-1R，PDGFRα，Jak1，Jak2，STAT3，STAT5，HIF-1α，CDC2和c-Met 以及Wilms’ tumor 1的降解，成为一种有效的Hsp90的抑制剂。Ganetespib，在纳摩尔级低浓度下，有效阻滞细胞增殖，并诱导广泛的人肿瘤细胞系凋亡，并且对许多受体酪氨酸激酶抑制剂-和tanespimycin-耐受的细胞系也具有作用。Ganetespib在一系列固体和血液肿瘤细胞系，包括那些对小分子酪氨酸激酶抑制剂耐受的表达突变激酶的细胞系，都表现出有效的细胞毒性。 Ganetespib治疗快速引起已知的Hsp90受体蛋白降解，表现出高于ansamycin抑制剂17-AAG的效能，并且在较短的暴露时间下也具有持续的活性。在另一个研究中，Ganetespib诱导恶性犬肥大细胞系凋亡。Ganetespib在非常低的浓度下，有效作用于C2和BR犬恶性肥大细胞，IC50分别为19和4 nM，而17-AAG抑制C2和BR犬恶性肥大细胞的IC50分别为958和44 nM。100 nM Ganetespib处理24小时后，所有处理过的细胞系，包括C2和BMCMCs细胞中WT和突变型Kit的表达被下调。然而，Ganetespib处理后不影响PI3K或HSP90的表达。

体内研究

Ganetespib给药导致几种肿瘤异种移植模型的小鼠体内肿瘤显著缩减，且似乎毒性较低。此外，与tanespimycin相比，Ganetespib具有更好的肿瘤渗透性。在恶性肥大细胞和OSA异种移植模型中，Ganetespib抑制体内肿瘤生长。 Ganetespib(25 mg/kg/day，3天)重复两个周期显著抑制肿瘤生长，%T/C值为18。Ganetespib能够被很好的耐受，载体对照和Ganetespib组相对于研究开始时的平均体重改变在第17天使分别为+0.3% 和-8.1%。

17-AAG

MB4678

AT13387

MB4058

BIIB021

MB4695

NVP-BEP800

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7442 mL

13.7212 mL

27.4424 mL

5 mM

0.5488 mL

2.7442 mL

5.4885 mL

10 mM

0.2744 mL

1.3721 mL

2.7442 mL

50 mM

0.0549 mL

0.2744 mL

0.5488 mL

• Cell lines: OSA细胞
• Concentrations: 0.001-1μM
• Incubation Time: 5天
• Method: 将1.5 × 103 OSA细胞接种于96孔板，在包含10%血清的完全培养基中培养过夜，以测定50%抑制浓度。板在第5天采集，随后用0.001，0.005，0.01，0.05，0.1，0.5和1 μM Ganetespib处理并分析。荧光测量使用酶标仪在485 nm激发波长和530 nm发射检测波长下进行。相对细胞数以对照孔的百分比计算：样品吸光度/DMSO处理的细胞吸光度× 100。

动物实验：

• Animal Models: 雌性严重的联合免疫缺陷(SCID)小鼠
• Formulation: 在DMSO中用20% Cremophor RH 40以1:10稀释
• Dosages: 25 mg/kg/day，持续 3 天
• Administration: 尾部静脉注射

Stattic,第一个非肽类小分子，最有效抑制STAT3激活和核易位，IC50为5.1 μM, 高选择性作用于STAT1。

靶点

STAT3

IC50

5.1 μM

体外研究

Stattic抑制gp130受体衍生的含磷酸化酪氨酸的肽结合到STAT3 SH2结构域，这种作用存在强烈的温度依赖性。Stattic对酪氨酸磷酸化的肽结合到酪氨酸激酶Lck的SH2结构域只有很微弱的作用效果。Stattic不抑制其他两个二聚体转录因子(c-Myc/Max 和Jun/Jun)的二聚化。Stattic抑制荧光素标记的磷酸化肽段结合到STAT1和STAT5b的SH2域。Stattic浓度为10 μM，选择性抑制DNA与STAT3二聚体结合。Stattic抑制STAT3在Tyr705位点磷酸化，而对STAT1在Tyr701(HepG2细胞)位点磷酸化或JAK1, JAK2, 和c-Src(MDA-MB-231和MDA-MB-235S细胞)磷酸化几乎没有抑制效果。Stattic增加STAT3依赖性的乳腺癌细胞系的凋亡率。

特征

Stattic是第一个非肽类小分子，抑制STAT3 SH2结构域的功能，无论在体外STAT3磷酸化状态。

S3I-201

MB4586

SH-4-54

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

4.7351 mL

23.6754 mL

47.3507 mL

5 mM

0.9470 mL

4.7351 mL

9.4701 mL

10 mM

0.4735 mL

2.3675 mL

4.7351 mL

50 mM

0.0947 mL

0.4735 mL

0.9470 mL

高通量筛选和荧光偏振检测:
在约30°C下进行筛选。通过实验化合物与STAT1, STAT5, 和 Lck 的SH2结构域结合的类似实验验证筛选的特异性。所有FP实验的Buffer组分的终浓度为10 mM HEPES(pH 7.5),1 mM EDTA,0.1% Nonidet P-40,50 mM NaCl,和10% DMSO。二硫苏糖醇的存在对抑制活性是必不可少的。肽序列为:STAT3,5-carboxyfluorescein-GY(PO3H2)LPQTV-NH2; STAT1, 5-carboxyfluorescein-GY(PO3H2)DKPHVL;STAT5, 5-carboxyfluorescein-GY(PO3H2)LVLDKW; 和 Lck, 5-carboxyfluorescein-GY(PO3H2)EEIP。在 30°C下进行特异性分析, 使用150 nM蛋白(STAT1,STAT3,和STAT5)。在37°C下进行分析，使用370 nM 蛋白(STAT3)或100 nM蛋白 (Lck)。蛋白与实验化合物在Eppendorf管中在指定温度环境下温育60分钟，然后加入相应的5-carboxyfluorescein标记的肽（终浓度为10 nM）。混合物至少平衡30分钟，然后在室温下测量。实验化合物在20×stock在DMSO中稀释到指定浓度。使用 SigmaPlot绘制结合曲线和抑制曲线。独立实验中，所有竞争曲线都需重复三次。

细胞实验

• Cell lines: Ly3细胞
• Concentrations: ~2.5 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method:MTS

动物实验

• Animal Models: Ly3亲本NOD/SCID IL2R移植瘤
• Formulation: —
• Dosages: 每天3.75 mg/kg
• Administration: 腹腔注射