SR3335 是一种选择性的RORα 配体，直接结合到 RORα (Ki 220 nM) 而非其他 RORs，在细胞实验中，用作选择性的 RORα反向激动剂。

靶点

Ki: 220 nM (RORα)

体内研究

SR3335是一种选择性RORα部分逆转激动剂。在以[3H]25-羟基胆固醇为标记物的生化放射配体结合分析中，显然未标记的SR3335与RORαLBD的结合存在剂量依赖性的竞争。Ki使用Cheng-Prusoff方程计算为220nM。在基于细胞的嵌合受体Gal4 DNA结合域-NR配体结合域共转染实验中，SR3335显著抑制RORα的构成性反激活活性(IC50＝480nM)(部分反向激动剂活性)，但对LXRα和RORγ的活性没有影响。

体外研究

药代动力学研究表明，SR3335在注射入小鼠体内后显示出合理的暴露。SR3335的能力是使用饮食诱导肥胖（DIO）小鼠模型来评估的，其中小鼠用15mg/kg的b.i.d，i.p.处理6天，然后进行丙酮酸耐量试验。SR3335处理的小鼠在丙酮酸激发后显示出较低的血糖水平，这与抑制糖异生是一致的。重要的是，SR3335处理的小鼠在用SR3335处理7天后在体重和食物摄取方面没有表现出差异。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4671 mL

12.3353 mL

24.6706 mL

5 mM

0.4934 mL

2.4671 mL

4.9341 mL

10 mM

0.2467 mL

1.2335 mL

2.4671 mL

SR3335在DMSO中制备并储存，然后在使用前用适当的介质稀释。 
HEK293细胞在Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中维持，DMEM中添加10%胎牛血清，在37℃下，5%CO2浓度下。HepG2细胞在添加10%胎牛血清的最低基本培养基中在5%CO2浓度下37℃维持并常规增殖。转染前24小时，将细胞以15×103个细胞/孔的密度在96孔板中电镀。使用Lipo.amineTM 2000进行转染。转染后16h，用载体或SR3335处理细胞。治疗后24小时，使用双GloTM荧光素酶测定系统测定荧光素酶活性。这些数值代表四个独立转染井的平均±S.E.这些实验至少重复三次。

动物实验

SR3335在DMSO中制备，并用生理盐水或PBS稀释。 
小鼠 
30周龄的饮食诱导肥胖（DIO）C57BL/6雄性小鼠是从Jackson实验室购买的，这些雄性小鼠断奶后保持65%Kcal的高脂饮食。DIO小鼠每天用15mg/kg SR3335或载体处理2次(07:00h和18:00h)，连续6天，在处理第6天进行丙酮酸盐耐受试验。在注射SR3335后清晨从小鼠体内取出食物，禁食6小时，在13:00h进行丙酮酸耐量试验。从尾夹取时间0血糖，通过注射2g/kg丙酮酸i.p.开始丙酮酸激发，随后在15、30和60分钟测量血糖。血糖用触摸式血糖仪测量。

ML130 (Nodinitib-1)是一种有效的，选择性的NOD1抑制剂，IC50为0.56 μM，抑制NF-κB激活，比作用于NOD2选择性高36倍。

靶点

体外研究

ML130可以选择性抑制HEK293细胞中NOD1诱导的NF-κB 激活并且没有细胞毒性，已被选为潜在的探针分子。在第二项实验中也证实ML130可以选择性抑制NOD1依赖的IL-8 分泌和NOD1依赖的NF-κB激活通路。另外一项研究发现ML130 可以引起 NOD1体外构象改变和它的细胞内亚细胞定位，这为研究NOD1活性调节机制提供了一种化学探针同时也为研究NOD1在多种感染和炎症疾病中的作用提供了一种工具。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.4802 mL

17.4010 mL

34.8020 mL

5 mM

0.6960 mL

3.4802 mL

6.9604 mL

10 mM

0.3480 mL

1.7401 mL

3.4802 mL

50 mM

0.0696 mL

0.3480 mL

0.6960 mL

NOD1 剂量反应分析:
第一天实验流程 ：1) 带有NFKB-Luc的 HEK-293-T长满后收集细胞2) 加入带有Multidrop的 NOD 分析培养基3) 1000 rpm 离心1分钟4) 连续稀释药物溶液5)细胞悬液中加入0.75μg/mL gamma-tri-DAP. 6)在TC处理过的平板中每孔接种13000 个细胞7) 500 RPM离心5分钟。第二天实验流程：1)每孔加入3μL含有Multidrop的SteadyGlo 溶液。2) 在摇床上将平板摇晃20 分钟。3) 将平板1000 RPM离心1分钟。4) 记录荧光数值。利用GraphPad Prism 5.0来计算IC50值，屏幕平均Z’为0.6, 背景信号11.1, 噪音信号78.6，窗口信号 6.0。

细胞实验

• Cell lines: Fa2N-4 细胞
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 24小时
• Method: 在Fa2N-4永生人源肝细胞中利用ATP-lite一步分析法荧光试剂盒检测药品的肝毒性。将Fa2N-4 细胞按50,000 个/孔的密度接种在含有MFE培养基的培养板中与不同浓度的药品(0.01 µM-50 µM)孵育24小时，孵育条件37℃, 5% CO2 。实验最后加入D-荧光素和荧光素酶。利用Infinite M200酶标仪检测荧光信号来反应实验中捕获的细胞内ATP量。利用统计软件包Prism4与抑制剂对数与可变斜率的响应方程进行不同药物半致死量的非线性回归分析。