Roflumilast 是一种选择性的PDE4抑制剂，无细胞试验中IC50为0.2-4.3 nM。

靶点

体外研究

在体外实验中，Roflumilast具有抗炎和免疫调节活性。在人类嗜中性粒细胞中，Roflumilast抑制LTB4合成，IC50 是 2 nM。在中性粒细胞中和酸性粒细胞中，Roflumilast抑制fMLP刺激的ROS形成，IC35 分别是 4 nM和7 nM。在单核细胞中，Roflumilast抑制LPS诱导的TNF-α合成，IC40是 21 nM。在源于单核细胞的树突状细胞中，Roflumilast抑制LPS诱导的TNF-α合成，IC20 是 5 nM。Rolfumilast抑制抗CD3 和抗CD28抗体激活的CD4+ T细胞，IC30 是7 nM。Rolfumilast抑制抗CD3 和抗CD28抗体激活的CD4+ T细胞中IL-2, IL-4, IL-5, 以及 IFN-v的合成，IC20是 1 nM，IC30 是 7 nM，IC25是 13 nM，IC35 是8 nM。

体内研究

在动物模型中，Roflumilast对与COPD相关的肺炎具有抵抗活性。 在暴露于烟草7个月的小鼠肺中，Roflumilast (5 毫克/千克/天)诱导中性粒细胞，巨噬细胞，树突状细胞，B细胞，CD4+ T 细胞, CD8+ T细胞分别减少78%, 82%, 48%, 100%, 98% 和88%。Roflumilast是一种有效的肺部纤维化抑制剂。Bleomycin 处理以后，Roflumilast剂量依赖性降低肺部总羟脯氨酸，5 毫克/千克/天的剂量造成47%的抑制，同时降低肺部αI(I)胶原蛋白转录和纤维化损伤。在体内实验中，Roflumilast降低氧化压力。Roflumilast (5 mg/kg/day)适度降低Bleomycin气管内给药14天后小鼠BAL体液中过氧化氢脂质的增高。

Roflumilast(标准品)

MB25568

罗氟司特-d3

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4801 mL

12.4005 mL

24.8010 mL

5 mM

0.4960 mL

2.4801 mL

4.9602 mL

10 mM

0.2480 mL

1.2400 mL

2.4801 mL

50 mM

0.0496 mL

0.2480 mL

0.4960 mL

通过一些修改确定PDE活性。测定混合物含有50mM Tris（pH 7.4），5mM MgCl2,0.5μMcAMP或cGMP，和[3H] cAMP或[3H] cGMP（约30,000cpm /测定），指示浓度的抑制剂和等分试样。酶溶液的最终测定体积为200μL。将化合物的储备溶液在上述Tris缓冲液中以1：100（v / v）稀释;在1％（v / v）DMSO / Tris缓冲液中制备适当的稀释液，在测定中以1：2（v / v）稀释，以在DMSO浓度为0.5％时获得所需的抑制剂终浓度（v / v）。 DMSO本身不影响PDE活动。在37℃预温育5分钟后，通过加入底物（cAMP或cGMP）开始反应，并将测定在37℃再温育15分钟。然后加入50μL的0.2N HCl以终止反应，并将测定在冰上放置约10分钟。在与25μg5′-核苷酸酶（Crotalus atrox蛇毒）在37℃温育10分钟后，将测定加载到QAE Sephadex A-25（在Poly-Prep色谱柱中的1mL床体积）上。用2mL 30mM甲酸铵（pH6.0）洗脱柱子，计算洗脱液的放射性。对于低于总放射性的5％的空白值（在变性蛋白质存在下测量）校正结果。水解的环核苷酸的量不超过原始底物浓度的30％。

动物实验

罗氟司特悬浮于4％甲基纤维素和1.3％（小鼠）。 
小鼠 
使用WT或pIgR – / – 小鼠。 对于使用罗氟司特的研究，每天一次，每周5天，通过口服强饲法给予200μL的0.5mg / mL罗氟司特或载体的悬浮液（4％甲基纤维素，1.3％PEG400和5μg药物/ mg动物重量），持续时间为 治疗。 通过口服管饲法每天用100μg罗氟司特（5μg/ g）或载体（4％甲基纤维素，1.3％PEG400）处理小鼠3个月，并在12月龄时收获肺。

Rolipram 是一种选择性的磷酸二酯酶 PDE4 抑制剂，抑制 PDE4A，PDE4B 和 PDE4D，的 IC50 分别为 3 nM，130 nM 和 240 nM。

靶点

IC50: 3 nM (PDE4A), 130 nM； (PDE4B), 240 nM (PDE4D)

体内研究

PDE4选择性抑制剂Rolipram同样抑制免疫修饰的PDE4B和PDE4D活性，IC50约为50。分别为130 nM和240 nM。相反，罗利普兰抑制免疫蛋白酶化的PDE4A活性，IC50在3 nM左右显著降低。Rolipram以剂量依赖性的方式增加U937细胞中cAMP-response-element-binding protein (CREB)的磷酸化，这意味着存在高亲和力（IC50约1nM）和低亲和力（IC50约120nM） 组件。Rolipram剂量依赖性地以简单单调的方式抑制ifn -γ刺激的p38 MAPK磷酸化，IC50约为50。 290 nM。 咯利普兰是一种选择性PDE4抑制剂，可抑制所有PDE4同种型A，B，C和D.咯利普兰以剂量依赖性方式抑制LPS诱导的TNF产生（IC50 25.9 nM），并且在2μM药物浓度下观察到最大/次最大抑制 在J774细胞中。

体外研究

WT小鼠腹腔巨噬细胞（PM）中的脂多糖（lps）可诱导肿瘤坏死因子（tnf）的mRNA和蛋白表达，而Rolipram明显抑制了肿瘤坏死因子（tnf）的表达（分别为74%和63%）。与野生型小鼠相比，MKP-1（-/-）小鼠在PM中脂多糖诱导的TNF生成增强，这与已发表的结果一致。有趣的是，在MKP-1（-/-）小鼠的PM中，rolipram对TNF mRNA和蛋白质表达的抑制作用明显减弱，没有达到统计学意义。反复服用罗力普仑（1.25 mg/kg，i.p.）可减少学习性无助大鼠的逃逸失败次数。

Apremilast (CC-10004)

MB4342

GSK256066

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.6319 mL

18.1594 mL

36.3187 mL

5 mM

0.7264 mL

3.6319 mL

7.2637 mL

10 mM

0.3632 mL

1.8159 mL

3.6319 mL

50 mM

0.0726 mL

0.3632 mL

0.7264 mL