RI-1是RAD51抑制剂，IC50为5至30 µM。

特性

A selective recombinant RAD51 protein inhibitor discovered in 2012. Valuable tool for mechanistic studies of DNA repair and potential for use in many cancers.

靶点

体外研究

RI-1通过直接和特异破坏HsRAD51和抑制RAD51，形成对单链DNA细丝的能力，提高细胞对DNA损伤的敏感性。此外，在所有三种癌细胞株（HeLa细胞，MCF-7和U2OS）中，RI-1单独产生单剂毒性，LD50值在20-40微米范围内。RI-1减少了在G2期细胞的γ-H2AX灶，并导致在辐射6小时后未修复DNA双链断裂的升高。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7654 mL

13.8271 mL

27.6541 mL

5 mM

0.5531 mL

2.7654 mL

5.5308 mL

10 mM

0.2765 mL

1.3827 mL

2.7654 mL

50 mM

0.0553 mL

0.2765 mL

0.5531 mL

DNA结合检测:
所有反应均在黑色非结合性聚苯乙烯384孔板中进行，反应体积为30-100微升。纯化的DNA链交换的蛋白质和化学化合物预先在室温下孵育5分钟；然后进一步在37 ℃下孵育30分钟，使用100nM的单链DNA底物，它由在5’末端Alexa 488标签的45 -聚体的多-dT（合成并通过综合的DNA技术进行纯化）组成。反应在20 mM HEPES （pH值7.5）， 10毫摩尔氯化镁，0.25 μM BSA，2％甘油，30 mM氯化钠，4％DMSO和2毫摩尔ATP中进行。有些条件包括DTT或TCEP （三（2-羧乙基）膦）所指示。DNA结合是在Safire2酶标仪中测量荧光偏振（FP），使用以下设置：激发470 ± 5 nm，发射530 ± 5 nm，10测/孔，Z轴高度和G因子从对照孔自动校准。显示误差棒表示标准偏差。涉及蛋白质浓度的滴定实验中，数据拟合到该帐户用于协同性质由重组酶蛋白与DNA结合的方程式。对于涉及RI- 1的滴定实验中，蛋白质浓度为在不存在RI- 1得到的FP信号的〜80％的饱和度。

细胞实验：

• Cell lines: HeLa, MCF-7和U2OS细胞
• Concentrations: ~35 μM
• Incubation Time: 24 小时
• Method: 细胞毒性是通过克隆形成能力的损失来确定。实验一式三份进行。结晶紫染色的菌落用CCD照相机成像，并使用NIH图像软件计数。误差线表示标准误差

Deforolimus (Ridaforolimus MK-8669)是选择性的mTOR抑制剂，IC50为0.2 nM;但没分类为一种前体药物，抑制mTOR信号通路及与FKBP12结合与Rapamycin相似。

靶点

mTOR

IC50

0.2 nM

体外研究

使用Deforolimus处理HT-1080细胞，抑制S6和4E-BP1磷酸化, 这种作用存在剂量依赖性，IC50分别为0.2 nM和5.6 nM, EC50分别为0.2 nM 和1.0 nM, 且导致细胞尺寸降低，G1期细胞增多,和抑制葡萄糖摄取，EC50为0.1-1 nM。Deforolimus作用于一组细胞系，具有显著抗增殖活性，EC50为0.2-2.3 nM。Deforolimus 有效且选择性抑制VEGF产量，这种作用存在剂量依赖性， EC50为~0.1 nM。Deforolimus作用于人NSCLC细胞系（除了 H157细胞），显著抑制细胞生长，IC30为2.45-8.83 nM,而作用于H157细胞时，IC30 >20 nM。2.8-5.9 nM Deforolimus处理A549, H1703和H157细胞（除了表达mTORC1耐药变异的H1666），使 p70S6KThr389去磷酸化,且作用于A549和H1703细胞，提高pAKTser473和pAKTThr308磷酸化水平。Deforolimus和MEK抑制剂CI-1040或PD0325901 联用处理人肺癌细胞系，具有协同作用，这种作用存在剂量依赖性，这种作用与细胞增殖受抑制而不是细胞死亡增多相关，处理24小时后，抑制40%核糖体合成，且使多核糖体/染色单体比例下降。

体内研究

Deforolimus处理携带PC-3 (前列腺), HCT-116 (结肠), MCF7 (胸腺), PANC-1 (胰腺)或A549 (肺) 移植瘤的小鼠，具有显著抗癌效果，这种作用存在剂量依赖性，且作用于SK-LMS-1移植瘤，抑制mTOR信号。

AZD8055

MB1596

BEZ235 (Dactolisib)

MB1197

Rapamycin(Sirolimus)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.0099 mL

5.0494 mL

10.0989 mL

5 mM

0.2020 mL

1.0099 mL

2.0198 mL

10 mM

0.1010 mL

0.5049 mL

1.0099 mL

50 mM

0.0202 mL

0.1010 mL

0.2020 mL

激酶实验:
用浓度不断提高的 Deforolimus (0-100 nM)处理HT-1080细胞2小时，然后收集。在变性裂解buffer中抽屉细胞裂解液, 在SDS-PAGE上分析，然后转移到PVDF膜上。阻断后,膜和一抗在室温下温育1小时，随后和适当的HRP联合二抗再温育1小时。使用增强化学荧光法，及X-光片进行曝光自显影，而测定免疫蛋白。通过抑制磷酸化的核糖体蛋白S6(p-S6)和4E-BP1(p-4E-BP1)水平而测定IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: Colo205, H1755, H1395, H1666, A549, H157,和H1703
• Concentrations: 溶于乙醇,终浓度为1 μM
• Incubation Time: 72-120小时
• Method: 细胞按2到3×104/mL接种, 2小时后加入梯度稀释的Deforolimus，结果至少三组细胞倍增(72-120小时)。使用CellTiter 96 AQueous 非放射性增殖实验和Sulforhodamine B实验测定Deforolimus作用效果。对于Deforolimus，增长效应被描述为IC30，因为Rapamycin和其衍生物不显著抑制细胞增殖。

动物实验：

• Animal Models: 皮下移植PC-3, A549, HCT-116, MCF7, PANC-1和 SK-LMS-1肿瘤的雄性和雌性无胸腺NCr-nu小鼠。
• Formulation: 溶于乙醇 ,然后在4% 乙醇, 5% Tween-80, 和5% 丙二醇中稀释
• Dosages: ~10 mg/kg
• Administration: 腹腔注射