AZD6738是一种口服具有活性的，选择性ATR 激酶抑制剂，IC50 为 1 nM。

靶点

ATR

IC50

1 nM

体外研究

在四个Kras突变细胞系：H23，H460，A549，和H358中，AZD6738抑制ATR激酶活性，并损害细胞活性。在ATM缺失的H23细胞中，AZD6738强烈增强顺铂诱导快速细胞死亡的作用。在p53 或 ATM缺失的细胞中，AZD6738治疗引起复制叉停滞和未修复DNA损伤的积累，导致有丝分裂障碍，从而使细胞死亡。

体内研究

在负荷H460和H23肿瘤的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg, p.o.)导致肿瘤生长抑制(TGI)，结合顺铂引起ATM缺失的H23肿瘤快速退化。在负荷LoVo异种移植物的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg) + IR (2 Gy)的组合避免了毒性，同时仍保持疗效。

AZ20

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4242 mL

12.1209 mL

24.2418 mL

5 mM

0.4848 mL

2.4242 mL

4.8484 mL

10 mM

0.2424 mL

1.2121 mL

2.4242 mL

50 mM

0.0485 mL

0.2424 mL

0.4848 mL

Cell lines: H23，H460，A549，和 H358 细胞

• Concentrations: ~30 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞在白色壁，透明底的96孔板中与指示剂量的AZD6738，cisplatin，gemcitabine，或它们的组合处理48小时。ATP水平通过CellTiter-Glo发光细胞活性试验和Safire2酶标仪测量代替品活性评估。进一步分析之前，原始数据对本底发光进行校正。对于AZD6738治疗，在GraphPad Prism 6中将对数转化(x=log(x))的数据归一化为未处理对照组的平均值，通过非线性回归(log(抑制剂) vs. 对可变斜率的响应值) 生成对数剂量响应曲线。GI50值，定义为Y = 50%时，X的剂量，根据剂量反应曲线推导得出。

动物实验： 

Animal Models: 负荷 H23 或 H460 异种移植物的雌性无胸腺裸鼠

• Formulation: 10% DMSO，40% 丙二醇，和 50% 无菌 dH2O
• Dosages: 25 或 50 mg/kg
• Administration: p.o.

AZD7762是有效的，选择性Chk1抑制剂，IC50为5 nM，也同等有效作用于Chk2，对CAM, Yes, Fyn, Lyn, Hck 和 Lck作用效果稍弱。

靶点

CHK1

CHK2

IC50

5 nM

<10 nM

体外研究

AZD7762是Chk1选择性抑制剂, 通过与Chk1的ATP结合位点可逆结合而抑制cdc25C肽段的Chk1磷酸化，IC50 为5 nM，Ki为 3.6 nM。AZD7762诱导细胞周期停滞，EC50为0.620 μM, 且通过阻断cdc25A依赖chk1的降解 和Cyclin A的激活，显著废除Camptothecin诱导的G2期停滞，EC50为10 nM。300 nM AZD7762增强Gemcitabine作用于SW620的抗癌活性，也增强 Topotecan作用于MDA-MB-231 的抗癌活性，通过降低 GI50 值，分别从24.1 nM和2.25 μM 降到1.08 nM 和0.15 μM。AZD7762 作用于多种携带p53野生型，p53突变型，MDM2增添，或p14缺失的神经母细胞瘤细胞系，IC50为82.6 nM 到505.9 nM。

体内研究

AZD7762 按25 mg/kg剂量单独作用于携带H460-DNp53移植瘤的小鼠和携带SW620移植瘤的小鼠，显示很弱的抗癌活性,但是和Gemcitabine(60 mg/kg)联用处理这两种携带移植瘤的小鼠，则具有强抗癌活性。AZD7762和Gemcitabine(10 mg/kg) 联用作用于携带H460-DNp53移植瘤大鼠，抑制肿瘤体积，这种作用存在剂量依赖性。AZD7762 (25 mg/kg)和Irinotecan (25或50 mg/kg) 联用作用于携带SW620移植瘤的小鼠，引起全部肿瘤衰退

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7592 mL

13.7961 mL

27.5923 mL

5 mM

0.5518 mL

2.7592 mL

5.5185 mL

10 mM

0.2759 mL

1.3796 mL

2.7592 mL

50 mM

0.0552 mL

0.2759 mL

0.5518 mL

Chk1激酶实验:
使用杆状病毒载体，融合在昆虫细胞中，重组人类Chk1表达作为谷胱甘肽S转移酶，通过胱甘肽亲和层析纯化。合成的肽底物 (N-biotinylaminohexanoyl-KKVSRSGLYRSPMPENLNRPR)用于Chk1 合成。实验中，肽和ATP(完全和40 nCi [33P]ATP) 的终浓度分别为0.8和1 μM。不同浓度AZD7762, 含肽和chk1激酶和ATP的buffer相继加到384孔板中。然后温育2小时,加入含EDTA和邻近闪烁分析(SPA)圆球微粒的buffer终止反应, 然后使用TopCount计数器读数。进行数据分析，测定IC50值。

细胞实验

• Cell lines: HT29,SW620和MDA-MB-231细胞
• Concentrations: 溶于DMSO, 终浓度为12.5 μM 左右
• Incubation Time: 20或48小时
• Method: 检测点废除实验中, 用Camptothecin(拓扑异构酶I 抑制剂;0.07 μg/mL)处理HT29细胞2小时，诱导产生G2期检测点。然后用AZD7762(12.5 μM 到6 nM)12点滴定法和Nocodazole处理细胞20分钟。细胞和3.7%甲醛混合1小时，用含0.05% Triton X的PBS渗透处理, 然后与anti-phH3抗体温育1小时，然后用Hoechst染料染色1小时。使用ArrayScan测定有丝分裂指数，作为进行有丝分裂细胞的百分数。增强实验中,用Gemcitabine 9点滴定（0.01到 100 nM）和固定剂量AZD7762(300 nM)处理SW620或MDA-MB-231细胞24小时。24小时后, 移除培养基，单独加入AZD7762，再处理24小时。细胞在无AZD7762培养基中再温育72小时，通过MTT测定细胞增殖。

动物实验

• Animal Models: 皮下注射H460-DNp53细胞或SW620细胞的雄性NCr小鼠, 或皮下注射H460-DNp53细胞的雄性rnu大鼠
• Formulation: 11.3% 2-羟丙基-β-环糊精
• Dosages: ~25 mg/kg
• Administration: 静脉注射

AZD8055 是新型的，ATP竞争性的mTOR抑制剂，IC50为0.8 nM，作用于PI3K亚型和ATM/DNA-PK，具有优异的选择性（约1000倍）。

靶点

全长mTOR

截短的mTOR

IC50

0.8 nM

0.13 nM

体外研究

AZD8055作用于所有 PI3K亚型 (α, β, γ, δ) 和其他近PI3K激酶家族(ATM和DNA-PK)显示出低活性。AZD8055抑制mTORC1(p70S6K 和4E-BP1) ，mTORC2 (AKT) 和下游蛋白的磷酸化。AZD8055完全抑制4E-BP1抗Rapamycin 的T37/46 磷酸化位点, 导致明显抑制cap-dependent 转译作用。AZD8055有效抑制U87MG, A549和H838 细胞增殖， IC50分别为53, 50，和20 nM。AZD8055作用于H838和A549细胞，也诱导自体吞噬和增加LC3-II 水平。AZD8055降低白血病细胞增殖和细胞周期进展, 降低白血病祖细胞的无性系生长，且在白血病细胞中诱导caspase依赖的细胞凋亡，但是作用于正常未成熟的CD34+ 细胞时不会产生这种诱导作用。AZD8055 抑制儿科临床前期测试计划(PPTP)细胞系，IC50 为24.7 nM，且在EFS 分布时诱导产生明显区别。

体内研究

AZD8055 按2.5/10 mg/kg剂量作用于U87MG和A549移植瘤抑制pS6和pAKT，导致肿瘤生长受抑制。AZD8055按10/20 mg/kg剂量处理多种移植瘤包括U87MG, BT474c, A549, Calu-3, LoVo, SW620, PC3和MES-SA时，显示出明显的抗癌活性。AZD8055诱导肿瘤体积下降约40%, 伴随着AKT, S6K，和SGK蛋白激酶磷酸化的切除。用AZD8055 (5mg/kg, 每天2次) 和SAHA (100 mg/kg/每天)处理PTEN+/−LKB1+/hypo 移植瘤，导致肿瘤生长全部受抑制，且对鼠mTORC1和mTORC2信号抑制没有副作用。

特征

AZD8055是第一种抑制两种类型mTOR蛋白的药物，被认为可能比之前mTOR抑制剂更有效。

Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864

MB3476

Torin 2

MB4502

XL-388

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1480 mL

10.7402 mL

21.4804 mL

5 mM

0.4296 mL

2.1480 mL

4.2961 mL

10 mM

0.2148 mL

1.0740 mL

2.1480 mL

50 mM

0.0430 mL

0.2148 mL

0.4296 mL

抑制mTOR的细胞为基础的测定实验:
通过高通量筛选细胞检测法，使用MDA-MB-468细胞，测定mTORC1 和mTORC2活性。用增加浓度的AZD8055处理细胞2小时。温育到最后时，细胞进行固定，冲洗，用p-Akt（S473）抗体和p-S6（S235/236)抗体探测。用激光扫描仪检测磷酸化水平。

细胞实验

• Cell lines: U87MG, A549，和H838 细胞
• Concentrations: 溶解在DMSO中，作为10 mM 储备液, 0.001-1.0 μM
• Incubation Time: 72到96小时
• Method: 用AZD8055处理细胞72到96小时， 用0.03 mg/mL Hoechst 33342染色细胞核，用1 μg/mL 吖啶橙染色酸性小囊泡染色。通过ArrayScan II平台在450和536纳米处获得图像，测量酸性小囊泡的百分数和细胞数量。进行LC3测评，用10 μg/mL e64d/抑肽素处理细胞30 到90分钟，然后和AZD8055温育。细胞溶解在冰上，通过免疫印迹法分析。

动物实验

• Animal Models: U87MG, BT474c, A549, Calu-3, LoVo, SW620, PC3 and MES-SA U87-MG和A549细胞建立在无病原体，雌性裸鼠体内(nu/nu:Alpk)。
• Formulation: 溶解在captisol中 (CyDex, pH 3.0)，稀释到最终captisol浓度为30% (w/v)。
• Dosages: 2.5-20 mg/kg
• Administration: 口服饲喂，每天1到2次。

457.47

化学式

C24H25F2N3O4

CAS号

1627494-13-6

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

91 mg/mL (198.92 mM) warming

Ethanol

35 mg/mL warmed (76.5 mM)

Water

<1 mg/mL

AZD8186是一种有效的选择性 PI3Kβ和 PI3Kδ抑制剂，IC50分别为 4 nM 和 12 nM。Phase 1。

靶点

体外研究

对PI3Kβ抑制敏感的MDA-MB-468细胞和对PI3Kδ抑制敏感的Jeko B细胞中，AZD8186有效抑制p-Akt，IC50分别为3 nM和4 nM。AZD8186在大多数PTEN缺失的细胞系中表现出最高的生长抑制活性，GI50 <1 μM。

体内研究

负荷PTEN-缺失的PC3前列腺肿瘤异种移植物的裸鼠中，AZD8186 (100 mg/kg, p.o.)强烈抑制Akt磷酸化水平，并引起显著的肿瘤生长抑制。与ABT结合使用时，AZD8186 (60 mg/kg, p.o.)完全抑制肿瘤生长。在小鼠PTEN-缺失的 TNBC 模型HCC70和MDA-MB-468，以及前列腺模型HID28中，AZD8186 (50 mg/kg, p.o.)也会抑制肿瘤的生长。AZD8186与化学去势的结合疗法导致持久的肿瘤退化，该作用在治疗停止后依然持续。

AZD8330是一种新型，选择性的，非ATP竞争性MEK 1/2抑制剂，IC50为7 nM。

特性

AZD8330是一种新型的有选择性高效率无竞争的针对MEK 1/2的抑制剂。

靶点

体外研究

AZD8330可以有效抑制MEK 1/2。在pERK系统中AZD8330能达到超豪微摩尔级的效力，在MEK 1/2抑制剂敏感的细胞系的功能（扩增）实验中也能达到低至超豪微摩尔级的效力。MEK抑制剂AZD8330特异性抑制促分裂原活化蛋白激酶激酶1(MEK 或 MAP/ERK激酶1)，抑制了生长因子调节的细胞信号传导的过程并抑制了肿瘤细胞增殖。

体内研究

在Calu-6大鼠异种移植药代动力学/药效(PK/PD) 模型中，单一使用AZD8330口服剂量1.25 mg/kg，4到8小时就可以抑制90%以上的ERK磷酸化作用。在Calu-6裸鼠移植瘤模型中，每日一次药用剂量在0.4 mg/kg时就完全可以抑制80%以上的肿瘤生长。在Calu-6模型中，AZD8330抑制肿瘤生长是剂量依赖型的，每天一次剂量在0.3 mg/kg和1.0 mg/kg

Binimetinib, ARRY-438162

MB5452

PD184352 (CI-1040)

MB9629

SL-327

MB4063

U0126-EtOH

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1681 mL

10.8406 mL

21.6812 mL

5 mM

0.4336 mL

2.1681 mL

4.3362 mL

10 mM

0.2168 mL

1.0841 mL

2.1681 mL

50 mM

0.0434 mL

0.2168 mL

0.4336 mL

MEK1酶活性分析:
用杆状病毒感染Hi5昆虫细胞表达，然后利用固相金属亲和层析、离子交换、凝胶过滤的方法纯化出NH2末端六聚组氨酸标记的结构上有活性的MEK1(S218D, S222D ΔR4F)。可以通过检测MEK1将[γ- 33P]磷酸从[γ-33P]ATP连接到ERK2上的能力来评估MEK1的活性。首先将25 mM HEPES(pH 7.4), 10 mM MgCl2, 5 mM β-磷酸甘油, 100 μM 钒酸钠, 5 mM DTT, 5 nM MEK1, 1 μM ERK2和0到80 nM的AZD8330 (终浓度 1% DMSO)混合置于在96孔聚丙烯板中，加入10 μM ATP（每孔0.5 μC k[γ-33P]ATP）起始反应，室温孵育45分钟，加入等体积25%的三氯乙酸以终止反应并使蛋白沉淀。沉淀的蛋白与玻璃纤维B过滤板结合，用0.5%的磷酸将剩余的标记ATP洗掉，然后用液体闪烁计数器统计反射性物质的含量。反应混合物种ATP 数量的不同决定了反应的ATP依赖性。实验数据之后全部被拟合

细胞实验

• Cell lines: Malme-3M黑色素瘤细胞
• Concentrations: 0 μM -10 μM
• Incubation Time: 1 小时
• Method:

把Malme-3M 黑色素瘤细胞接种到96孔板中，在37°C 条件下用不同浓度的AZD8330处理1小时。 然后把细胞固定，通透，与磷酸化ERK抗体和ERK 1/2 的抗体孵育. 将细胞洗涤之后加入荧光二抗.然后将孔板用LICOR 荧光成像系统读数. 把 pERK 的信号强度标准化为总的ERK 信号强度.

动物实验

• Animal Models: 携带Calu-6细胞的雌性裸鼠大鼠 (NIH rnu/rnu), 携带SW620细胞的裸鼠大鼠
• Formulation: 配制在0.5% 羟丙基甲基纤维素，加0.1% Tween
• Dosages: 0.3 mg/kg, 1 mg/kg
• Administration: 口服

AZD8835是一种新型的PI3Kα和PI3Kδ混合型抑制剂，IC50分别为6.2 nM和5.7 nM。对PI3Kβ和PI3Kγ同样具有选择性，IC50分别为431 nM和90 nM。

靶点

体外研究

AZD8835是PI3Kα（野生型，E545K和H104R突变体）和PI3Kδ的有效抑制剂。在对PI3Kα抑制敏感的细胞和对PI3Kδ抑制敏感的细胞中，它还是p-Akt的有效抑制剂（在带有PIK3CA突变的人原发性乳腺浸润性导管癌BT474细胞中IC50为0.057 μM，在JeKo-1 B细胞系中IC50为0.049 μM），但对那些对PI3Kβ和PI3Kγ抑制敏感的细胞效果甚微。

体内研究

当持续给药时。AZD8835在相应的具有移植乳腺肿瘤的小鼠模型中具有抗肿瘤效果，口服给药时，具有高代谢稳定性和合适的物理性质。

BGT226 (NVP-BGT226)

MB5532

BYL719

MB4351

PI-3065

MB5286

PIK-293

MB3879

AS-605240

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1297 mL

10.6487 mL

21.2974 mL

5 mM

0.4259 mL

2.1297 mL

4.2595 mL

10 mM

0.2130 mL

1.0649 mL

2.1297 mL

50 mM

0.0426 mL

0.2130 mL

0.4259 mL

Cell lines: BT474, MCF7或T47D细胞
Concentrations: 250 nmol/L
Incubation Time: 24 h
Method: 将BT474, MCF7或T47D细胞以500-2000个细胞/孔的密度接种于384孔细胞培养板，培养过夜。然后用化合物处理细胞，每4小时的时间间隔测定一次细胞融合率，持续几天。

动物实验：

Animal Models: CD1小鼠
Formulation: HPMC/Tween [0.5%羟丙甲纤维素(甲基纤维素）/0.1%聚山梨醇酯 80]
Dosages: 0.1 mL/10 g小鼠
Administration: 口服

Sapitinib (AZD8931)是一种可逆的，ATP竞争性EGFR，ErbB2和ErbB3抑制剂，无细胞试验中IC50分别为4 nM，3 nM和4 nM，作用于NSCLC细胞比Gefitinib或Lapatinib更有效，作用于ErbB家族比作用于MNK1和Flt选择性强100倍。

靶点

体外研究

AZD8931作用于NSCLC和SCCHN 细胞系的效果不同。AZD8931高度选择性作用于 PC-9细胞(EGFR 激活突变型),GI50为0.1 nM，而低活性作用于 NCI-1437细胞，GI50 >10 μM。与lapatinib 或 gefitinib相比，AZD8931作用于 PE/CA-PJ41, PE/CA-PJ49, DOK 和FaDu细胞，更有效作用于p-EGFR, p-erbB2 和 p-erbB3。

体内研究

AZD8931 作用于BT474c, Calu-3, LoVo, FaDu 和 PC-9移植瘤，具有抗肿瘤活性。AZD8931急性处理BT474c移植瘤，可降低 p-AKT, Ki67 表达和p-ERK。AZD8931 可诱导产生M30凋亡标记。而且, 与gefitinib 和lapatinib相比，AZD8931治疗LoVo移植瘤，具有更有效的促凋亡效果。

Semaxanib(SU-5416 )

MB3985

TAK-285

MB3995

Telatinib

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1100 mL

10.5501 mL

21.1002 mL

5 mM

0.4220 mL

2.1100 mL

4.2200 mL

10 mM

0.2110 mL

1.0550 mL

2.1100 mL

50 mM

0.0422 mL

0.2110 mL

0.4220 mL

分离的激酶实验:
人类EGFR和erbB2 细胞内激酶域在杆状病毒/Sf21 系统中克隆和表达。使用ATP在 Km浓度(0.4 mM 测定 erbB2,2 mM 测定 EGFR)，使用 ELISA 法测定AZD8931的一种活性。

细胞实验

• Cell lines: 头颈部肿瘤细胞系(KYSE-30, OE21, PE/CA-PJ15, PE/CA-PJ34 (克隆 C12), PE/CA-PJ41 (克隆 D2), PE/CA-PJ49, DOK, Detroit562, RPMI2650, SCC-4, SCC-9, SCC-25, CAL 27, SW579, FaDu, Hs 840.T, KB, KYSE-450, 和 HEp-2, HN5) 和 NSCLC 细胞系 (PC-9, Calu-3, NCI-H2073, NCI-H1623, NCI-H522,
• Concentrations: 0.001-10 μM
• Incubation Time: 96 小时
• Method: 为了测定AZD8931体外抗细胞增殖活性，使用AZD8931处理一组 NSCLC 和SCCHN 细胞系。细胞和 AZD8931 (0.001-10 μM)温育96小时。细胞和 MTS 比色分析实验试剂温育4小时而测定存活细胞数，然后通过分光光度计在490 nm处测量吸光值。

动物实验

• Animal Models: 携带BT474c, Calu-3, LoVo, FaDu 和 PC-9移植瘤的Swiss 裸鼠或SCID小鼠
• Formulation: 悬浮在溶于去离子水的1% (v/v)Tween-80溶液中
• Dosages: 6.25-50 mg/kg
• Administration: 口服饲喂

Azelnidipine是一种二氢吡啶类钙通道阻断剂。

靶点

 Calcium channel 

体外研究

Azelnidipine是一种新开发的长效钙通道阻断剂，具有独特的药理学特性，例如使心跳减慢和对维管组织的高亲和力，这些特性使它与其它的钙通道阻断剂有所不同，因此Azelnidipine成为新一代钙通道阻断剂可以用来治疗高血压，不管病人是否具有缺血性心脏病的风险。由于它的高脂溶性使得它从血液中被清除后仍然可以留在血管壁当中继续发挥降血压的功效。

氨氯地平

MB1484

尼莫地平

MB8145

西尼地平

Azilsartan是angiotensin II type 1 (AT1)（血管紧张素II 1型）受体拮抗剂，IC50为2.6 nM。

特性

一种有效的，口服具有活性的特异性AII受体拮抗剂。

靶点

体外研究

Azilsartan抑制125I-Sar1-Ile8-AII对人血管紧张素1型受体的特异性结合。细胞试验中，Azilsartan也会抑制AII诱导的肌醇1磷酸盐(IP1)的积累，IC50值为9.2 nM。在离体的兔子动脉条中，Azilsartan减少对AII的最大收缩响应，pD’2 值为9.9。带状材料洗掉后，Azilsartan对AII诱导的收缩响应的抑制作用依然存在。口服葡萄糖耐量测试中(OGTT)，Azilsartan抑制血浆葡萄糖水平的增加，而不会显著改变胰岛素浓度或提高胰岛素敏感性。在骨骼肌中，0.001%剂量的Azilsartan减少TNF-α的表达。在脂肪组织中，Azilsartan减少TNF-α表达，但是增加脂联素，PPARγ，C/EBα，和aP2的表达。在培养的3T3-L1脂肪前体细胞中，Azilsartan增强脂肪形成，作用于编码基因过氧化物酶体增生物激活的受体-α (PPARα)，PPARδ，瘦素，脂肪酶，和脂联素的表达，比valsartan有效。外源性增补的血管紧张素II不存在下，Azilsartan也会有效抑制血管细胞增生。

体内研究

在Koletsky大鼠体内，口服葡萄糖耐量测试中，Azilsartan治疗降低血压，基础血浆胰岛素浓度和胰岛素耐受指数的稳态模式评估，并抑制血糖和胰岛素浓度的过度增加。Azilsartan下调11β-羟化类固醇脱氢酶1型的表达。

阿齐沙坦(标准品)

MB10723

AT1A，血管紧张素Ⅱ受体（225-237）

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1908 mL

10.9541 mL

21.9082 mL

5 mM

0.4382 mL

2.1908 mL

4.3816 mL

10 mM

0.2191 mL

1.0954 mL

2.1908 mL

50 mM

0.0438 mL

0.2191 mL

0.4382 mL

人 AT1 受体的配体结合研究:
放射性配体结合试验使用人AT1受体涂覆的包含4.4到6.2 fmol受体/孔 (10 μg 细胞膜蛋白/孔)的微孔板进行。细胞膜涂覆的孔与包含不同浓度Azilsartan 的45 μL试验缓冲液(50 mM Tris-HCl，5 mM MgCl2，1 mM EDTA，和0.005% CHAPS，pH 7.4)在室温下进行培育。90分钟后，5 μL 125I-Sar1-Ile8-AII (终浓度0.6 nM)在试验缓冲液中溶解，并加入孔中，将板培育5小时。每一个步骤中，板在振动器上简单温和摇晃。在洗脱实验中，细胞膜与Azilsartan培育90分钟，然后立即用200 μL/孔试验缓冲液洗涤2次以除去未结合的化合物，并进一步与125I-Sar1-Ile8-AII培育5小时。细胞膜结合放射性使用TopCount微型板闪烁计数器和荧光计数器计数。在评估Azilsartan从AT1受体上的解离率实验中，细胞膜与30 nM Azilsartan培育90分钟。Azilsartan抑制大约90%的125I-Sar1-Ile8-AII与人AT1的特异性结合。随后将细胞膜立即用200 μL/孔试验缓冲液洗涤2次，并进一步与125I-Sar1-Ile8-AII培育240分钟。细胞膜结合的放射性使用TopCount微孔板闪烁荧光计数器计数30分钟，60分钟，120分钟，150分钟，180分钟，或240分钟。125I-Sar1-Ile8-AII的非特异性结合在10 μM未标记AII存在下进行评估。未标记的AII在洗脱实验后再次加入。特异性结合定义为总结和减去非特异性结合。

细胞实验

• Cell lines: 表达人AT1受体的 COS-7 细胞
• Concentrations: 0 μM -1 μM
• Incubation Time: 2小时
• Method: 转染24小时后，表达AT1受体的COS-7细胞通过将培养基更换为饥饿缓冲液(1 mM CaCl2，0.5 mM MgCl2，4.2 mM KCl，146 mM NaCl，5.5 mM 葡萄糖，和10 mM HEPES，pH 7.3)进行饥饿处理。然后，在饥饿缓冲液中溶解的5 μL/孔Azilsartan以指示浓度加入细胞中，并将其以指示时间预处理。饥饿处理2小时后，AII 10 nM存在或不存在下，将LiCl以50 mM的终浓度加入，细胞进一步在37°C下培养指定的时间。在洗脱实验中，细胞用100 μL/孔饥饿缓冲液洗涤一次，以除去未结合的Azilsartan，然后在用AII刺激。肌醇-1-磷酸(IP1)的累积使用IP-One Tb试剂盒测量。荧光能量共振转移信号在酶标仪上测量。

动物实验

• Animal Models: 雄性 Wistar-Kyoto (WKY)大鼠，肥胖的 Koletsky (fak/fak)大鼠
• Formulation: 悬浮在 5% Gum Arabic中
• Dosages: 1 mg/kg，2 mg/kg 和 3 mg/kg
• Administration: 口服强饲

b-AP15是一种deubiquitinases（去泛素化酶）抑制剂，识别19S蛋白酶体的，抑制Ub-AMC分解， IC50为2.1 μM。

特性

b-AP15不是一般的去泛素化酶抑制剂，对重组和胞浆非蛋白酶体半胱氨酸去泛素化酶具有最低抑制效果。

靶点

体外研究

b-AP15抑制两种19S调节颗粒相关的去泛素化酶，泛素C-末端水解酶5（UCHL5）和泛素特异性肽酶14（USP14），导致多聚泛素的积累。b-AP15导致UbG76V-YFP受体累积， IC50为0.8 μM, 这种作用存在剂量依赖性，说明损伤的蛋白酶体降解受损。b-AP15 (1 μM)作用于人类结肠癌HCT-116细胞，导致多聚泛素化蛋白快速累积。b-AP15(2.2 μM)作用于HCT-116细胞，提高细胞周期蛋白依赖性激酶CDKN1A和CDKNIB，及肿瘤抑制基因TP53的数量，这种作用存在剂量依赖性，但不改变鸟氨酸脱羧酶1（ODC1）的数量。b-AP15(1 μM)作用于HCT-116细胞，导致细胞周期停滞在G2/M期，相应地，导致细胞周期抑制剂累积。b-AP15处理提高亚二倍体细胞的数量，并相应地增加，细胞凋亡标记的数量，包括活化的caspase-3，caspase裂解的多聚ADP核糖聚合酶（PARP）和细胞角蛋白-18（CK18）。与永生化上皮细胞（hTERT-RPE1）或外周血单核细胞相比，b-AP15对HCT-116细胞毒性更大。b-AP15抑制去泛素活性，使用各种底物，包括Ub-AMC, Ub-GFP22, 泛素化p53-结合蛋白同源物(HDM2), 及K48-和K63-连接的泛素四聚体链。b-AP15是UPS抑制剂，通过诱导cathepsin-D依赖性的溶酶体凋亡途径而诱导细胞死亡。b-AP15引出特征性的UPS缺陷，包括泛素偶联物，细胞周期抑制剂，如p21，p27，和肿瘤抑制基因p53的积累。b-AP15抑制半胱氨酸DUBs,的去泛素化酶活性，USP14稍微比UCHL5敏感。b-AP15作用于过量表达抗凋亡Bcl-2蛋白的细胞和缺乏p53基因的细胞，诱导细胞凋亡。b-AP15 (1 μM) 抑制ATP诱导的IL-1β从LPS诱导的腹腔巨噬细胞中释放。b-AP15(1 μM)作用于THP-1细胞，降低Nigericin处理诱导的细胞死亡水平。b-AP15(1 μM)处理LPS诱导的THP-1细胞，显著降低Nigericin处理后形成的ASC斑点数量。

体内研究

b-AP15 (5 mg/kg)处理携带鳞状细胞癌移植瘤的重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠，具有显著的抗肿瘤活性。b-AP15(5 mg/kg)处理携带HCT-116结肠癌移植瘤的小鼠，显著延缓肿瘤发病。

MB3663

IU1

MB4183

ML323

MB4588

Degrasyn (WP1130)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3844 mL

11.9221 mL

23.8442 mL

5 mM

0.4769 mL

2.3844 mL

4.7688 mL

10 mM

0.2384 mL

1.1922 mL

2.3844 mL

50 mM

0.0477 mL

0.2384 mL

0.4769 mL

• Animal Models: 携带HCT-116结肠癌移植瘤的小鼠
• Formulation: Cremophor EL和聚乙二醇400 (1:1)
• Dosages: 5 mg/kg
• Administration: 腹腔注射