Cyclophosphamide Monohydrate是一种氮芥类烷化剂，使烷基连接到DNA的鸟嘌呤碱基。与DNA交联，造成DNA链断裂，引起突变。具有细胞毒性作用。

体外研究

Cyclophosphamide (CY)是一种化学治疗剂，对免疫系统具有剂量依赖性双重作用。Cyclophosphamide治疗增强细胞凋亡，并降低调控T细胞的稳态增殖。Cyclophosphamide下调GITR和FoxP3的表达，其涉及T(REGs)的抑制活性。Cyclophosphamide增加原代人肝细胞培养物中CYP3A4，CYP2C8，和 CYP2C9蛋白水平，从而提高培养的肝细胞中它们自身的4-羟基化比率。代谢活化存在下，Cyclophosphamide使Salmonella tryphimurium的碱基对取代菌株产生突变，但是在 E. coli显色测试中显示为阴性。代谢活化存在下，Cyclophosphamide能够使各种人工培养的细胞中产生基因突变，染色体畸变，微核和姐妹染色单体互换，并且代谢活化不存在时，会产生姐妹染色单体互换。

体内研究

Cyclophosphamide会使大鼠，小鼠和中国仓鼠体内产生染色体损伤和微核，并且在小鼠斑点试验和Muta小鼠转基因lacZ构建体中产生基因突变。Cyclophosphamide，以确定的顺序加入到GM-CSF-分泌的，neu-表达的全细胞疫苗中，能够增强疫苗的潜在作用以延缓neu转基因小鼠体内的肿瘤生长。Cyclophosphamide通过增强疫苗的功效，而不是通过对癌细胞的直接细胞溶解作用发挥它的作用

TESTS

SPECIFICATIONS

Appearance

white crystalline powder

Solubility

20mg/ml water ,clear

M.P

48. 5〜52 ℃

pH

3.9~7.1  

Water（K.F）

6.0%～7.0%

Purity (HPLC)

>98%

Cyclosporin A是一种免疫抑制剂，与亲环素结合，随后抑制calcineurin，无细胞试验中IC50为7 nM，广泛用于预防器官移植反应中的排斥反应。

靶点

体外研究

在T细胞中，Cyclosporin A与亲环蛋白(免疫亲和素)结合，形成亲环蛋白-Cyclosporin A复合体，其结合并抑制钙调磷酸酶。Cyclosporin A 抑制钙调磷酸酶，IC50 是7 nM，随后阻断NF-AT核转运。 Cyclosporin A通过抑制MTP(线粒体通透性转换孔)的开放而影响线粒体，IC50 是39 nM。

体内研究

Cyclosporin A是一种免疫抑制剂，小鼠，大鼠，和荷兰猪经非肠道给药或者口服给药都有效，临床上用于器官移植中预防免疫排斥。

磷酸酶试验:
纯化的牛脑钙调磷酸酶和钙调蛋白是购买的。含纯化酶的反应混合物包含100 nM 钙调磷酸酶，100 nM 钙调蛋白，以及5 μM 32P-标记磷酸化多肽，60 μl (总体积) 试验缓冲液包含20 mM Tris (pH 8)，100 mM NaCI，6 mM MgCl2，0.5 mM 二硫苏糖醇， 每毫升0.1毫克牛血清白蛋白，以及0.1 mM CaCl2或5 mM EGTA。含细胞裂解物的反应混合物包含20 μl of未稀释裂解物， 5 μM 32P-标记的磷酸肽，和40 μl 试验缓冲液。反应混合物包含50 μM 多肽412或413和/或 500 nM冈田酸，一种磷酸酶1和2A的特异性抑制剂; 500 nM 冈田酸足以抑制Ca2+-不依赖性磷酸酶，而更高浓度时也会部分抑制Ca2+-依赖性的活性。30°C下培育15分钟，加入0.5 ml包含5% 三氯乙酸的100 mM 磷酸钾缓冲液(pH 7.0)终止反应。Dowex阳离子交换色谱分离无机磷酸盐，用闪烁计数测定数量。

细胞实验：

• Cell lines: Jurkat细胞(无性繁殖J77)
• Concentrations: ~100 nM
• Incubation Time: 1小时
• Method: 免疫抑制剂以细胞治疗浓度的1000倍溶于乙醇。细胞(106)悬浮于微量离心管1ml完全培养基中；1 μl乙醇或者Cyclosporin A乙醇溶液加入反应液中，细胞在37°C下培育1小时。细胞在冰浴下用1ml PBS洗两次，在50μl低渗缓冲液中裂解，缓冲液每毫升包含50 mM Tris (pH 7.5); 0.1 mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5 mM二硫苏糖醇; 以及50 微克苯甲基磺酰氯，50 微克胰蛋白酶抑制剂，5微克亮抑酶肽，和5 微克抑肽酶。裂解液用液氮冷冻，再在30°C下融化，循环3次，随后在 4°C下以12,000×g离心10分钟。

动物实验：

Animal Models: 大鼠

• Formulation: 0.5% 黄芪胶溶液
• Dosages: 45毫克/千克
• Administration: 口服

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

0.8315 mL

4.1576 mL

8.3152 mL

5 mM

0.1663 mL

0.8315 mL

1.6630 mL

10 mM

0.0832 mL

0.4158 mL

0.8315 mL

50 mM

0.0166 mL

0.0832 mL

0.1663 mL

TESTS

SPECIFICATIONS

RESULTS

Appearance

White to off white powder

Conforms

Solubility

100mg/ml ethanol,clear

Conforms

Purity(HPLC)

≥98.5%

99.9%

Conclusion

Passed

MB1068

Cyclosporin A

MB1068-S

Cyclosporin A（标准品）

Lexibulin (CYT997)作用于癌细胞系，是一种有效的microtubule（微管）聚合抑制剂，IC50为10-100 nM。

特性

不同于多种其他微管蛋白靶向药剂(MTAs), CYT997可用于口服处理，且有效作用于MDR+细胞系。

靶点

Microtubules (cancer cell lines) 10 nM-100 nM

体外研究

CYT997(1 μM)处理A549细胞24小时，诱导微管快速重组，包括现有的微管网络遭破坏，及一些细胞质微管蛋白在菌斑处累积，导致细胞形态发生显著变化，包括粘附细胞丢失，细胞减少。CYT997作用于16种癌细胞具有毒性，IC50为作用于HepG2细胞的9 nM到作用于 KHOS/NP细胞的101 nM。CYT997有效作用于HCT15细胞, 具有多耐药机制Pgp(MDR+), IC50为52 nM。CYT997通过抑制微管聚合，使细胞周期停在G2-M分界处,且诱导磷酸化的Bcl-2增多，也提高cyclin B1表达, caspase-3激活，以及PARP的产生。CYT997处理1小时后，引起HUVEC 单层膜通透性快速且可逆的提高，IC50为~80 nM。与CYT997破坏细胞微管蛋白相一致,CYT997有效抑制增殖，诱导细胞周期停滞，且诱导人骨髓细胞系(HMCLs)和原代MM细胞凋亡。

ABT-751 (E7010)

MB1972

Combretastatin A4

MB1403

Cabazitaxel

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3013 mL

11.5067 mL

23.0134 mL

5 mM

0.4603 mL

2.3013 mL

4.6027 mL

10 mM

0.2301 mL

1.1507 mL

2.3013 mL

50 mM

0.0460 mL

0.2301 mL

0.4603 mL

微管蛋白聚合比浊法:
通过传统比浊法使用牛神经元微管蛋白测定CYT997作用于微管蛋白聚合的效果，在340 nm处通过测定吸光值的增高而监测微管装配。浓度不断增高的CYT997加到 100 μL 微管蛋白/GTP/甘油中。通过试管中牛微管蛋白在PEM buffer[80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA, 及5% 甘油]中37oC下温育，然后在恒温控制下使用分光光度计测定340 nm处的吸光值变化，而进行微管组装的比浊测定。

细胞实验

• Cell lines: DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, 和 K562
• Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为~1 μM
• Incubation Time: ~72小时
• Method: 使用不同浓度CYT997 处理细胞72小时。然后使用 Alamar blue或 MTT实验测定细胞增殖。MTT实验中, 每孔加入5 mg/mL MTT，实验板在37oC下温育6小时, 然后加入溶解buffer(10% SDS，溶于0.01 N HCl),使用BMG Technologies Lumistar 或Polarstar 酶标仪在620 nm处测定吸光值。Alamar blue 实验中, 每孔加入Alamar blue(10 μL/每孔)，实验板在37oC下温育4小时。使用荧光酶标仪测量荧光，在544 nm处测定激发光，在590 nm处测定发射光。细胞周期分析中, 混合细胞，使用溶于PBS的70%乙醇使细胞渗透，然后在4oC温育过夜。使用碘化丙啶 (5 μg/mL) 在4oC下对RNase处理的样本(10 μg RNase/mL，在37oC下处理20分钟)染色10分钟。通过荧光激活细胞分选(FACS)分选，使用Beckman-Coulter Quanta SC MPL系统测定细胞周期变化，使用CXP软件分析。凋亡分析中，分离细胞，然后收集。使用Vybrant凋亡检测试剂盒进行Annexin染色。细胞储存在冰上，1小时内在Beckman Coulter Quanta MPL上分析。使用双通道分析测定Annexin V-阳性细胞。

动物实验

• Animal Models: 皮下接种PC3细胞的雄性裸鼠，接种4T1细胞的雌性BALB/c小鼠
• Formulation: 在NMP/PEG300/盐水中配制
• Dosages: ~30 mg/kg/day
• Administration: 口服饲喂，每天三次

Cytarabine是一种抗代谢药，也是DNA synthesis抑制剂，在野生型CCRF-CEM细胞中IC50为16 nM。

特性

Cytarabine是一系列改变核糖苷的抗癌药物中的第一个。

靶点

体外研究

Cytarabine (AraC)磷酸化为含脱氧胞啶激酶(dCK)的三磷酸盐形式 (Ara-CTP),与dCTP 竞争进入DNA中, 通过抑制DNA和 RNA 聚合酶功能而 抑制DNA合成 。Cytarabine作用于野生型CCRF-CEM 细胞，抑制生长活性比其他急性骨髓性白血病高很多，IC50为 16 nM。浓度不断提高的 Cytarabine (IC50 为0.69 μM) 作用于敏感大鼠白血病细胞系RO/1，导致代谢活性降低, 且作用于人类野生型dCK (IC50 为 0.037 μM) 而不是失活型选择性拼接的dCK形式时增强细胞毒性。10 μM Cytarabine 作用于大鼠交感神经元，诱导凋亡, 100 μM 时毒性最高，作用于神经元84小时，可杀死80%神经元，包含线粒体细胞色素-c的释放， caspase-3的激活， 抑制p53基因 可降低毒性，删除bax基因可延迟但是不会阻断毒性。

体内研究

Cytarabine高效作用于急性白血病，引起G1/S期停顿和同步化， 且低剂量时提高患白血病Brown Norway大鼠存活时间，说明使用高剂量Cytarabine 与抗人类白血病效果没有关系。Cytarabine按 250 mg/kg剂量 作用于妊娠 Slc:Wistar大鼠的胎盘，也引起胎盘生长受阻，且提高胎盘滋养细胞凋亡，处理3小时开始提高，6小时达到最高峰，48小时恢复到对照组水平，且明显增强 p53蛋白, p53转录靶点基因，如p21, cyclinG1 ，fas，和 caspase-3活性。

体外抑制生长实验:
Cytarabine储存液储备在无水乙醇中，制备连续稀释的Cytarabine。CCRF-CEM 细胞悬浮在含10% FBS, 0.1% Gentamicin,和 1%丙酮酸钠的RPMI培养基上。 按每mL 3-6×104个细胞密度细胞悬浮在各自培养基中，获得10 mL细胞悬浮液。合适体积 Cytarabine溶液转移到细胞悬浮液中，再温育72小时。细胞旋转减慢，再次悬浮在新鲜无Cytarabine培养基中，测定最终细胞数。通过分析细胞数与Cytarabine浓度的S曲线拟合, 而测定IC50。

细胞实验：

• Cell lines: 大鼠白血病细胞系RCL/0, RO/1和 K7,及人类单核细胞性白血病细胞U937
• Concentrations: 100 μM 左右
• Incubation Time: 24,48和72小时
• Method: 37oC下，不同浓度Cytarabine处理细胞24,48,和72小时。在处理 20,44,或68小时时，加入10 mL细胞增殖试剂WST-1溶液。和WST-1温育2或4小时后，使用比色分析测定细胞代谢活力,在450 nm处测定吸光值。通过eosin染色计算细胞分裂倍数，及细胞活性。

动物实验：

• Animal Models: 患髓细胞性白血病的Brown Norway大鼠
• Formulation: 溶于PBS (pH 7.0)
• Dosages: 5-1000 mg/kg
• Administration: 静脉注射

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

4.1115 mL

20.5575 mL

41.1150 mL

5 mM

0.8223 mL

4.1115 mL

8.2230 mL

10 mM

0.4112 mL

2.0558 mL

4.1115 mL

50 mM

0.0822 mL

0.4112 mL

0.8223 mL

TESTS

SPECIFICATIONS

RESULTS

Appearance

White to off white powder

Conforms

Solubility

100mg/ml water（50℃）,clear

Conforms

PH

6.5~8.0

7.24

Identification

HNMR,UV

Conforms

Specific rotation

 +154~+160°

+158.30°

M.P.

~214℃

Conforms

Purity(HPLC)

≥99%

99.89%

Conclusion

Passed

盐酸阿糖胞苷是IC50为16nM的抗代谢药物和DNA合成抑制剂。

IC50 & Target

IC50: 16 nM (DNA synthesis)

体外研究

阿糖胞苷磷酸化成三磷酸形式(Ara-CTP)，涉及脱氧胞苷激酶(dCK)，与dCTP竞争并入DNA，然后通过抑制DNA和RNA聚合酶的功能来阻断DNA合成。与其他IC50为16nM[1]的急性髓细胞白血病(AML)细胞相比，阿糖胞苷对野生型CCRF-CEM细胞的生长抑制活性更高。阿糖胞苷在10μM时明显诱导大鼠交感神经细胞凋亡，其中100μM时毒性最强，84h时80%以上的神经元死亡，包括线粒体细胞色素c的释放和caspase-3的激活，p53敲除可减轻其毒性，bax缺失可延缓其毒性。

体内研究

阿糖胞苷(250mg/kg)还可引起胎盘生长迟缓，增加妊娠的Slc:Wistar大鼠胎盘迷宫区滋养细胞凋亡，从治疗后3小时开始增加，6小时达高峰，48小时恢复到正常水平，p53蛋白、p53转录因子显著增强。离子靶基因如p21、cyclinG1、fas和caspase-3活性。阿糖胞苷对急性白血病非常有效，这种急性白血病导致阿糖胞苷G1/S阻滞和同步，并且以弱剂量相关的方式增加白血病棕色挪威大鼠的存活时间，表明高剂量阿糖胞苷的使用不影响其在人类中的抗白血病效果。

盐酸阿糖胞苷(标准品)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.5755 mL

17.8776 mL

35.7551 mL

5 mM

0.7151 mL

3.5755 mL

7.1510 mL

10 mM

0.3576 mL

1.7878 mL

3.5755 mL

以无水乙醇为溶剂制备阿糖胞苷原液，制备阿糖胞苷系列稀释液。将CCRF-CEM细胞悬浮于添加10%FBS、0.1%庆大霉素和1%丙酮酸钠的RPMI培养基中。将细胞悬浮在各自的培养基中，以3-6×104细胞/mL的最终密度提供10mL体积的细胞悬浮液，将适量的阿糖胞苷溶液转移到细胞悬浮液中，并继续培养72小时。细胞在无阿糖胞苷的新鲜培养基中下旋和再悬浮，并测定最终的细胞计数。通过细胞计数与阿糖胞苷浓度的曲线拟合来分析数据，并将结果表示为IC50（抑制细胞生长的阿糖胞苷浓度为对照值的50%）。

动物实验

阿糖胞苷溶于PBS中，浓度调整为50mg/mL。 
妊娠大鼠在妊娠第13天(GD13)腹腔注射250mg/kg阿糖胞苷。在本实验条件下，虽然胎儿死亡的发生率没有显著增加，但围生儿先天性异常和生长迟缓的检出率很高。治疗后1、3、6、9、12、24和48h，乙醚麻醉下心脏穿刺处死6只大坝，收集胎盘。作为对照，6只怀孕大鼠在GD13上注射等量的PBS，与阿糖胞苷治疗组同时处死。在每个时间点获得的六个大坝中，三个用于组织病理分析，三个用于逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析。

459.56

化学式

C22H29N5O4S

CAS号

1429639-50-8

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

>80 mg/mL

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

Ethanol

<1 mg/mL 难溶或者不溶

CZ415是一种有效的、ATP竞争性的mTOR抑制剂，具有良好的细胞透性。

靶点

体外研究

CZ415没有潜在的遗传毒性，具有良好的细胞透性。CZ415可抑制mTORC1和mTORC2下游产物的磷酸化（pS6RP，IC50=14.5 nM；pAKT，IC50=14.8 nM）。通过观测受激人类全血细胞18小时后的IFNγ分泌，CZ415具有免疫抑制作用，IC50为226 nM。CZ415在细菌突变分析(Ames test)或小鼠淋巴瘤分析（MLA）中，无论有或没有大鼠肝脏S9混合物，都不具有遗传毒性作用。

体内研究

体内试验证明，CZ415具有中等清除率并有良好的口服生物利用度。在anti-CD3小鼠模型中，CZ415有效地抑制mTOR下游信号，在CIA小鼠模型中，具有显著的抗炎症作用。CZ415在体内具有很高的选择性、药物类属性和效力，是研究mTOR病理生理作用的理想化合物。

364.4

化学式

C15H17FN6O2S

CAS号

1159824-67-5

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

5 mg/mL (13.72 mM) warming

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

Ethanol

<1 mg/mL 难溶或者不溶

CZC24832是第一个PI3Kγ选择性抑制剂，IC50为27 nM，比作用于PI3Kβ选择性高10倍，比作用于PI3Kα和PI3Kδ选择性高100倍以上。

靶点

体外研究

CZC24832对PI3Kγ具有优良的选择性。在对154个脂质和蛋白激酶以及其他922个蛋白的高通量筛选中，只有两个脱靶蛋白（PI3Kβ和PIP4K2C）在100倍的选择性范围内被检测出来。尽管人类和啮齿动物类中PI3K的亚型序列高度保守，CZC24832的PI3Kγ和PI3Kβ的效力在小鼠和大鼠中比人类低2〜4倍，但选择性窗口在很大程度上保留。在BT系统中，CZC24832抑制IL-17A（IC 50 =1.5 μM），并抑制B-细胞活化标记物如IL-6和IgG。此外，在T细胞系统，例如人脐静脉内皮细胞中，IL17A的产生被强烈抑制，表明PI3Kγ激酶活性在TH17的功能中起广泛作用。因此，CZC24832抑制T H 17细胞的分化。

体内研究

在IL-8依赖的空气袋模型中，CZC24832导致剂量依赖性的粒细胞募集的降低，这和在不含PI3Kγ的小鼠中观察到的抑制程度是一致的。在治疗胶原诱导的关节炎（CIA）模型小鼠中，用10毫克/千克CZC24832每天口服两次，导致了大幅减少的骨和软骨破坏以及整体临床参数。

D-AP5 是一个 NMDA 受体拮抗剂。

靶点

NMDA

体内研究

D-AP5是NMDA受体拮抗剂。 慢性脑室内输注D-AP5引起体内空间学习和长期增强（LTP）的平行剂量依赖性损伤。 当防止空间学习时，脑内D-AP5浓度不能诱导任何可测量的感觉运动干扰。 D-AP5输注与试验中游泳速度的逐渐降低有关。 D-AP5在空间任务中引起感觉运动障碍，但随着动物学习不能逐渐恶化。 用D-AP5处理的大鼠在水迷宫的延迟匹配 – 放置方案中显示出空间记忆中的延迟依赖性缺陷。

DNQX

MB2932

CNQX

MB2934

NBQX

MB4087

MPEP

MB3798

NMDA (N-甲基-D-天门冬氨酸)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

5.0728 mL

25.3640 mL

50.7279 mL

5 mM

1.0146 mL

5.0728 mL

10.1456 mL

10 mM

0.5073 mL

2.5364 mL

5.0728 mL

50 mM

–

–

–

• 本研究使用雄性冠状鼠。除了手术前12小时外，他们都是单独居住，在任何时候都可以免费获得食物和水。动物植入30mm D-AP5 (N=6)，在水迷宫中测试。