Abiraterone是一种有效CYP17抑制剂，无细胞试验中IC50为2 nM。

特性

Abiraterone 已经批准用于治疗 Docetaxel处理的阉割性前列腺癌(CRPC)。

靶点

体外研究

Abiraterone 与野生型和突变型雄激素受体(AR)结合。在体外，Abiraterone抑制增殖和雄激素受体调节的雄激素受体阳性前列腺癌细胞基因表达，可通过抑制类固醇和抗雄激素受体来解释机制。事实上，Eplerenone激活的突变型雄激素受体可被更高浓度Abiraterone抑制。Abiraterone 取代WT-AR 和 T877A中的配体，EC50 分别为 13.4 μM 和 7.9 μM。Abiraterone作用于大鼠睾丸微粒，抑制裂解酶活性,IC50为5.8 nM。Abiraterone 醋酸盐显著抑制T分泌(−48%)，且反过来提高 LH 浓度。 (192%)。

体内研究

在人类睾丸微粒体中，Abiraterone抑制CYP17，IC50 为72 nM。Abiraterone 不能显著降低任何器官尺寸。Abiraterone 强烈降低睾丸激素水平，几乎达到切除睾丸的水平。与对照组相比，Abiraterone 降低 95%以上睾丸激素水平。

Abiraterone Acetate

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.8611 mL

14.3057 mL

28.6115 mL

5 mM

0.5722 mL

2.8611 mL

5.7223 mL

10 mM

0.2861 mL

1.4306 mL

2.8611 mL

50 mM

–

–

–

C17,20-裂解酶活性实验:
在含 0.25 M蔗糖, 20 mM Tris–HCl (pH 7.4), 10 mM G6P 和 1.2 IU/mL G6PDH的反应混合物中，微粒体稀释到终蛋白浓度为50 μg/mL。在 37oC下平衡10分钟后，加入βNADP 开始反应，终浓度为0.6 mM。在分配600 μL反应物到每个试管前，在氮气流下蒸发 Abiraterone到干燥状，然后在 37oC下温育10分钟。与 Abiraterone温育后, 500 μL反应混合物转移到含1 μM 酶底物, 17OHP的试管中。再温育10分钟后，试管置于冰上，加入0.1 ml NaOH 1N终止反应。试管速冻，然后储存于 −20oC 下，直到用于Δ4A 水平测定。进行Δ4A RIA，然后在微孔板格式上使用抗Δ4A的特异性抗体进行自动化。使用葡聚糖被覆活性炭悬浮法实现游离态抗原和结合态抗原的分离。离心后，在1450 MicrobetaPlus配体闪烁计数器中重复测量等分上清液。从标准曲线中测定未知样本中Δ4A浓度。使用非线性分析计算 IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: LNCaP 和VCaP 细胞
• Concentrations: 0.1 μM, 1 μM, 或5 μM
• Incubation Time: 24 小时或96 小时
• Method: LNCaP 和VCaP 细胞接种在96孔板上，在补充CSS的无酚红培养基或补充FBS的培养基中生长7天。接种后24小时和96小时分别使用Abiraterone处理细胞，在第7天加入CellTiter Glo测定细胞活性和测量发光。

动物实验：

• Animal Models: LAPC-4 移植瘤小鼠
• Formulation: 0.3% 羟丙基纤维素
• Dosages: 0.15 mmol/kg
• Administration: 皮下注射

Abiraterone Acetate是Abiraterone的醋酸盐形式，是一种甾体类细胞色素CYP17抑制剂，无细胞试验中IC50为72 nM。

特性

Abiraterone 是一种用于去雄抗性的前列腺癌药物。

靶点

体外研究

Abiraterone仅在SM1中表现出与血红素铁良好的络合作用。Abiraterone通过抑制CYP17A1，阻断雄激素的合成。Abiraterone也会阻断3β-羟化类固醇脱氢酶(3βHSD)，3βHSD是一种完全依赖生物活性雄激素合成的酶。Abiraterone抑制DHEA转化为Δ4-雄烯二酮。Abiraterone对3βHSD的抑制阻断DHT合成和雄激素受体响应。Abiraterone抑制Δ5-雄烯二醇转化为睾酮。Abiraterone抑制C17,20-裂解酶，在大鼠睾丸微粒体中IC50为5.8 nM。Abiraterone显著抑制睾酮分泌(−48%)，并反过来增加LH浓度(192%)。Abiraterone抑制AR-阳性前列腺癌细胞的体外增殖和AR调控基因的表达，这可能是除了类固醇生成抑制作用外的AR拮抗作用造成的。

体内研究

对大鼠进行腹腔注射给药，abiraterone在体内快速脱乙酰化。CB7630（Abiraterone Acetate）是去醋酸盐前体药物，它能够抑制循环中的睾酮至检测水平以下，并显著降低雄激素敏感器官的重量。Abiraterone耐受良好，平均消除半衰期为27.6小时。在小鼠中进行的临床前研究表明，abiraterone抑制CYP17，降低雄激素的产生，可导致前列腺、睾丸和精囊的体重减少。

Abiraterone

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.5540 mL

12.7698 mL

25.5395 mL

5 mM

0.5108 mL

2.5540 mL

5.1079 mL

10 mM

0.2554 mL

1.2770 mL

2.5540 mL

50 mM

0.0511 mL

0.2554 mL

0.5108 mL

C17,20-裂解酶活性试验:
将微粒体在反应混合物中稀释至终蛋白浓度为50 μg/mL，反应混合物包含0.25 M蔗糖，20 mM Tris-HCl (pH 7.4)，10 mM G6P 和 1.2 IU/mL G6PDH。在37 °C下平衡10分钟后，加入终浓度为0.6 mM的βNADP起始反应。在将600 μL反应混合物分配到各试管之前，测试化合物在氮气流中蒸干，然后在37 °C下培养10分钟。与Abiraterone培养后，将500 μL反应混合物转移到包含1 μM酶底物，17OHP的试管中。进一步培养10分钟后，试管放置在冰上，加入0.1 ml NaOH 1N停止反应。将试管深度冷冻，并储存在-20 °C，直到测试进行到Δ4A水平。开发Δ4A RIA，并且使用Δ4A的特异性抗体在实验室微孔板上自动化，指令由Biogenesis提供。游离和结合抗原的分离通过葡聚糖包被的活性炭悬浮液实现。离心分离后，等分上清液以一式两份在液体闪烁计数器上计数。未知样品的Δ4A浓度根据标准曲线测定。检出限为0.5 ng/mL，在13 ng/mL试验值处，试验内和试验之间的变异系数分别为10.7和17.6%。酶促反应表示为每10分钟和每毫克蛋白质Δ4A形成的pmol量。没有抑制剂(对照组)的最大活性值设定为100%。IC50值使用酶活性(%)对抑制剂浓度对数图的非线性分析计算。

细胞实验：

• Cell lines: LNCaP和VCaP细胞
• Concentrations: 0 μM -10 μM
• Incubation Time: 24小时和96小时
• Method:

LNCaP和VcaP细胞接种在96孔板，在CSS增补的无酚红或FBS增补的培养基中培养7天。在接种24小时和96小时后，细胞用Abiraterone处理，细胞活性在第7天通过加入CellTiter Glo测量发光情况测定。

动物实验：

• Animal Models: 负荷LAPC4细胞的雄性NOD/SCID小鼠
• Formulation: 0.1 mL 5% 苄醇和 95% 红花油溶液
• Dosages: 0.5 mmol/kg/d
• Administration: 皮下注射给药

描述

ABT-702是一种新型的、有效的非核苷类Adenosine kinase（腺苷激酶）抑制剂，IC50为0.7 nM。它在动物炎症和疼痛模型中具有口服活性。

靶点

体外

ABT-702 is an orally effective adenosine kinase inhibitor that has several orders of magnitude selectivity over other sites of adenosine (ADO) interaction (A1, A2A, A3 receptors, ADO transporter, and ADO deaminase). ABT-702 is equipotent (IC50=1.5±0.3 nM) in inhibiting native human AK (placenta), two human recombinant isoforms (AKlong and AKshort), and AK from monkey, dog, rat, and mouse brain. ABT-702 potently inhibits the activity of rat brain cytosolic AK in a concentration-dependent manner with an IC50 value of 1.7 nM. ABT-702 also potently inhibits AK activity in intact cultured IMR-32 human neuroblastoma cells (IC50=51 nM), indicating that ABT-702 can penetrate the cell membrane and potently inhibit AK at its intracellular site.

体内

ABT-702 significantly reduces acute thermal nociception in a dose-dependent manner after both intraperitoneal (ED50=8 μmol/kg i.p.) and oral (ED50=65 μmol/kg p.o.) administration in the mouse hot-plate test. Consistent with its antinociceptive effects in the hot-plate assay, ABT-702 also produces dose-dependent antinociceptive effects (ED50=2 μmol/kg i.p.) in the abdominal constriction assay. Like Morphine (21 μmol/kg i.p.), ABT-702 exhibits full efficacy in this model of persistent chemical pain. Rats are given an intraperitoneal injection of the adenosine A1 receptor antagonist DPCPX (3 mg/kg), ABT-702 (3 mg/kg), or vehicle 10 minutes prior to an intravenous injection of 2-18F-fluorodeoxy-D-glucose (FDG) (FDG, 15.4±0.7 MBq per rat). Rats are then subjected to a 15 minute static positron emission tomography (PET) scan. Reconstructed images are normalized to FDG PET template for rats and standard uptake values (SUVs) are calculated. To examine the regional effect of active treatment compared to vehicle, statistical parametric mapping analysis is performed. Whole-brain FDG uptake is not affected by drug treatment. Significant regional hypometabolism is detected, particularly in cerebellum, of DPCPX and ABT-702 treated rats, relative to vehicle-treated rats. Thus, endogenous adenosine can affect FDG accumulation although this effect is modest in quiescent rats. Body weight (316.8±28.4 g; mean±SD) and blood glucose (5.5±1.7 mM) are not significantly different among three groups. Whole-brain PET SUV values are 1.6±0.4, 1.6±0.6, and 1.8±0.6 for vehicle, ABT-702, and DPCPX-treated rats, respectively (F(2,9)=0.298, P=0.75). statistical parametric mapping (SPM) analysis reveals significant regional hypometabolism in the cerebellum, mesencephalic region, and medulla in the ABT-702-treated rats compared to the vehicle-treated rats.

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8648 mL

9.3240 mL

18.6480 mL

5 mM

0.3730 mL

1.8648 mL

3.7296 mL

10 mM

0.1865 mL

0.9324 mL

1.8648 mL

50 mM

0.0373 mL

0.1865 mL

0.3730 mL

Venetoclax (ABT-199, GDC-0199)是一种Bcl-2选择性抑制剂，无细胞试验中Ki为<0.01 nM，比作用于Bcl-xL和Bcl-w选择性高4800倍以上，对Mcl-1没有抑制活性。Phase 3。

特性

ABT-263 (Navitoclax)的重组

靶点

体外研究

ABT-199 对Bcl-xL, Mcl-1 和Bcl-w具有低的敏感性，Ki分别为48 nM, >444 nM 和 245 nM。ABT-199 有效抑制FL5.12-Bcl-2 细胞, RS4;11细胞， EC50分别为4 nM 和 8 nM,作用于 FL5.12-Bcl-xL细胞具有低活性，EC50为261 nM。ABT-199 诱导RS4;11 细胞快速凋亡，细胞色素c释放，caspase激活，磷脂酰丝氨酸外化，及sub-G0/G1 DNA积累。定量免疫印迹表明，ABT-199对包括NHL，DLBCL，MCL，AML和ALL细胞系的灵敏度，与Bcl-2的表达强烈相关。ABT-199也诱导 CLL 凋亡，平均EC50 为3.0 nM。

体内研究

ABT-199 (100 mg/kg)处理RS4;11 移植瘤，产生的最大肿瘤生长抑制率为95%，肿瘤生长延迟152%。ABT-199单独处理或与SDX-105及其他药剂联用处理DoHH2和Granta-519移植瘤，也抑制肿瘤生长。

MB7034

奥巴克拉甲磺酸盐

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.1515 mL

5.7575 mL

11.5149 mL

5 mM

0.2303 mL

1.1515 mL

2.3030 mL

10 mM

0.1151 mL

0.5757 mL

1.1515 mL

50 mM

0.0230 mL

0.1151 mL

0.2303 mL

亲和力分析:

• 竞争性荧光偏振检测测定ABT-199对Bcl-2家族的不同亚型的亲和力(Ki 或 IC50)。使用如下肽探针/蛋白对：f-bad (1 nM) 与Bcl-xL (6 nM), f-Bax (1 nM) 与 Bcl-2 (10 nM),f-Bax(1 nM) 与Bcl-w (40 nM), f-Noxa(2 nM) 与Mcl-1 (40 nM), 及 f-Bax (1 nM)与Bcl-2-A1(15 nM)。使用时间分辨荧光共振能量转移检测测定对Bcl-xL的亲和力。Bcl-xL (1 nM, His标记的 ) 与200 nM f-Bak, 1 nM Tb标记的anti-His抗体, 及 ABT-199，在室温下混合30分钟。在Envision酶标仪上，使用340/35 nm 激发滤光片及520/525 (f-Bak) 和495/510 nm (Tb标记的anti-His抗体) 发射滤光片，测量荧光值。

细胞实验

• Cell lines: NHL, DLBCL, MCL, AML 和 ALL 细胞系
• Concentrations: ~1 μM
• Incubation Time: 48 小时
• Method: RS4;11 细胞按每孔5×104个接种在96孔板中，使用初始1 μM-0.05 nM。在半对数期稀释的ABT-199 处理细胞。白血病和淋巴瘤细胞系按每孔1.5-2×104个接种在合适的培养基中，与ABT-199温育48小时。使用Cell TiterGlo 试剂测定对细胞增殖的影响。通过对浓度-反应数据非线性回归分析测定EC50值。

动物实验

• Animal Models: 雌性 C.B-17 SCID 小鼠(携带DoHH2 和Granta-519 移植瘤) 和雌性 C.B-17 SCID-beige 小鼠 (携带RS4;11和 Toledo 移植瘤)
• Formulation: 60% Phosal 50丙二醇(PG), 30%聚乙二醇(PEG) 400 和 10% 乙醇
• Dosages: ~100 mg/kg
• Administration: 口服处理

TESTS

SPECIFICATIONS

Apperance

Yellow powder

Identification

HNMR

Purity(HPLC)

≥97%

Navitoclax (ABT-263)是一种有效的Bcl-xL，Bcl-2和Bcl-w抑制剂，无细胞试验中Ki分别为≤0.5 nM，≤1 nM和≤1 nM，但与Mcl-1和A1结合微弱。Phase 2。

靶点

体外研究

ABT-263有效抑制Bcl-2蛋白家族，用荧光偏振分析法测试ABT-263作用于Bcl-xL, Bcl-2和 Bcl-w时，Ki分别为0.5, 1和1 nM。ABT-263结构上与ABT-737相关。ABT-263阻断Bcl-2 和Bcl-XL与凋亡前体蛋白相互作用。Bcl-2家族成员Bcl-2,Bcl-XL, 和Mcl-1的过量表达通常都与肿瘤的修复及抗药性有关。ABT-263作用于过量表达的Bcl-2 和Bcl-XL时显示出保护作用，EC50分别为60 和20 nM。ABT-263作用于不同的细胞显示出不同的细胞活性，作用于H146细胞系时EC50为110nM,而作用于H82细胞系时EC50为22 µM。ABT-737可以有效作用于四种EC50值 <400 nM的细胞系，即H146, H889, H1963, 和H1417。而两种抗ABT-737的细胞系，即H1048和H82，同样也显示出抗ABT-263的特性。

体内研究

用ABT-263处理H345移植瘤模型，按动物体重，每千克每天处理10mg ABT-263，结果肿瘤生长抑制率达80% ，肿瘤体积减小了50%以上，显示出ABT-263极强的抗癌效果。ABT-263作用于非小细胞肺癌和急性淋巴细胞白血病的移植瘤模型时，每天单独口服，结果显示肿瘤完全衰退。ABT-263单独作用于B-细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的移植瘤模型时效果不明显，但是可以显著增强临床其他相关用药的药性。

MB3970

HA14-1

MB7034

奥巴克拉甲磺酸盐

MB7269

ABT-199(GDC-0199)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.0261 mL

5.1303 mL

10.2605 mL

5 mM

0.2052 mL

1.0261 mL

2.0521 mL

10 mM

0.1026 mL

0.5130 mL

1.0261 mL

50 mM

0.0205 mL

0.1026 mL

0.2052 mL

激酶实验:
用竞争性荧光偏振检测测定ABT-263 作用于Bcl-2 家族不同亚型的Ki值或者IC50值。使用如下的肽探针对或者蛋白对：f-bad (1 nM) 和Bcl-xL (6 nM), f-Bax (1 nM) 和Bcl-2 (10 nM), f-Bax (1 nM) 和Bcl-w (40 nM), f-Noxa (2 nM)和Mcl-1 (40 nM), 及f-Bax (1 nM) 和Bcl-2-A1 (15 nM)。用时间分辨荧光共振能转移法测定ABT-263和Bcl-xL作用的结合紧密度。1 nM 用His标记的Bcl-xL 与200 nM f-Bak,及 1 nM Tb标记的His抗体混合, 然后在室温下处理30分钟。

细胞实验

• Cell lines: SCLC 细胞系
• Concentrations: 0-1 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method:

人类肿瘤细胞系在37oC 含5% CO2环境下获得，SCLC 细胞系培养在RPMI 1640培养基中，培养基包含10% 胎牛血清, 1% 丙酮酸钠, 25 mM HEPES, 4.5 g/L葡萄糖, 1% 青霉素/链霉素。用含有10% FBS和1% 青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基培养白血病和淋巴癌细胞系。细胞在96孔板上处理48小时，最终体积达到100ul。在体外测试ABT-263的细胞毒性。

动物实验

• Animal Models: C.B.-17严重联合免疫缺陷-米黄鼠
• Formulation: ABT-263在10% 乙醇, 30% 聚乙二醇400, 及60% Phosal 50 PG中制成
• Dosages: 100 mg/kg/d
• Administration: 口服处理

ABT-737是一种BH3模拟抑制剂，作用于Bcl-xL，Bcl-2和Bcl-w，无细胞试验中EC50分别为78.7 nM，30.3 nM和197.8 nM；但对Mcl-1， Bcl-B及Bfl-1没有抑制作用。Phase 2。

特性

ABT-737是第一代抗凋亡BCL-2家族蛋白小分子抑制剂。

靶点

体外研究

ABT-737降低BCL-2/BAX异质二聚体,而诱导HL60细胞凋亡,但是对细胞周期分布没有抑制效果。ABT-737也诱导细胞色素C从线粒体中释放，促进BAX构象改变，BAX与凋亡相关。在白血病模型中，ABT-737按30 mg/kg处理，阻断53%白血病负荷，且使鼠寿命明显延长。ABT-737不会导致血细胞数和血清组成发生异常。通过使Mcl-1失活而使抵抗细胞（Hela和MCF-7）对ABT-737敏感。当Mcl-1无效时，ABT-737也导致BAX/BAK-依赖的细胞色素C释放。ABT-737延长携带BCL-2肿瘤的鼠寿命。ABT-737从BCL2’s BH3结合袋取代BIM,使BIM激活BAX,诱导线粒体透化作用,快速致死慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞。Noxa正向调节增强H196细胞对ABT-737敏感性。ABT-737抑制多种SCLC细胞系，包括NCI-H889, NCI-H1963, NCI-H1417, NCI-H146等的增殖，并诱导细胞凋亡。最近研究显示，ABT-737作用于ATLL细胞，明显诱导HTLV-1感染的T细胞凋亡。ABT-737按100 mg/kg剂量作用于ATLL鼠模型显示出强抗癌活性。

体内研究

ABT-737按30 mg/kg剂量作用于白血病模型，抑制白血病负担值达53% , 且明显延长鼠寿命。ABT-737不会引起血细胞数和血浆化学性质发生变话。 ABT-737延长移植BCL-2传感肿瘤的鼠寿命。ABT-737按100 mg/kg剂量作用于ATLL鼠模型具有强抗癌活性。

ABT-263 (Navitoclax)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.2294 mL

6.1468 mL

12.2936 mL

5 mM

0.2459 mL

1.2294 mL

2.4587 mL

10 mM

0.1229 mL

0.6147 mL

1.2294 mL

50 mM

0.0246 mL

0.1229 mL

0.2459 mL

荧光偏振实验:
测定GST-BCL-2蛋白家族与FITC-BIM BH3域结合的亲和力。100 nM GST-BCL-2家族融合蛋白和不同浓度 ABT-737在PBS温育2分钟。然后，加入20 nM FITC-BIM BH3 肽。进行荧光偏振，测定IC50值。

细胞实验

• Cell lines: SCLC细胞系，包括NCI-H889, NCI-H1963, NCI-H1417, NCI-H146, NCI-187, DMS79, NCI-1048, NCI-H82, NCI-H196, H69AR,和DMS114
• Concentrations: 0.001-10 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method:

SCLC细胞在含10%人血浆的 100 μL 组织培养基的96孔培养板上处理48小时，使用MTS测定存活细胞。

动物实验

• Animal Models: 注射ER细胞的Scid 鼠
• Formulation: 30% 丙二醇, 5% Tween-80, 65% D5W (5% 葡萄糖水溶液) (pH 4−5)
• Dosages: 20 mg/kg和30 mg/kg
• Administration: 腹腔注射

ABT-751 (E7010)与β-tubulin的秋水仙素位点结合，抑制微管的聚合，不抑制MDR转运的底物，且作用于抗Vincristine， Doxorubicin，和Cisplatin的细胞系有效。

特性

ABT-751 是口服生物有效性的，与微管蛋白结合，抗有丝分裂的硫安类药剂。

靶点

Microtubules

体外研究

体外，ABT-751作用于神经母细胞瘤时，IC50为0.6–2.6 μM，作用于其他实体瘤细胞系时，IC50为0.7–4.6 μM，且具有选择毒性。而且, ABT-751也选择性作用于动态微管, 可用于解释浓度为ABT-751的IC90时的浓度时，α-微管阳性聚合小管持续乙酰化。

体内研究

ABT-751每天按100和75 mg/kg剂量单独作用于Calu-6移植瘤模型，具有显著抗癌活性，与Cisplatin联用时, ABT-751进一步延迟肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性。ABT-751单独作用于HT-29 结肠移植瘤模型，也具有显著抗癌活性，与5-FU联用时，也进一步延迟肿瘤生长，这种作用也存在剂量依赖性。ABT-751 作用于患淋巴癌的犬，具有剂量限制性毒性，伴随着呕吐，腹泻，厌食，最大耐受剂量(MTD)为350 mg/m(2) PO q24h。而且, ABT-751按最大耐受剂量（MTD）350 mg/m(2) PO q24h 处理，平均AUC和Cmax分别为5.55 μg-hour/mL和0.9 μg/mL。

MB4037

CYT997

MB1972

Combretastatin A4

MB1403

Cabazitaxel

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6924 mL

13.4622 mL

26.9244 mL

5 mM

0.5385 mL

2.6924 mL

5.3849 mL

10 mM

0.2692 mL

1.3462 mL

2.6924 mL

50 mM

0.0538 mL

0.2692 mL

0.5385 mL

• Cell lines: HOS, HTB-186 Daoy, TC-71, RD, SK-N-AS, SK-N-DZ, LD 和KCNR
• Concentrations: 0 到100 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: 培养在含FBS的1640 RPMI培养基上的细胞接种在96孔组织培养板上，设计为最适合铺满单层细胞生长(HOS, HTB-186 Daoy细胞每孔5,000个;TC-71, RD, SK-N-AS, SK-N-DZ, LD细胞每孔10,000个; KCNR细胞每孔30,000个), 且具有一个自动化的，多通道的移液管系统。 细胞在37oC/5% CO2下温育24小时，然后用1.25% DMSO/H2O（对照组）, VCR (0.1–1000 nM), ABT-751 (0.1 nM–100 μM)， 和Combretastatin (0.1–1000 nM) 处理72 小时。 细胞和三氯乙酸在4oC下混合，终浓度为10%, 冲洗, 在室温下烘干，用溶于1%乙酸的SRB染色，然后用Tris碱溶液染料。在540和 405 nm 双波长下，在Bio-Tek EL 340 UV 读数板上测定光密度。

动物实验

• Animal Models: 注射Calu-6 NSCLC, HT-29 结肠, 和 HCT-116细胞的无胸腺小鼠
• Formulation: ABT-751 溶于4% 乙醇/96%葡萄糖溶液(D5W) 和 1 eq. 1 N HCl
• Dosages: 75 或100 mg/kg/day
• Administration: 口服处理

PAR2-AP(SLIGKV-NH2)；Ser-Leu-Ile-Gly-Lys-Val-amide

MB11717

蛋白酶激活受体-2（1-6），人

MB11718

蛋白酶激活受体-2（1-6），小鼠，大鼠

MB11720

蛋白酶激活受体-2（1-6）酰胺，大鼠，小鼠

MB11719

蛋白酶激活受体-2（6-1）酰胺，人

MB11833

蛋白酶激活受体-2激活剂，酰胺

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9292 mL

9.6458 mL

19.2916 mL

5 mM

0.3858 mL

1.9292 mL

3.8583 mL

10 mM

0.1929 mL

0.9646 mL

1.9292 mL

MB3313

Z-VAD-FMK

Z-VAD-FMK

187389-52-2

AC480 (BMS-599626)是一种选择性的，高效效的HER1和HER2抑制剂，IC50分别为20 nM和30 nM。比对HER4效果强8倍左右，而比对VEGFR2， c-Kit， Lck， MET等的作用强100倍以上。

特性

BMS-599626是口服生物有效性的人表皮生长因子受体 (HER) 激酶HER1/HER2选择性抑制剂。

靶点

体外研究

BMS-599626选择性抑制重组HER1和HER2激酶的酶活性， IC50 分别为20 nM和 30 nM。 此外, BMS-599626也抑制相关受体HER4, 但是抑制效果低点(IC50为190 nM)。BMS-599626定义为HER1的ATP竞争性抑制剂，HER2的ATP非竞争性抑制剂，Ki 分别为 2 nM 和 5 nM。BMS-599626 抑制表达高水平HER1 和/或HER2的肿瘤细胞增殖，包括Sal2, BT474, N87, KPL-4, HCC202, HCC1954, HCC1419, AU565, ZR-75-30, MDA-MB-175, GEO, 和PC9细胞，IC50分别为0.24 μM, 0.31 μM, 0.45 μM, 0.38μM, 0.94 μM, 0.34 μM, 0.75 μM, 0.63 μM, 0.51 μM, 0.84 μM, 0.90 μM 和0.34 μM。BMS-599626不会显著抑制不表达HER1或 HER2的 卵巢肿瘤细胞系A2780 和 MRC5成纤维细胞增殖。最新研究显示BMS-599626通过促进周期再分配和抑制DNA修复，而显著增强 表达EGFR和Her2的 HN-5细胞的放射敏感性。

体内研究

在体内, BMS-599626 按60 mg/kg 到 240 mg/kg剂量范围口服处理给药，抑制 Sal2 肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，作用于人乳腺癌KPL-4移植瘤，具有有效的抗癌活性，KPL-4移植瘤的最大耐受剂量为180 mg/kg, 作用于其他HER扩增的移植瘤模型和其他过量表达HER1的移植瘤模型，具有相似的抗癌活性。

TAK-285

MB3984

ARRY-380

MB3953

CP-724714

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8848 mL

9.4242 mL

18.8484 mL

5 mM

0.3770 mL

1.8848 mL

3.7697 mL

10 mM

0.1885 mL

0.9424 mL

1.8848 mL

50 mM

0.0377 mL

0.1885 mL

0.3770 mL

蛋白激酶实验1:
Sf9昆虫细胞中，HER1, HER2, 和HER4的整个细胞质序列表达作为重组蛋白。HER1 和HER4表达作为与谷胱甘肽-S-转移酶结合的融合蛋白，然后通过在谷胱甘肽-S-琼脂糖凝胶上进行亲和层析而纯化。 HER2亚克隆进 pBlueBac4 载体中，使用内部蛋氨酸密码子（M687）起始翻译，表达作为无标记的蛋白。使用在含0.1 mol/L NaCl的buffer中平衡的DEAE-琼脂糖柱，进行层析分离截断的HER2蛋白，然后使用含 0.3 mol/L NaCl的buffer洗脱重组蛋白。为了进行HER激酶检测，反应体积为50 μL，含 10 ng 谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白或150 ng 部分纯化的HER2。混合物也含 1.5 μM聚(Glu/Tyr) (4:1), 1 μM ATP, 0.15 μCi [γ-33P]ATP, 50 mM Tris-HCl (pH 7.7), 2 mM DTT, 0.1 mg/mL 牛血清蛋白，和10 mM MnCl2。反应在 27oC下进行1小时，然后加入10 μL 终止液 (2.5 mg/mL 牛血清蛋白和0.3 mol/L EDTA)终止反应, 随后加入 108-μL 3.5 mM ATP 和5%三氯乙酸的混合物。使用Filtermate收集器使酸不溶性蛋白覆盖到GF/C Unifilter 板上。 通过液体闪烁计数器测定放射性磷酸进入聚(Glu/Tyr) 底物的渗透率。通过非线性回归分析测定抑制激酶活性百分数，数据表达为抑制 达50% 时所需的抑制浓度(IC50)。数据采用三次测定的平均值。使用聚(Glu/Tyr)作为底物，检测所有其他酪氨酸激酶。在含不同浓度ATP和BMS-599626的反应混合物中测定HER1和HER2的抑制动力学。

细胞实验

• Cell lines: Sal2, BT474, N87, KPL-4, HCC202, HCC1954, HCC1419, AU565, ZR-75-30, MDA-MB-175, GEO, PC9, A2780 和MRC5
• Concentrations: 0 到10 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: 细胞维持在含10%胎牛血清，100单位/mL青霉素, 和100 μg/mL 链霉素的RPMI 1640 培养基上。细胞按每孔 1,000个细胞接种在96孔板上，培养24小时，然后加入 BMS-599626。BMS-599626在培养基中稀释，确保DMSO 终浓度不超过1%。加入BMS-599626后，细胞再培养72小时，通过测量MTT染料及 CellTiter96 试剂盒的转化率而测定细胞活力。有些细胞系,在MTT染料代谢和细胞数之间没有关系， 通过胸甘渗透检测实验测量这些细胞系的增殖。细胞接种在 96孔板上，使用BMS-599626处理。 在温育72小时末期, 使用[3H]胸甘(0.4 μCi/每孔) 对细胞进行脉冲处理，进行3小时，然后收集。使用2.5%胰蛋白酶在37oC下消化细胞 10分钟，然后使用 Packard Filtermate收集器和GF/C Unifilter板进行过滤收集。通过液体闪烁计数法测定放射性胸甘渗透进核酸的量。

动物实验

• Animal Models: 携带SAL2小鼠唾液腺肿瘤, N87人胃癌 , BT474 人乳腺癌, A549非小细胞肺癌, 和GEO人结肠癌的雌性无胸腺裸鼠
• Formulation: BMS-599626溶于丙二醇/水(50:50)的混合溶液中
• Dosages: ≤240 mg/kg
• Administration: 口服处理