参考《GB 31656.4-2021 食品安全国家标准 水产品中氯丙嗪残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》

        氯丙嗪是一种吩噻嗪类抗精神病药, 主要用于增强催眠、麻醉、镇静等。饲料中添加氯丙嗪对动物可起到间接催肥的作用。氯丙嗪主要在肝脏代谢, 在动物体内易产生药物残留, 残留的药物经食物链传递给人类, 给人类的身体健康带来很大危害。为加强兽药残留监控工作, 保证动物性食品卫生安全, 我国已发布标准《GB 31650-2019 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》，其中规定氯丙嗪是允许作治疗用, 但不得在动物性食品中检出。

        2021年9月16日发布《农业农村部公告388号》36项兽残检测方法标准中，包含水产品中氯丙嗪的检测，迪马科技参考《GB 31656.4-2021 食品安全国家标准 水产品中氯丙嗪残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定水产品中氯丙嗪残留量，利用乙腈均质提取，ProElut PXC净化，Spursil C18色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为1.0 μg/kg；回收率在70%-110%之间。方法实验过程基本参考标准。

        对比国标方法，本方案具有回收率高、净化效果优异、方法稳定性好、标准品峰形好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

1、适用范围

        本方案适用于鱼、虾、蟹可食组织中氯丙嗪残留量的检测。

2、标准品配制

1. 氯丙嗪标准储备液1.0 mg/mL：准确称取适量标准品，用甲醇配制成氯丙嗪1.0 mg/mL的储备液；
2. 氯丙嗪中间液：吸取适量氯丙嗪标准储备液，用甲醇配制成0.1 μg/mL的中间液；
3. 氯丙嗪内标储备液100.0 μg/mL：氯丙嗪-D6，甲醇配制，直接购买的内标储备液；
4. 氯丙嗪内标中间液：吸取适量氯丙嗪内标储备液，用甲醇配制成0.2 μg/mL中间液。

3、提取

1. 称取5 g样品，加入氯丙嗪内标中间液50 μL和15 mL乙腈，均质1 min，超声10 min，6000 rpm离心2 min，取出上清液；

2. 另取10 mL乙腈清洗均质机30 s，洗液倒入下层残渣中，涡旋混合2 min，超声10 min，6000 rpm离心2 min，取出上清液；

3. 合并两次上清液，待净化。

4、净化——ProElut PXC 60 mg/3 mL (Cat.#: 68203)

*定容液: 甲醇:2 mmol/L乙酸铵溶液(体积比3:7), (2 mmol/L乙酸铵溶液: 称取0.154 g乙酸铵，加入1 mL甲酸，定至1000 mL)。

5、分析条件   

UPLC 条件

色谱柱：Spursil C18, 100 x 2.1 mm, 3 μm  (Cat#：82012)

流  速：0.3 mL/min    进样量：5 μL    柱 温：30 ℃

流动相：A: 0.1%甲酸-2 mmol/L乙酸铵溶液     B: 甲醇

梯度

质谱条件

电离模式：ESI                           扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测                电喷雾电压：5500 V

雾化气压力：50 psi                    辅助气压力：50 psi

气帘气压力：20 psi                    离子源温度：500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

水产品中氯丙嗪检测的添加回收结果(%)

图1 氯丙嗪标准品(20.0 μg/L)检测的MRM图

  图2 氯丙嗪标准品(5.0 μg/L)检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

 
图3 氯丙嗪标准品(20.0 μg/L)检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

 
图4 黄花鱼(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图5黄花鱼(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图6 黄花鱼(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

 
图7 海蟹(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图8 海蟹(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图9 海蟹(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图10 河蟹(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

  
图11 河蟹(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图12 河蟹(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图13 海水虾(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图14 海水虾(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图15 海水虾(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

  图16 淡水虾(添加水平为1.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图17 淡水虾(添加水平为4.0 μg/kg)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

图18 淡水虾(空白样品)中氯丙嗪检测的XIC图(左图为氯丙嗪标准品，右图为氯丙嗪-D6)

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ProElut AFT 系列黄曲霉毒素专用SPE柱，可实现与免疫亲和法相当的高精度回收率结果，但使用成本却大大降低。ProElut AFT 固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和法的1/4，酶联免疫法的1/2。

参考《GB 31656.6-2021 食品安全国家标准 水产品中丁香酚残留量的测定 气相色谱－质谱法》

        丁香酚是一类具有丁香花味道的液体化合物，具有抑菌、杀病毒的作用。水产领域使用丁香酚是利用其可抑制水产品中枢神经系统的功能，在水产品繁育、手术和运输环节，可显著降低应激反应并减少剧烈挣扎造成的鱼、虾类损害，使成活率大大提高。由于丁香酚存在一定毒性，非法使用容易在鱼、虾体内残留，食用后对人体健康造成危害。

        2021年9月16日农业农村部发布《中华人民共和国农业农村部公告 第388号》 36项食品安全国家标准，自2022年2月1日起实施，其中包含丁香酚的测定。迪马科技参考《GB 31656.6-2021 食品安全国家标准 水产品中丁香酚残留量的测定 气相色谱－质谱法》，建立了SPE-GC-MS测定水产品中丁香酚残留量的方法。使用乙腈提取，乙腈饱和过的正己烷除脂，ProElut C18固相萃取柱净化；定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg，回收率符合标准要求。

        本方案具有提取方法简单、回收率高、净化效果优异、方法稳定性好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

1、适用范围

本方案适用于鱼、虾可食组织中丁香酚残留量的检测，定量限为10 μg/kg。

2、标准品配制

1. 丁香酚标准储备液1000 μg/mL：准确称取10 mg标准品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，配制成1000 μg/mL的丁香酚标准储备液；
2. 内标储备液500 μg/mL：准确称取5 mg标准品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，配制成500 μg/mL的内标储备液；
3. 丁香酚标准工作液1.0 μg/mL：准确移取丁香酚标准储备液，用乙酸乙酯稀释为浓度1.0 μg/mL的丁香酚标准工作液；

4. 内标工作液1.0 μg/mL：准确移取内标储备液，用乙酸乙酯稀释为浓度1.0 μg/mL的内标工作液。

3、提取

1. 取2 g样品于50 mL塑料离心管中，加入内标工作液0.1 mL和10 mL乙腈，涡旋1 min，超声10 min，4000 rpm离心5 min，收集上清液于另一50 mL离心管中；

2. 向下层残渣中再加入10 mL乙腈，按步骤(1)重复提取一次，合并上清液；

3. 加入10 mL正己烷(乙腈饱和)，脱脂，涡旋1 min，4000 rpm离心5 min，取乙腈层，按上述方法重复脱脂一次；
4. 将乙腈层在45 ℃水浴下缓慢通入氮气吹至近干，加入10 mL 10%甲醇水溶液，混匀，待净化。

4、净化——ProElut C18 300 mg/3 mL (Cat.#: 63167)

5、分析条件   

色谱柱：DM-5MS, 30 m x 0.25 mm x 0.25 μm (Cat.#: 8221)

进样口温度：280 ℃

升温程序：初始温度70 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升温至120 ℃，再以10 ℃/min升温至170 ℃，保持3 min

载气：氦气，流速：1.00 mL/min

进样方式：不分流进样，进样量：2.0 μL

离子源温度：280 ℃

接口温度：280 ℃

溶剂延迟：5 min

电子轰击电离源(EI)：选择离子监测模式(SIM)，分组监测见表1

表1 选择离子监测组表

6、添加回收结果

鱼、虾中丁香酚残留量检测的添加回收结果(内标法计算)(%)

丁香酚标准品100 ng/mL的XIC(m/z 164)图

丁香酚-d3内标100 ng/mL的XIC(m/z 167)图

标准曲线的制备：
        精密量取丁香酚标准工作液、内标工作液适量，用乙酸乙酯稀释成浓度为4 μg/L、10 μg/L、40 μg/L、100 μg/L、400 μg/L、800 μg/L丁香酚系列标准工作液。标准工作液中氘代丁香酚的含量均为100 μg/L。现配现用。取系列标准工作液进样，以丁香酚和氘代丁香酚峰面积比值为纵坐标，对应丁香酚浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。求回归方程和相关系数。

Y = 0.9518499X + 5.068258e-003
R^2 = 0.9998966

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        根据固定相描述，结合填料物化性质与保留模式相似程度，下表给出了不同品牌 HPLC/UHPLC 色谱柱交叉参考表。我们不能保证推荐的色谱柱保留时间和选择性与其他品牌完全一致，但是通过方法优化后可以得到最接近的结果。使用者应该根据已有色谱柱信息来 选择替换产品以满足分离要求。以下信息仅供参考。

ProElut PSX GLASS—纺织品阻燃剂、增塑剂的检测专用SPE柱
ProElut PAEs GLASS—油脂中塑化剂检测专用小柱

参考《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》

        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，畜禽肉项下的氟苯尼考检验项目中新增了《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，同时，在1.5.2.4中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。

        迪马科技参考《GB 31658.5-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了测定动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺的SPE-UPLC-MS/MS法。利用氨化乙酸乙酯提取，ProElut PXC净化，Endeavorsil C18色谱柱分离检测, 定量限与标准方法一致，为10.0 μg/kg；回收率在70%-120%之间。本方案增加了水淋洗步骤，减小了基质效应，提高了灵敏度。同时流动相改乙酸铵为水相，提高了样品检测的稳定性。

        对比国标方法，本方案具有净化效果优异、灵敏度高、方法稳定性好等优点；适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定

1、适用范围

        本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的检测。

2、标准品配制

1. 单标储备液：分别称取适量氟苯尼考及氟苯尼考胺标准品，用甲醇配制成1.0 mg/mL的单标储备液；

2. 混合标准工作液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成10.0 μg/mL和1.0 μg/mL的混合标准工作液；

3. 氘代氯霉素储备液：准确称取适量氘代氯霉素，用甲醇配制成100.0 μg/mL，本标准溶液为直接购买；

4. 氘代氯霉素工作液：吸取适量氘代氯霉素储备液，用甲醇配制成100 ng/mL的氘代氯霉素工作液。

3、提取

1. 称取2 g样品，加入氘代氯霉素工作液100 μL，涡动混匀，静置15分钟；

2. 加入10 mL乙酸乙酯-氨水溶液*，涡旋混合1 min，6000 r/min离心2 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣重复提取2次，合并3次提取液；

3. 向鸡心瓶中加入2 mL 5%乙酸水溶液*，混匀，于40 ℃水浴中减压旋蒸浓缩至1.5 mL；

4. 将浓缩液转至15 mL离心管中，用2 mL 5%乙酸水溶液洗涤鸡心瓶，洗涤液转至同一离心管中；

5. 继续向步骤(4)的离心管中加5 mL正己烷，涡旋混合1 min，6000 r/min离心2 min,弃上层，下层提取液重复脱脂一次，待净化。

* 乙酸乙酯-氨水溶液：取乙酸乙酯98 mL,加氨水2 mL，混匀

* 5%乙酸水溶液：取乙酸5 mL，用水溶解并稀释至100 mL

4、净化——ProElut PXC 60 mg/3 mL (Cat.#: 68203)

*注: 同方法制备基质匹配标准溶液。

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱：Endeavorsil C18，100 x 2.1 mm，1.8 μm  (Cat.#：87003)

流  速：0.25 mL/min      进样量：5 μL    柱  温：40 ℃

流动相：     A ：10mmol/L乙酸铵溶液       B：乙腈

质谱条件

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

动物性食品中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的添加回收结果及基质效应(%)

图1 氟苯尼考胺及氟苯尼考标准品(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图2 猪肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图3 猪肉(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图4 猪肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图5 鸡肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图6 鸡肉(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图7 鸡肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图8 猪肝基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图9 猪肝(添加水平为10 μg/kg)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图10 猪肝(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的MRM图

(上图为氟苯尼考胺，下图为氟苯尼考及氯霉素-D5)

图11 氟苯尼考胺及氟苯尼考标准品(40.0 ng/mL)检测的XIC图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图12 猪肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

  图13 猪肉(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图14 猪肉(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图15 鸡肉基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

  图16 鸡肉(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图17 鸡肉中(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图18 猪肝基质匹配氟苯尼考胺及氟苯尼考(40.0 ng/mL)检测的XIC图(基质标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

  图19 猪肝(添加水平为10 μg/kg)中氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC图(前加标)

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

图20 猪肝中(空白样品)氟苯尼考胺及氟苯尼考检测的XIC 图

(从左至右分别为氟苯尼考胺、氟苯尼考、氯霉素-D5)

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参考《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》

        2022年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2021年相比，畜禽肉及副产品和水产品项下的氯霉素检验项目中新增了《GB 31658.2-2021 食品安全国家标准 动物性食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱－串联质谱法》，同时，在1.5.2.4及3.5.2.5中指定其为2022年2月1日(含)起的指定检验方法。

        迪马科技参考GB 31658.2-2021建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定动物性食品中氯霉素残留量，使用乙腈提取，乙酸乙酯反萃，Diamonsil C18(2)色谱柱分离检测；定量限与标准方法一致，为0.1 μg/kg；回收率在80%-110%之间。实验过程基本参考标准，本方法回收率高，稳定性好，通过对C18小柱的考察，最终采用ProElut C18-U净化。适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等参考。

动物性食品中氯霉素残留量的测定 UPLC-MSMS法 解决方案

1、适用范围

        本方案适用于猪肉、鸡肉、猪肝和鸡肝等样品中氯霉素残留量的检测。

2、标准品配制

(1)  氯霉素储备液0.1 mg/mL: 准确称取适量标准品，用甲醇配制成氯霉素0.1 mg/mL的储备液；

(2)  氯霉素标准工作液: 吸取适量氯霉素储备液，用流动相稀释成0.01 μg/mL和0.05 μg/mL；

(3)  氯霉素内标储备液100.0 μg/mL: 称取适量氯霉素-D5(CAS#: 202480-68-0)，用甲醇配制；

(4)  氯霉素内标工作液: 吸取适量内标储备液，用流动相稀释成0.02 μg/mL。

3、提取

(1)  称取5.0 g样品，加入氯霉素内标工作液250 μL、5 mL乙腈和5 mL 4%氯化钠溶液，涡旋振荡2 min，

6000 rpm离心2 min，取上清液；

(2)  向下层残渣中继续加入5 mL乙腈和5 mL 4%氯化钠溶液，按照步骤(1)重复提取一次，合并两次上清液；

(3)  向上清液中加入正己烷5 mL，涡旋1 min，6000 rpm离心2 min，弃去上层液；再加入5 mL正己烷重复处理1次；

(4)  加水饱和的乙酸乙酯溶液5 mL，涡旋1 min，6000 rpm离心2 min，将上层清液转移到氮吹管中，重复提取一次，合并提取液；

(5)  40 ℃水浴下氮吹至近干(约0.2 mL)，加5%乙腈水3 mL溶解，混匀，待净化。

4、净化——ProElut C18-U 500 mg/6 mL (Cat.#: 63505)

*注: 同方法制备基质匹配标准溶液。

5、分析条件

UPLC 条件                 

色谱柱:  Diamonsil C18(2)，150 x 3.0 mm，5 μm (Cat.#: 99628)

流  速:  0.4 mL/min    进样量:  5 μL   柱  温:  30 ℃

流动相:  A : 水       B: 甲醇         A:B=1:1

质谱条件

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

6、添加回收结果

动物性食品中氯霉素检测的添加回收结果(%)