GSK256066是一种选择性的PDE4B(与A-D亚型具有相等的亲和力)抑制剂，IC50为3.2 pM，比作用于PDE1/2/3/5/6选择性高380，000倍以上，作用于PDE4B比作用于PDE7选择性高2500倍以上。Phase 2。

靶点

PDE4B 3.2 pM

体外研究

GSK256066 是缓慢但紧密结合的PDE4B抑制剂，IC50为3.2 pM。GSK256066作用于PBMCs，强有效抑制LPS刺激的TNFα产生，pIC50 为11.0，IC50 为10 pM，GSK256066作用于人全血培养物，pIC50为9.90，IC50为 126 pM。GSK256066高选择性抑制 PDE4(是抑制PDE1,PDE2, PDE3, PDE5, 和PDE6的3.8×105多倍，是抑制PDE7的2.5×103多倍)。GSK256066 同等亲和力抑制PDE4亚型A-D。

体内研究

GSK256066按溶于水悬浮液中给药，抑制LPS诱导的肺中性粒细胞，ED50 为 1.1 μg/kg,按30 μg/kg剂量，则最大抑制72%。GSK256066按干粉制剂给药，抑制LPS诱导的肺中性粒细胞，ED50为2.9 μg/kg,则最大抑制62%。GSK256066 作用于雄性 CD 大鼠，具有温和的血浆清除率，为39 ml/min/kg,适度的分布体积，为0.8 L/kg,及相对短的半衰期，为1.1 小时。GSK256066按按溶于水悬浮液中按30 μg/kg剂量气管内给药处理大鼠，则维持高的肺浓度，为2.6 μg/g。GSK256066按10 μg/kg剂量在不同时间(2, 6, 12, 18, 24, 和 36 h)气管内给药处理，然后再用LPS处理，则抑制脂多糖(LPS)诱导的急性肺炎大鼠模型中LPS诱导的肺部嗜中性。GSK256066按0.3-100 μg/kg剂量处理大鼠，抑制LPS诱导的呼出NO的增高，ED50为35 μg/kg。GSK256066按10 μg/kg 剂量处理大鼠半小时，再使用OVA处理, 则抑制OVA诱导的肺部嗜酸性粒细胞增多，ED50为0.4 μg/kg。

诺普利兰;咯利普兰

MB5676

Apremilast (CC-10004)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9283 mL

9.6417 mL

19.2834 mL

5 mM

0.3857 mL

1.9283 mL

3.8567 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

SPA检测和荧光偏振检测:
在SPA检测中，溶于含8.3 mM MgCl2, 1.7 mM EGTA, 和 0.05% (w/v) BSA的50 mM Tris-HCl, pH 7.5中的75 μl PDE 酶与2 μl GSK256066 溶液或DMSO 预温育30分钟。PDE1 检测中，实验buffer 含4 μg/ml 钙调蛋白和1 mM CaCl2，不含任何EGTA。加入25 μl[3H]cAMP (PDE3, PDE4, 和PDE7终浓度为10 nM) 或[3H]cGMP(PDE1,PDE2, PDE5, 和 PDE6终浓度为36 nM)开始实验。温育1小时后，加入50 μl SPA 磁珠的水悬浮液(每孔约为1 mg )终止反应，再温育至少10分钟后，同事液体闪烁计数法测定结合的放射性。荧光偏振检测中，溶于含10 mM MgCl2, 0.1% (w/v) BSA,和 0.05% (w/v) NaN3的10 mM Tris-HCl buffer，pH 7.2中的10 μl PDE酶与0.5 μl GSK25606溶液或DMSO 预温育 30分钟。加入10 μl荧光-cAMP(终浓度为40 nM) 开始检测，40分钟后，通过加入60 μl IMAP 结合试剂终止反应。使用分析仪或 Aquest酶标仪测量平行光与垂直光的比率。

细胞实验 

Cell lines: 原代人外周血单核细胞和全血细胞

• Concentrations: 10 μM
• Incubation Time: 1 小时
• Method: 肝素化血液(100 μl) 与0.5 或 1.0 μl GSK256066 或DMSO（终浓度为0.4或0.8% )在37oC下含5% CO2环境下温育1小时。然后使用1 ng/ml LPS刺激样本，1 ng/ml LPS溶于含10%胎牛血清，1% l-谷氨酸, 和1% 青霉素/链霉素 的RPMI 1640 培养基。加入50 或 100 μl 生理盐水(0.138% NaCl)，在37oC下含5% CO2的环境下温育20小时，1.3×103g下离心10分钟后收集稀释血浆，使用电化学发光检测法测定TNF-α。50μl 全细胞或 PBMC 实验的上清液与50 μl 链霉亲和素/生物素化的抗-TNF-α 抗体混合物, 25 μl 钌标记的抗-TNF-α单克隆抗体，和含 0.1% BSA 的 100 μl PBS温育2小时。在IGEN仪器上读取电化学，从每个实验板的人类重组TNF-α的标准曲线计算 TNF-α浓度。

动物实验

• Animal Models: 雄性CD大鼠
• Formulation: 无菌0.9% NaCl溶液
• Dosages: 0.1-100 μg/kg
• Administration: 气管滴注作为水溶性悬浮液，或使用干粉处理2小时。

451.44

化学式

C24H20F3N5O

CAS号

1337531-36-8

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

90 mg/mL (199.36 mM)

Ethanol

Ethanol 21 mg/mL (46.52 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

GSK2606414 是一种口服具有生物活性的，有效的，选择性PERK抑制剂，IC50 为 0.4 nM，比测试的其他EIF2AKs选择性至少高100倍。

特性

The first PERK-selective inhibitor with good oral bioavailability and crosses the blood-brain barrier.

靶点

体外研究

GSK2606414抑制A459细胞中的PERK 自磷酸化，IC50<0.3 μM。

产品描述

GSK2636771是口服生物有效的PI3Kβ选择性抑制剂，对PTEN 缺失细胞系敏感。

靶点

IC50

体外研究

体内研究

溶解性

可溶于DMSO

稳定性

2年 -20°C粉状，6月-80°C溶于DMSO

特征

416.45

化学式

C23H21FN6O

CAS号

1337532-29-2

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

32 mg/mL (76.83 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

Ethanol

<1 mg/mL 难溶或者不溶

GSK2656157是一种ATP竞争性的高选择性PERK抑制剂，无细胞试验中IC50为0.9 nM, 比作用于一组300种激酶选择性高500多倍。

特性

口服生物有效的PERK选择性抑制剂，其功能不依赖于eIF2α磷酸化。

靶点

体外研究

使用GSK2656157预处理细胞，抑制PERK活化，且减少下游底物，phospho-eIF2a, ATF4, 和 CHOP，IC50为10-30 nM。使用 1 mM GSK2656157 处理细胞，然后进行UPR诱导，可抑制de novo蛋白合成。GSK2656157下调84分之5的UPR相关基因（DDIT3，HERPUD1，PPP1R15A，C/EBP-β和ERN1），下调幅度超过4倍。在没有外源UPR诱导剂存在时，GSK2656157对任何这些细胞的生长无显著作用效果，IC50为6-25 mM。因此，GSK2656157可用来测评PERK在各种生物学背景下的生物学功能。

607.06

化学式

C29H30N8O5.HCl

CAS号

850664-21-0(free base)

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

别名

GSK 269962, GSK-269962, GSK269962A, GSK 269962A, GSK-269962A, GSK269962B

100 mg/mL (164.72 mM)

Ethanol

6 mg/mL (9.88 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

GSK269962是选择性的ROCK(Rho-associated protein kinase)抑制剂，对ROCK1和ROCK2的IC50分别为1.6 nM和4 nM。

靶点

体外研究

GSK269962A在人类平滑肌中，完全阻断血管紧张肽Ⅱ诱导的肌动蛋白张力丝的形成。这一抑制现象始于约1 μM GSK269962A。GSK269962A在预束紧的大鼠动脉（组织浴/组织培养）中诱导血管舒张，IC50为35 nM。GSK269962A所诱导的舒张是可逆的。GSK269962A在巨噬细胞中抑制IL-6 mRNA的转录、减少LPS诱导的IL-6和TNF-α蛋白的产生。

体内研究

自发性高血压大鼠口服GSK269962A将降低体循环血压，血压的减少非常迅速并显著。在口服给药后约2小时，其降血压作用达到峰值。血压的减少伴随着急性、剂量依赖性的心率增加，这可能是压力反射机制的激活。用10 mg/kg的GSK 269962抑制ROCK在大鼠内能依次地引起排尿量、排尿后残余尿、容量阈值、泌尿效率、ICI(intercontraction interval)、膀胱顺应性、VTNVC的升高，而对心率、收缩压、平均血压、舒张压没有影响。

GSK2879552是一种有效的、选择性的、具有生物口服活性的、不可逆的LSD1的抑制剂，Kiapp=1.7 μM。

靶点

体外研究

在被检测的165个细胞系中，GSK2879552抑制了9/28的小细胞癌肿瘤细胞的生长，以及20/29的AML细胞系的生长，其抑制效率在40%到100%之间。被GSK2879552抑制的SCLC细胞系都表现出了DNA高甲基化探针的特性。

体内研究

在含有SCLC肿瘤的小鼠中，GSK2879552 (1.5 mg/kg, p.o.)表现出了17%-83%的肿瘤生长抑制效应。

ORY-1001 (LSD1-IN-1抑制剂)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2862 mL

11.4312 mL

22.8624 mL

5 mM

0.4572 mL

2.2862 mL

4.5725 mL

10 mM

0.2286 mL

1.1431 mL

2.2862 mL

50 mM

0.0457 mL

0.2286 mL

0.4572 mL

LSD1酶学测试:
LSD1的活性用辣根过氧化物酶偶联试验进行测定。产物的形成量用Ex 531 nm和Em 595 nm下荧光强度进行测量。反应条件包括：5 nM LSD1，2.5 μM H3K4me2多肽，50 mM HEPES pH 7, 1 U/ml HRP，1 mM CHAPS，0.03% dBSA以及10 μM的amplex red。

细胞实验：

• Cell lines: 165种人源肿瘤细胞系
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 6 d
• Method: 所有细胞系最优的接种方法是接种到384孔板中来测定6天的增殖情况。细胞培养24小时达到最优的接种密度，然后用不同浓度的GSK2879552或者0.15% DMSO进行处理。培养皿在37°C，5% CO2条件下培养6天。然后用CellTiter-Glo将细胞裂解，其化学发光信号用TECAN Safire2酶标仪进行测量。同时，未经处理的细胞在刚加入化合物时收获作为细胞起始数目的标准。六天后CTG值可以得到。利用四维方程得到的数据来计算相应的IC50值。

动物实验：

• Animal Models: 携带有SCLC肿瘤的小鼠
• Dosages: 1.5 mg/kg
• Administration: 1.5 mg/kg

GSK2982772是receptor-interacting protein-1 (RIP1) kinase (RIPK1)的ATP竞争性抑制剂，IC50为16 nM。它能够抑制多种TNF依赖性的细胞反应，具有良好的激酶特异性和细胞活性。

靶点

human RIP1 (Cell-free assay)：16 nM

体外

GSK2982772在RIP1细胞系统中具有良好的活性作用，阻止TNF诱导的坏死性细胞死亡；在溃疡性结肠炎外植体中，能够阻止自发的细胞因子释放。

体内

GSK2982772对人源和猴源RIP1具有近乎相等的RIP1 FP（fluorescence polarization）效力，但对非灵长类的RIP1的效力显著降低，说明其对灵长类RIP1具有选择性。GSK2982772具有良好的血液游离分数，在大鼠中为4.2%、在犬类中为11%、在食蟹猴中为11%、在人类中为7.4%。在大鼠和猴子中，该抑制剂具有良好的药代动力学特征。在多种组织中广泛分布，包括结肠、肝脏、肾脏和心脏，阻止浓度与血药浓度相似。然而，尽管GSK2982772具有良好的细胞透性，其在大鼠中的大脑渗透率低（4%），这可能与GSK2982772通过流出的药物转运体从大脑中主动挤压出来有关。GSK2982772具有较高的口服生物利用度，中低水平的清除率、中等分布体积，终末半衰期约为12小时。

动物实验：

• Animal Models: TNF/zVAD小鼠模型
• Formulation: 生理盐水
• Dosages: 3, 10, 50 mg/kg
• Administration: 口服

番茄苷

MB5067

Necrostatin1

MB5489

GSK547

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6497 mL

13.2485 mL

26.4971 mL

5 mM

0.5299 mL

2.6497 mL

5.2994 mL

10 mM

0.2650 mL

1.3249 mL

2.6497 mL

50 mM

0.0530 mL

0.2650 mL

0.5299 mL

描述

GSK3179106是有效的、选择性的RET kinase抑制剂，IC50为0.3 nM。

IC50 & Target

体外

GSK3179106的基因毒性较小，不具有嵌入式遗传毒性，并具有良好的激酶选择性：在含有大于300种重组激酶库中，1 μM GSK3179106仅对其中26种激酶具有抑制作用。

体内

对雄性Sprague-Dawley大鼠给予单次GSK3179106静脉注射，注射剂量为0.06 mg/kg，以此进行药代动力学研究：GSK3179106在体内暴露量低，AUC为102 ng·h/mL。而在体内结肠过敏模型中，在3.5天内给药7次（口服），口服剂量为10 mg/kg：结果显示GSK3179106在肠道内容物、十二指肠、回肠中具有高浓度分布，浓度比血浆浓度高。

动物实验

• Animal Models: 雄性Sprague-Dawley大鼠
• Formulation: DMSO/6% HP-beta-CD = 5:95 (pH=7)
• Dosages: 0.06 mg/kg
• Administration: IV
  (Only for Reference)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1394 mL

10.6972 mL

21.3945 mL

5 mM

0.4279 mL

2.1394 mL

4.2789 mL

10 mM

0.2139 mL

1.0697 mL

2.1394 mL

50 mM

0.0428 mL

0.2139 mL

0.4279 mL

541.69

化学式

C31H39N7O2

CAS号

1346704-33-3

稳定性

3 years -20°C powder

10 mg/mL warmed (18.46 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.38 mM)

DMSO

1 mg/mL warmed (1.84 mM)

GSK343是一种有效的，选择性EZH2抑制剂，无细胞试验中IC50为4 nM，比作用于EZH1选择性高60倍，比作用于其他组蛋白甲基转移酶选择性高1000倍以上。

特性

一种SGC表观遗传学整合的化学探针。在多种实体瘤中具有潜在用途。

靶点

体外研究

GSK343抑制H3K27 (H3K27me3)三甲基化，在HCC1806肺癌细胞中，IC50为174 nM。GSK343有效抑制乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的细胞增殖，前列腺癌细胞系LNCaP对GSK343最敏感，IC50为 2.9 μM。GSK343显著抑制EOC细胞的生长，EOC细胞在模拟肿瘤体内微环境的3D人工基底膜细胞外基质(ECM)中进行培养。此外，GSK343也会诱导EOC细胞在3D中的凋亡，并显著抑制EOC细胞的侵染

体外抗组蛋白甲基转移酶生物试验:
使用含5种成分的PRC2复合物(Flag-EZH2，EED，SUZ12，AEBP2，RbAp48)测定抗EZH2的活性。试验方案概括如下：10 mM储存的化合物在100%DMSO由固体制备。11点连续稀释的样板在384孔板(1:3 稀释，柱6和18是等体积的DMSO对照)中制备，使用声分配技术分装到测定备用板以制备一个100 nL的化合物样本和DMSO对照。实验条件由等体积的10 nM EZH2添加物和基底溶液(5 微克µg/毫升HeLa 核小体和0.25 µM [3H]-SAM)组成，使用多点结合分配到试验板中。反应板培育1小时，用包含0.1 mM未标记SAM的0.5毫克/毫升PS-PEI成像珠(RPNQ0098)等体积添加物淬灭。将平板密封，暗适应30分钟，5分钟端点发光图像通过Viewlux成像仪获得。板统计数据，如Z’和背景信号，以及剂量响应曲线通过活性BaseXE进行分析。EZH1的体外生物活性，以作为5个成员PRC2复合物的一部分通过384孔SPA试验进行评估，与EZH2相同。EZH1 和 EZH2的缓冲液成分，试剂配方，复板制备，淬灭条件和数据分析是相同的，终测试浓度为20 nM EZH1，5 μM/mL HeLa 核小体和0.25 μM [3H]-SAM。进一步的数据分析，pIC50的枢轴和可视化由TIBCO Spotfire激活。化合物分布在Reaction Biology Corp. (Malvern, PA)上，以评估他们在组蛋白甲基转移酶试验中的抑制作用。甲基转移酶的活性通过HotSpot技术，微型放射性同位素系滤膜结合测定法进行评估。将抑制剂溶解在二甲基亚砜(DMSO)，测试浓度达到100 uM，最终DMSO浓度为2%。缓冲液包含所给浓度的甲基转移酶，和附表中的优选基底，在化合物存在下预培养10分钟。加入1 uM S-腺苷-L-[甲基-3H]甲硫氨酸(SAM)启动反应，在30℃下培育60分钟，随后转移到P81滤纸，并在检测前用PBS清洗。

细胞实验：

• Cell lines: 乳腺癌细胞系(HCC1806, Sk-Br-3, ZR-75-1)，前列腺癌细胞系(DU145, PC3, LNCaP)
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 6天
• Method: 为计算癌细胞系不同的倍增率，最佳的细胞接种通过检测所有细胞系在384孔板以一系列接种密度培养6天经验性确定。随后，细胞以最佳接种密度接种，并使其附着过夜。细胞以一式两份用20点2倍稀释系列的化合物或0.147% DMSO (载体对照)处理，并在37℃于5% CO2中培育6天。然后将细胞用每孔25微升CellTiter-Glo裂解细胞，化学发光用TECAN Safire2酶标仪测定。此外，未处理板中的细胞在加入化合物(T0)定量起始细胞数时采集。处理6天后的CTG值表示成T0值的百分数，标绘成化合物浓度的函数。数据用四参数方程拟合以产生浓度反应曲线，并获得抑制50%生长所需的化合物浓度(gIC50)。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8461 mL

9.2304 mL

18.4607 mL

5 mM

0.3692 mL

1.8461 mL

3.6921 mL

10 mM

0.1846 mL

0.9230 mL

1.8461 mL