GSK1059615是双重PI3Kα/β/δ/γ (可逆的)和mTOR抑制剂，IC50分别为0.4 nM/0.6 nM/2 nM/5 nM 和 12 nM。

靶点

PI3Kα

PI3Kβ

PI3Kγ

PI3Kδ

IC50

0.4 nM

0.6 nM

5 nM

2 nM

体外研究

GSK1059615也抑制mTOR，IC50为12 nM。GSK1059615抑制PI3K通路，诱导细胞停滞在G1期，可观察到凋亡。GSK1059615有效作用于胸腺癌细胞。GSK1059615作用于T47D和BT474癌细胞，是PI3K抑制剂，降低细胞内AKT在Ser473位点磷酸化，IC50为40 nM。

体内研究

GSK1059615 作用于携带移植瘤的小鼠，完全抑制肿瘤生长, 且血浆胰岛素水平提高。GSK1059615按25 mg/kg剂量,口服给药BT474 或HCC1954胸腺癌，每天两次，导致瘀血或肿瘤衰退。

特征

GSK1059615是GlaxoSmithKline的第一个PI3K临床化合物。

CUDC-907

MB5316

CZC24832

MB3215

Duvelisib (IPI-145)

MB3886

GDC-0032

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.9998 mL

14.9988 mL

29.9976 mL

5 mM

0.6000 mL

2.9998 mL

5.9995 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

激酶实验:
GSK1059615溶于0.1 μL 100% DMSO，然后加384孔板上,但是第6列和第18列不加。GSK1059615从第1列到12列以及从第13列到24列连续稀释，第6列和第18列的孔中仍然只含DMSO，获得11种不同浓度。实验 buffer含MOPS (pH 6.5), CHAPS, 和DTT。PI3Kα和PIP2(L-alpha-D-肌肉-磷脂酰环己六醇4,5-二磷酸[PI(4,5)P2]3-O-二氧磷酸基相连的,D(+)-sn-1,2-di-O-辛酰甘油基)混合，然后在板中和GSK1059615温育30分钟，然后加入P33-ATP 和MgCl2开始反应。没有酶的孔（第18列）作为低对照组。加入溶于 PBS/EDTA/CHAPS 的PEI-PS铅头珠而终止反应，然后板再温育至少1小时（一般情况是温育过夜），然后进行离心。 使用Viewlux检测器测定信号，然后 输入曲线拟合软件用于绘制浓度反应曲线。 根据高对照组 (C1, 0.1 μL DMSO，第6列， A-P行)和低对照组 (C2, 第18列,第A-P行),使用 100*(1-(U1-C2)/(C1-C2))公式计算抑制活性百分数。

细胞实验：

• Cell lines: BT474, HCC1954和T-47D细胞
• Concentrations: 1 μM 左右
• Incubation Time: 72小时
• Method: 培养BT474, HCC1954 和T-47D (人类胸腺细胞)。细胞分到T75 烧瓶中，进行2到3天，然后开始实验，到收集的时候获得70-80% 融合细胞。使用0.25%胰蛋白酶-EDTA获得细胞。使用台酚蓝排除性染色在细胞悬浮液中测定细胞数。细胞接种在384孔黑色平底板上，板上含48 μL 培养基，每孔接种103个细胞，过夜处理。第二天，加入GSK1059615。实验第一天，用CellTiter-Glo处理板，然后测量读数。连续稀释两次的GSK1059615储备在384孔板上。4 μL 稀释液加到105 μL 培养基中, 混合后, 细胞板的每孔中加入2 μL 这种稀释液。DMSO 终浓度为0.15%。细胞温育72小时。然后计数。然后在实验板上加同等体积的CellTiter-Glo试剂。震荡板2分钟，在室温下温育30分钟，然后在Analyst GT 计数板上读取化学发光信号。使用 XLfit 软件绘制剂量反应曲线，测定IC50值。

动物实验：

• Animal Models: 携带BT474 或HCC1954的小鼠
• Formulation: 在溶于水的10% 丙二醇中配制
• Dosages: 25 mg/kg
• Administration: 注射处理

GSK1070916是一种可逆的，ATP竞争性的Aurora B/C抑制剂，IC50为3.5 nM/6.5 nM，比作用于紧密相关的Aurora A-TPX2复合体选择性高100倍以上。

靶点

体外研究

GSK1070916选择性抑制Aurora B和Aurora C，Ki为0.38 nM和1.5 nM，而作用于Aurora A 的Ki为490 nM。Aurora B和Aurora C的抑制是时间依赖性的，酶抑制解离半衰期分别为>480 min和270 min。此外，GSK1070916也是ATP竞争性抑制剂。GSK1070916处理人肿瘤细胞，剂量依赖性抑制Aurora B特异性底物，丝氨酸10上组蛋白H3的磷酸化。此外，GSK1070916抑制肿瘤细胞的增殖，在超过100种广泛肿瘤类型的细胞系中，EC50 <10 nM，中值EC50为8 nM。虽然GSK1070916对增殖细胞具有有效活性，但是效能在原代，不分裂的，正常人血管内皮细胞中显著变化。此外，GSK1070916-处理的细胞不会停滞在有丝分裂期，而使其不能分裂，变为多倍体，最终导致细胞凋亡。在另一项研究中，据报道，高水平染色体数与抗Aurora B与C的抑制相关，表明具有绕开高倍性检查点机制的细胞对GSK1070916耐药。

体内研究

GSK1070916(25，50，或100 mg/kg)在小鼠体内剂量依赖性抑制Aurora B特定底物的磷酸化作用，与其广泛的细胞活性相一致，在10种人肿瘤异种移植模型中，包括乳腺，结肠，和两种白血病模型中具有抗肿瘤作用。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9699 mL

9.8497 mL

19.6994 mL

5 mM

0.3940 mL

1.9699 mL

3.9399 mL

10 mM

0.1970 mL

0.9850 mL

1.9699 mL

50 mM

0.0394 mL

0.1970 mL

0.3940 mL

激酶试验:
GSK1070916抑制Aurora酶的能力使用体内激酶试验测量。该试验测量Aurora A，Aurora B 和Aurora C使合成肽底物磷酸化的能力。对于所有3种Aurora激酶，生物素-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2用于Aurora A–TPX2 LEADseekerTM试验，5FAM-PKAtide用于IMAPTM试验。考虑到Aurora酶的时间依赖性抑制，加入底物起始反应前，Aurora A–TPX2，Aurora B–INCENP和Aurora C–INCENP与不同浓度的GSK1070916培养30分钟。对于Aurora A LEADseekerTM试验，终试验浓度为0.5 nM Aurora A–TPX2，1 μM多肽底物，6 mM MgCl2，1.5 μM ATP，含0.003 μCi/μL [γ-33P] ATP的50 mM Hepes，pH 7.2，0.15 mg/mL BSA，0.01% Tween-20，5 mM DTT 和 25 mM KCl。反应在室温(25 °C)下培育120分钟，加入含有LEADseekerTM磁珠和EDTA的PBS(终浓度为2 mg/mL磁珠和25 mM EDTA)终止。然后将板密封，将磁珠静置过夜。形成的产物使用Viewlux 成像仪定量。对于IMAPTM试验，将Aurora A–TPX2 (终浓度1 nM)，Aurora B–INCENP (终浓度2 nM) 或Aurora C–INCENP (终浓度2.5 nM)加入平板中包含0.15 mg/mL BSA，0.01% Tween 20 和 25 mM NaCl 的5 μL缓冲液(对于Aurora A，25 mM Hepes，pH 7.2，对于Aurora B，25 mM Hepes，pH 7.5，对于Aurora C，20 mM Hepes，pH 7.2)中。混合物在室温下培育30分钟。为起始反应，5 μL底物溶液加入包含相同Hepes的缓冲液，25 mM NaCl，MgCl2 (Aurora A, B 和C分别为2, 4 和4 mM)，DTT (Aurora A, B 和C分别为4, 4 和2 mM)，ATP (Aurora A, B 和C分别为4, 4和10 μM)，200 nM 5FAM-PKAtide，0.01% Tween 20和0.15 mg/mL BSA，用于预培养。对于Aurora A 和B，反应在室温下培育120分钟，Aurora C培育60分钟。然后这些反应通过加入10 μL 1:500 (1:600对于Aurora C)渐进结合试剂，即95%渐进结合缓冲液 A 和5%渐进结合缓冲液B终止反应。板在室温下培育大约90–120分钟(允许达到平衡的时间)。板在Molecular Devices Analyst酶标仪上通过荧光偏振模式读取数据。

细胞实验

Cell lines: SW48，Colo 201，SW480，WiDr，Colo205，RKO E6，RKO，LoVo，HCT-116，SW620，HT29，W1417，DLD-1，HCT-8，Colo 320HSR，Hep-3B，OVCAR-3，MEC-1细胞

• Concentrations: 0-15 mM
• Incubation Time: 6-7 天
• Method: 将细胞接种在96孔板推荐的生长培养基中，在37 °C ，5% CO2中培养过夜。第二天，细胞用一系列稀释的GSK1070916处理。此时，一组细胞用CellTiter-Glo处理一段时间，相当于时间为0(T = 0)时测量。用化合物培养6到7天后，细胞增殖使用CellTiter-Glo试剂根据制造商建议的方案测量。Aurora B的抑制诱导核内有丝分裂，作用程度根据细胞类型有所不同，延伸化合物处理时间以精确反映对一大组细胞系的细胞活性的作用。对于细胞活性的分析，减去没有细胞的孔中得到的值，进行背景校正，数据使用Microsoft Excel XLfit4软件以DMSO-处理的对照组样品的百分比绘图。EC50值代表50%最大作用时GSK1070916的浓度。

动物实验

Animal Models: 小鼠肿瘤异种移植模型(A549，SW620，HCT116，H460，MCF-7，HL60，K562，Colo205)

• Formulation: 2% 聚氧乙烯蓖麻油，2% N,N-二甲基乙酰胺，和 96% 酸化水(pH 5.0)
• Dosages: 25，50，或 100 mg/kg
• Administration: 静脉注射给药，每天一次

GSK126 是一种有效的，高选择性EZH2 methyltransferase抑制剂，IC50为9.9 nM，对 EZH2 的选择性比其他20种人甲基转移酶高1000多倍。

靶点

体外研究

在体外，EZH2野生型和突变型DLBCL细胞系中，GSK126最有效地抑制H3K27me3，其次是H3K27me2。GSK126也能有效抑制EZH2突变型DLBCL细胞系的增殖，并诱导敏感细胞系中EZH2靶基因的转录激活。在A687V EZH2突变细胞中，GSK126处理导致总体H3K27me3减少，强基因活化，胱天蛋白酶活化，以及增殖减少。在亲代H2087细胞中，GSK126抑制VEGF-A和磷酸化Ser(473)-AK的表达，因此引起对细胞增殖，迁移和代谢的抑制。

体内研究

在负荷KARPAS-422和Pfeiffer异种移植物的小鼠体内，GSK126 (150 mg/kg/d, i.p.)降低总体H3K27me3，增加基因表达，从而引起显著的肿瘤消退。

EPZ6438

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8987 mL

9.4936 mL

18.9872 mL

5 mM

0.3797 mL

1.8987 mL

3.7974 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

EZH2 试验:
制备包含野生型或突变型EZH2的5个组分的PRC2复合物(Flag–EZH2，EED，SUZ12，AEBP2，RbAp48)。GSK126在DMSO中溶解，以0.6 nM到300 nM的浓度测试，终DMSO浓度为2.5%。体外实验中，相对于更倾向H3K27me0作为底物的野生型EZH2，EZH2 Y641倾向于H3K27me2作为底物，而对H3K27me0 或H3K27me1的活性很低。A677G不同于EZH2的野生型和Y641突变型，它有效地使H3K27me0，H3K27me1，和H3K27me2甲基化；因此，组蛋白H3多肽(残基21–44；终浓度10 μM)与 K27me0 (野生型，A677G EZH2)，K27me1 (A677G EZH2)，或K27me2 (A677G，Y641N，Y641C，Y641H，Y641S 和 Y641F EZH2)用作甲基转移酶底物。GSK126加入到板中，然后加入6 nM EZH2复合物和多肽。GSK126的效能处于或接近[SAM] = Km下进行的试验的紧密结合界限，IC50值在竞争性底物SMA相对其Km(7.5 μM SAM，而 SAM Km为0.3 μM)较高浓度下测量。在这些条件下，酶浓度的作用相对非常小，可以计算出Ki的精确估计值。反应通过[3H]-SAM起始，培养30分钟，加入500倍过量未标记的SAM淬灭反应，甲基化产物肽在磷酸纤维素过滤器上根据供应商提供的MSPH 多屏幕平板进行捕获。表观Ki值使用竞争性抑制剂的Cheng–Prusoff关系计算。IC50=Ki (1+[S]/Km)+[E]/2，其中E是酶，S为底物。

细胞实验

• Cell lines: 46 淋巴瘤细胞系
• Concentrations: 0~10 μM
• Incubation Time: 6天
• Method:

所有细胞系的最优细胞接种根据经验确定，通过检测在384孔板式中宽范围的接种密度以确定可以增殖6天的试验条件。然后细胞以最佳接种密度接种24小时，再用20点两倍连续稀释的GSK126 或0.15% DMSO处理(一式两份)。板在37℃下在5% CO2中培养6天。然后将细胞用CellTiter-Glo (CTG)裂解，化学发光信号用TECAN Safire2酶标仪检测。此外，未处理板中的细胞在化合物加入(T0)时进行采集以定量初始细胞数。处理6天后得到的CTG值表示为T0值的百分比，并以化合物浓度为横坐标绘图。数据拟合为4参数方程以产生浓度反应曲线，并测定抑制50%生长(生长 IC50)的GSK126浓度。

动物实验

• Animal Models: 负荷 Pfeiffer 或 KARPAS-422 肿瘤的雌性米黄色 SCID 小鼠
• Formulation: 20% captisol
• Dosages: 150 mg/kg/day
• Administration: i.p.

GSK1292263是一种新型GPR119激动剂，用于治疗2型糖尿病。

靶点

GPR119

体外研究

GSK-1292263通过使用Hypo1从1538种化合物中被选出，与Hypo1中一致的GSK-1292263的拟合值和估计值分别为8.8和7.7 (nM)。

体内研究

在雄性Sprague-Dawley大鼠体内，GSK-1292263(3-30 mg/kg)以单剂量给药在营养素不存在时，与循环胃肠肽，包括胰高血糖素样多肽1(GLP-1)，肠抑胃肽(GIP)，多肽YY (PYY)和胰高血糖素的增加水平相关，在口服葡萄糖耐量测试(OGTT)中，葡萄糖给药会加强循环胃肠肽的增加。在大鼠静脉内葡萄糖耐量测试中，GSK-129226显著增加胰岛素反应的峰值，并且与载体对照组相比，增加30-60%的胰岛素AUC(0-15 min)，此处胰岛素的上调与葡萄糖清除率的显著增加相关。在Zucker糖尿病肥胖大鼠的6周研究中，与空白对照大鼠样本中胰岛素免疫反应性相比，GSK-1292263与胰腺切片中胰岛素免疫反应性在统计学上的显著增加相关。Sprague-Dawley大鼠体内，高胰岛素-正常血糖钳夹实验中，胰岛素注射2小时前，GSK-1292263以10 或30 mg/kg的剂量给药或与载体对照相比，刺激胰高血糖素分泌，而不增加血糖水平。

APD-597

MB2420

APD668

MB2419

AS1269574

MB2413

MBX-2982

MB2415

PSN375963

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1903 mL

10.9515 mL

21.9029 mL

5 mM

0.4381 mL

2.1903 mL

4.3806 mL

10 mM

0.2190 mL

1.0951 mL

2.1903 mL

50 mM

0.0438 mL

0.2190 mL

0.4381 mL

GSK1838705A 是有效的IGF-1R抑制剂，IC50为2.0 nM, 适度有效作用于IR和ALK，IC50分别为1.6 nM 和 0.5 nM,对其他蛋白激酶几乎没有作用活性。

靶点

IGF-1R (Cell-free assay)

IR (Cell-free assay)

ALK (Cell-free assay)

IC50

2 nM

1.6 nM

0.5 nM

体外研究

GSK1838705A有效且ATP竞争性抑制IGF-1R和IR，appKi值分别为0.7 nM和1.1 nM。在细胞中，GSK1838705A有效抑制配体诱导的IGF-1R和IR磷酸化，IC50 分别为85 nM 和79 nM。GSK1838705A对一系列衍生自固体和血液肿瘤的细胞系，比如L-82，SUP-M2，SK-ES 和MCF-7细胞表现出显著的抗增殖作用，EC50 分别为24 nM，28 nM，141 nM 和203 nM。GSK1838705A使MCF-7 和NCl-H929细胞主要积累在细胞周期的G1 (2N)期。GSK1838705A也会抑制ALK，Ki为0.35 nM，抑制核仁磷酸蛋白(NPM)-ALK融合细胞的增殖，EC50为24-88 nM。GSK1838705A有效抑制Karpas-299 和SR-786细胞中NPM-ALK磷酸化，而对STAT3磷酸化仅有适度的作用。

体内研究

I在负荷NIH-3T3/LISN肿瘤的小鼠体内，GSK1838705A (60 mg/kg)口服治疗抑制77%肿瘤生长，而没有显著的体重损失。在负荷COLO 205肿瘤的小鼠体内，GSK1838705A (30 mg/kg)能够抑制80%的肿瘤生长。此外，GSK1838705A的抗肿瘤作用在负荷HT29异种移植物或BxPC3异种移植物的小鼠体内也能观察到。在小鼠体内，GSK1838705A (60 mg/kg)通过抑制IR信号，引起血糖水平短暂增加2倍。GSK1838705A (60 mg/kg)抑制已建立的Karpas-299异种移植物的生长，抑制率为93%，而对大鼠的体重没有影响。

特征

一种 IGF-1R 和胰岛素受体的小分子抑制剂。

NVP-AEW541

MB3955

OSI-906 (Linsitinib)

MB3909

PQ401

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8777 mL

9.3884 mL

18.7769 mL

5 mM

0.3755 mL

1.8777 mL

3.7554 mL

10 mM

0.1878 mL

0.9388 mL

1.8777 mL

50 mM

0.0376 mL

0.1878 mL

0.3755 mL

激酶试验:
IGF-1R (氨基酸957-1367)和IR (氨基酸979-1382)的胞内域，通过杆状病毒表达的谷胱甘肽S-转移酶标记的蛋白质编码，用于均相时间分辨荧光试验测定IC50s。过滤结合试验用于appKi测定，使用活化的IGF-1R和IR激酶进行。扩展的GSK1838705A的激酶选择性试验通过筛选KinaseProfiler组中的化合物进行。

细胞实验：

• Cell lines: L-82，SUP-M2，SK-ES 和 MCF-7
• Concentrations: 0 到 10 μM
• Incubation Time: 72小时
• Method: 将细胞接种在96孔板，在37 °C下培养过夜，用DMSO 或GSK1838705A处理72小时。对于NIH-3T3/LISN增殖试验，将细胞接种在胶原包被的96孔组织培养板，使其附着24小时。培养基用无血清培养基替换，细胞用GSK1838705A处理2小时。加入IGF-I (30 ng/mL)后，细胞培养72小时。细胞增殖使用CellTiter-Glo发光细胞活力检测定量。IC50s使用四参数曲线拟合软件包(XLfit4)根据细胞毒性曲线确定。

动物实验：

• Animal Models: L-82，SUP-M2，SK-ES 和 MCF-7 细胞皮下注射到 CD1 或 SCID 小鼠的右侧。
• Formulation: GSK1838705A溶于20% 磺丁基β-环糊精(ISP; pH 3.5)
• Dosages: ≤60 mg/kg
• Administration: 口服给药

产品描述

GSK1904529A 是选择性的IGF-1R和IR抑制剂，IC50分别为27 nM和25 nM,作用于IGF-1R/InsR比作用于Akt1/2/, Aurora A/B,B-Raf, CDK2, EGFR等选择性高100倍以上。

靶点

IGF-IR

IR

IC50

27 nM

25 nM

体外研究

GSK1904529A 是选择性抑制剂，作用于IGF-IR和IR时IC50分别为27和25 nM。GSK1904529A是可逆的ATP竞争性抑制剂。GSK1904529A 作用于IGF-IR和IR时Ki值分别为1.3和1.6 nM。GSK1904529A浓度大于0.01 μM时有效抑制IGF-IR和IR磷酸化作用，随后阻断下游信号。细胞增殖实验显示GSK1904529A有效抑制NIH-3T3/LISN, TC-71, SK-N-MC, SK-ES，和RD-ES细胞，IC50分别为60, 35, 43, 61，和62 nM。GSK1904529A也抑制其他多发性骨髓瘤和尤文氏肉瘤细胞系，包括NCI-H929, MOLP-8, LP-1，及KMS-12-BM等等。

体内研究

携带NIH-3T3/LISN肿瘤的鼠，按体重，每千克口服处理30mg GSK1904529A，每天2次，结果显示肿瘤抑制率达98%；而GSK1904529A作用于携带COLO 205移植瘤的鼠，每天处理1次，结果显示肿瘤抑制率达75%。GSK1904529A 可用于治疗多种IGF-IR依赖性肿瘤，包括前列腺癌，结肠癌，乳腺癌，胰脏癌，卵巢癌,和肉瘤。

溶解性

DMSO 124 mg/mL，水 <1 mg/mL，乙醇 <1 mg/mL

稳定性

2年 -20°C粉状，6月-80°C溶于DMSO

特征

GSK2126458 是高选择性的，有效p110α/β/γ/δ, mTORC1/2抑制剂，Ki分别为0.019 nM/0.13 nM/0.024 nM/0.06 nM 和 0.18 nM/0.3 nM。Phase 1。

靶点

p110α
(Cell-free assay)

p110δ 
(Cell-free assay)

p110γ 
(Cell-free assay)

p110β
(Cell-free assay)

mTORC1 
(Cell-free assay)

IC50

0.019 nM(Ki)

0.024 nM(Ki)

0.06 nM(Ki)

0.13 nM(Ki)

0.18 nM(Ki)

体外研究

GSK2126458有效抑制人类癌细胞中发现的p110α(E542K, E545K, 和H1047R)常见激活突变型，Ki 分别为 8 pM, 8 pM 和 9 pM。GSK2126458作用于T47D和BT474 细胞，显著降低pAKT-S473水平，IC50分别为 0.41 nM 和0.18 nM。 而且, GSK2126458作用于多种细胞系，包括T47D 和 BT474乳腺癌细胞系，导致细胞周期停在G1期，且抑制细胞增殖，IC50分别为3 nM 和2.4 nM。

体内研究

GSK2126458作用于BT474人类移植瘤模型，降低pAKT-S473水平，这种作用存在剂量依赖性，按300 μg /kg低剂量处理抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性。此外, GSK2126458 作用于四种临床前期物种(小鼠, 大鼠,犬 ,和猴 )，具有低血液清除力和良好口服生物有效性。

PI-103

MB3867

PIK-75

MB3888

BGT226 (NVP-BGT226)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9782 mL

9.8912 mL

19.7824 mL

5 mM

0.3956 mL

1.9782 mL

3.9565 mL

10 mM

0.1978 mL

0.9891 mL

1.9782 mL

50 mM

0.0396 mL

0.1978 mL

0.3956 mL

体外均相时间分辨荧光技术（HTRF）测定 PI3K 抑制:
在384孔聚丙烯母板上，化合物 (3倍溶于100% DMSO) 从1列到12列，和13列到24列连续稀释，获得11种浓度 GSK2126458。6列和18列只含DMSO。滴定后，0.05μL 立即转移到384孔低容量实验板上。 实验板中含3种药物对照(PI3K 抑制剂)和3组实验对照: (1) 不含抑制剂的酶实验;(2) 去酶buffer, 和 (3)去酶加 PIP3的buffer。DMSO加到6列和18列的所有孔中。40 μM PIP3加到 1X 反应 buffer (1μL 200 μM PIP3)中， 交替 18列的行数 ( B, D, F, H, J, L, N, P)。不含酶的对照实验在 A, C, E, G, I, K, M, O孔中 (0.1μL 100% DMSO)中进行。使用 HTRF试剂盒优化PI3K 实验 。实验试剂盒中含7种试剂: 1) 4X 反应Buffer; 2) PIP2 (底物); 3) Stop A (EDTA); 4) Stop B (生物素-PIP3); 5) 检测混合物A (链霉亲和素-APC); 6)检测混合物 B (Eu-标记的抗-GST抗体和 GST标记的 PH域); 7) 检测混合物 C (KF)。通过使用去离子水按1:4稀释而制备PI3K反应 Buffer。加入新鲜制备的 DTT，终浓度为5 mM。加入酶，使用Multidrop Combi 在1X反应 buffer中加入2.5μL PI3K，加到每孔中 ，开始预温育化合物。实验板在室温下温育15分钟。 使用Multidrop Combi，加入 2.5μL 2X底物溶液(PIP2和 ATP，溶于 1X 反应buffer)开始反应。实验板在室温下温育1小时。 使用Multidrop Combi在所有孔中加入2.5μL 终止液 (Stop A和 Stop B按5:1比例预混合)，反应淬灭。使用Mulitdrop Combi(检测混合物 C, 检测混合物 A,和检测混合物 B 按18:1:1比率混合，即: 6000 μL 总体积, 混合 5400 μL 检测混合物 C, 300μL 检测混合物 A, 和 300 μL 检测混合物 B)在所有孔中加入2.5μL 检测液，进行淬火反应，检测形成的产品。备注:这种溶液在使用前2小时制备。在暗中温育1小时后，在Envision 酶标仪上测量HTRF信号，在330nm 处测定激发光，在620nm (Eu) 和665nm (APC)处双重发射光。

细胞实验：

• Cell lines: BT474, HCC1954 和 T-47D
• Concentrations: 0 到 1 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: BT474, HCC1954 和 T-47D(人类乳腺)培养在含10%胎牛血清的 RPMI-1640 培养基中，培养在37oC下含 5% CO2的 孵育器中。在实验前2到3天，细胞按密度分到T75 烧瓶中，这样在实验收集时获得约70-80% 细胞汇合。使用0.25% 胰蛋白酶-EDTA收集细胞。在细胞悬液中使用台酚蓝染色排除染色，进行细胞计数。细胞按每孔1000个细胞接种在384孔黑色平底聚苯乙烯板中， 每孔含48 μL 培养基。所有实验板置于5% CO2, 37oC 下过夜，第二天加入 GSK2126458。使用CellTiter-Glo处理一个实验板，用于第一天测量。GSK2126458 在清澈见底的聚丙烯384孔板中制备，连续稀释两倍。4 μL 这些稀释液加到105 μL 培养基中混合溶液后, 细胞板的每孔中加入2 μL这些稀释液。所有孔中的 DMSO 终浓度为0.15%。细胞在37oC, 5% CO2 环境中温育 72小时。随后与 GSK2126458温育72小时。CellTiter-Glo试剂加到实验板中，使用与孔中细胞培养体积相当量的体积。震荡实验板约2分钟，在室温下温育约30分钟，然后在Analyst GT 读数器上读取化学分光信号。

动物实验：

• Animal Models: 在小鼠体内移植BT474肿瘤
• Formulation: GSK2126458 溶于DMSO，然后在水中稀释
• Dosages: ≤300 μg /kg
• Administration: 口服处理

GSK2193874是一种具有口服活性的、有效的、选择性transient receptor potential vanilloid 4 (TRPV4)阻滞剂，对hTRPV4和rTRPV4的IC50分别为0.04和0.002 μM。

靶点

体外研究

GSK2193874拮抗TRP通道，对靶点的抑制作用相对对TRPV1、TRPA1、TRPC3、TRPC6和TRPM8的作用来说更具有选择性。用GSK2193874处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)可浓度依赖性地阻止细胞收缩以及抑制由GSK1016790激活TRPV4所导致的细胞脱离。

体内研究

在大鼠和犬类中检测GSK2193874的药代动力学，发现在慢性动物模型中，GSK2193874具有适于口服途径的半衰期和其他特性。（在大鼠中：iv CL = 7.3 mL/min/kg, po t1/2 = 10 h, %F =31；在狗中：iv CL = 6.9 mL/min/kg, po t1/2 = 31 h, %F = 53）。除此之外，在大鼠中，当GSK2193874浓度高达30 mg/kg时，对血压或心率没有作用。在一些心衰模型中，GSK2193874能够改善肺功能。在急性和慢性心衰模型中，GSK2193874的预处理可抑制肺水肿的形成并增强动脉氧合。GSK2193874能够维持内皮细胞的完整性、抑制内皮TRPV4电流，在离体肺和心衰模型中保护肺部免于肺水肿形成。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.4459 mL

7.2294 mL

14.4588 mL

5 mM

0.2892 mL

1.4459 mL

2.8918 mL

10 mM

0.1446 mL

0.7229 mL

1.4459 mL

50 mM

0.0289 mL

0.1446 mL

0.2892 mL

• Cell lines: 稳定转染hTRPV4的HEK细胞(CG27)HUVECs
• Concentrations: 1-30 nM(extracellularly); 0.03-10 uM(intracellularly)
• Incubation Time: —
• Method:

在细胞外，将GSK2193874(1-30 nM)加入培养基中进行处理；在细胞内，通过将GSK2193874(0.03-10 μM)加入电极液中进行处理。在-60和+60 mV之间引出斜坡电流，在GSK634775 (100 nM)激活TRPV4后，检测+60 mV处峰值输出电流。在HUVECs中，在-80和+80 mV之间引出斜坡电流，在GSK2193874 (300 nM)处理后，加入GSK1016790 (30 nM)激活TRPV4，检测+60 mV处峰值输出电流。

动物实验

• Animal Models: 成年雄性SD大鼠
• Formulation: 6% Cavitron
• Dosages: 30 mg/kg
• Administration: 口服填喂

TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

White powder

Identification

HNMR

Purity (HPLC)

≥98%

Nemiralisib，又名GSK-2269557，是有效的、选择性的PI3Kδ抑制剂（pKi=9.9）。

靶点

体内研究

GSK-2269557具有比较低的口服生物利用度（F=2%），在体内的清除率是28 mL/min/kg，但高容积分布，为6.3 L/kg. 0.3-1 μMGSK-2269557诱导浓度依赖性的QT间期和Tp-e延长，1μM GSK-2269557导致ORS波的延长，期间没有观察到尖端扭转心律失常。在brown Norway大鼠的急性OVA疾病模型中，Th2驱动肺部炎症，GSK-2269557能够保护肺部免受嗜酸性粒细胞招募（ED50=67 μg/kg），并浓度依赖性地减少所有白细胞亚种群的招募以及IL-13。

IC-87114

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2699 mL

11.3497 mL

22.6994 mL

5 mM

0.4540 mL

2.2699 mL

4.5399 mL

10 mM

0.2270 mL

1.1350 mL

2.2699 mL

50 mM

0.0454 mL

0.2270 mL

0.4540 mL

Animal Models: Sprague Dawley雄性大鼠
Formulation: DMSO/PEG200/水 (5:45:50 v/v/v)
Dosages: oral:3 mg/kg; IV:1 mg/kg
Administration: 口服/静脉注射

GSK2292767是一种有效的、选择性的PI3Kδ抑制剂。

靶点

体内研究

GSK2292767对PI3Kδ具有高度选择性，在棕色挪威大鼠Th2驱动的肺部炎症OVA模型的相关疾病中具有活性。

BGT226 (NVP-BGT226)

MB5532

BYL719

MB4351

PI-3065

MB5286

PIK-293

MB3879

AS-605240

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9509 mL

9.7546 mL

19.5091 mL

5 mM

0.3902 mL

1.9509 mL

3.9018 mL

10 mM

0.1951 mL

0.9755 mL

1.9509 mL

50 mM

0.0390 mL

0.1951 mL

0.3902 mL