Gandotinib (LY2784544)是一种有效的JAK2抑制剂，IC50为3 nM，作用于JAK2V617F有效，比作用于JAK1和JAK3选择性高8和20倍。

靶点

体外研究

LY2784544也抑制IL-3激活的野生型JAK2，IC50为2.26 µM。在增殖实验中，LY2784544 作用于JAK2 V617F驱动的细胞中，具有抗增殖活性，IC50为 68 nM,而作用于野生型JAK2驱动的细胞时，IC50为1356 nM，作用于JAK3驱动的细胞时，IC50为940 nM。

体内研究

LY2784544 显著抑制Ba/F3-JAK2 V617F-GFP 移植瘤中的STAT5磷酸化，阈值的有效剂量50 (TED50) 为 12.7 mg/kg。LY2784544 作用于JAK2 V617F诱导的MPN模型，也降低Ba/F3-JAK2 V617F-GFP肿瘤负担，在口服处理后，TED50为13.7 mg/kg。LY2784544 口服作用于SCID小鼠脾脏，对CD71/Ter119 阳性红系祖细胞没有作用效果。

AZD1480

MB3926

Baricitinib (LY3009104, INCB028050)

MB4568

BMS-911543

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1279 mL

10.6397 mL

21.2793 mL

5 mM

0.4256 mL

2.1279 mL

4.2559 mL

10 mM

0.2128 mL

1.0640 mL

2.1279 mL

50 mM

0.0426 mL

0.2128 mL

0.4256 mL

GANT61 抑制GLI1及GLI2诱导的转录，抑制hedgehog，IC50为5 μM,选择性作用于其他通路, 如TNF和糖皮质激素受体基因的转录。

靶点

GLI1(HEK293T cells expressing GLI1)

IC50

5 μM

体外研究

GANT61抑制GLI1及GLI2诱导的转录。GANT61抑制GLI1的DNA结合能力。GANT61抑制hedgehog信号，IC50为5 μM，比作用于其他通路选择性高，如TNF信号/NFκB激活，糖皮质激素受体基因转录，及Ras-Raf-Mek-Mapk级联。GANT61在体外有效抑制肿瘤细胞增殖，这种作用存在GLI依赖性。GANT61作用于慢性淋巴细胞性白血病细胞（CLL），而非正常的B淋巴细胞，诱导细胞凋亡。GANT61作用于人结肠癌细胞系，具有强大的细胞毒性，且废除集落生成。GANT61作用于人结肠癌细胞系的早S期阶段，抑制DNA复制，产生涉及ATM-Chk2信号轴的DNA损伤信号，且诱导细胞死亡。GANT61 (30 μM)作用于急性髓系白血病（AML）细胞，导致生长停滞和凋亡。

体内研究

GANT61处理注射GLI1-阳性22Rv1前列腺癌细胞的裸鼠，诱导肿瘤生长衰退，直到观察不到明显的肿瘤。GANT61按50 mg/kg剂量口服饲喂处理携带SK-N-AS神经母细胞瘤移植瘤的裸鼠，在实验第12天显著抑制肿瘤生长，与对照组相比，肿瘤体积减少63％。

MK-4101

MB6516

Cyclopamine

MB5146

维莫德吉(GDC0449)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3277 mL

11.6387 mL

23.2775 mL

5 mM

0.4655 mL

2.3277 mL

4.6555 mL

10 mM

0.2328 mL

1.1639 mL

2.3277 mL

50 mM

–

–

–

双荧光素酶含量:
转染GLI1表达质粒的HEK293细胞与报告质粒12×GliBSLuc 和R-Luc 一起置于10 cm板上（实验第0天）。24小时后，细胞接种按每孔15,000个细胞的密度接种在白色透明底的96孔板中。细胞粘附，加入溶于DMSO(DMSO终浓度为0.5% ) 的终浓度为10 μM的化合物加（实验第1.5天）。细胞再生长24小时，随后裂解，然后使用双荧光素酶试剂盒进行分析。

细胞实验：

• Cell lines: PANC1 或 22Rv1
• Concentrations: ~5 μM
• Incubation Time: 48 小时
• Method: 进行BrdU渗透实验。在有5 μM 实验化合物 (或 DMSO) 存在下，亚融合的细胞在含FBS(2.5%)的白色透明底的96孔板上生长48小时。随后，使用BrdU对细胞进行标记2小时，混合，然后分析。

动物实验：

• Animal Models: 携带22Rv1细胞移植瘤的BALB/c裸鼠
• Formulation: 玉米油：乙醇，4:1
• Dosages: 50 mg/kg
• Administration: 皮下注射

Taselisib (GDC 0032)是一种有效，下一代的β亚型PI3K抑制剂，作用于PI3Kα/δ/γ， IC50分别为0.29 nM/0.12 nM/0.97nM，比作用于PI3Kβ选择性高10倍以上。

靶点

体内研究

GDC-0032是口服生物有效的，选择性I型PI3Kα，δ和γ亚型抑制剂，抑制PI3Kβ亚型比抑制PI3Kα亚型效果低30倍。临床前期数据表明，GDC-0032作用于PI3Kα亚型(PIK3CA)突变型和HER2扩增的肿瘤细胞系，活性增加。GDC-0032抑制MCF7-neo/HER2 细胞增殖，IC50为2.5 nM。

体外研究

GDC-0032药代动力学是剂量呈比例的，与时间无关的，平均t1/2为40小时。GDC-0032与Fulvestrant 联用，增强Fulvestrant活性，导致肿瘤衰退，延迟肿瘤生长（肿瘤生长抑制率（TGI）为91％）。此外，GDC-0032与Tamoxifen联用，增强Tamoxifen在体内的疗效（GDC-0032的TGI为102％）。

VS-5584

MB5319

XL-147

MB5695

NVP-BKM120

MB3890

PF-04691502

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1714 mL

10.8571 mL

21.7141 mL

5 mM

0.4343 mL

2.1714 mL

4.3428 mL

10 mM

0.2171 mL

1.0857 mL

2.1714 mL

体外生化与细胞活性表征:
通过荧光偏振检测测量I型PI3K亚型的酶活性，监测产物3,4,5-肌醇三磷酸分子的形成，因为它与荧光标记的PIP3竞争性结合到GRP-1 pleckstrin同源结构域。磷脂酰肌醇-3 -磷酸产物增加，导致荧光偏振信号减少，标记的荧光GRP-1蛋白结合位点被取代。I型PI3K亚型表达和纯化，作为异二聚体重组蛋白。购买Tetramethylrhodamine-标记的 PIP3(TAMRA-PIP3), di-C8-PIP2, 和PIP3 检测试剂。在10 mM Tris (pH 7.5), 25 μM ATP, 9.75 μM PIP2, 5%甘油，4 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0.05% (v/v) Chaps, 1 mM 二硫苏糖醇, 和2% (v/v) DMSO 60 ng/mL存在时，检测初始速率条件下PI3Kα。在25°C进行30分钟, 然后加入9 mM EDTA, 4.5 nM TAMRA-PIP3,和4.2 μg/mL GRP-1检测蛋白终止反应，在Envision酶标仪上读取荧光偏振。根据四参数方程拟合剂量-反应曲线，计算IC50值。每个值取三组实验的平均值，标准偏差小于几何平均值。

动物实验

• Animal Models: MCF7-neo/Her2 移植瘤模型
• Formulation: 0.5% 甲基纤维素和0.2% Tween-80
• Dosages: 1.4, 2.8, 5.8, 11.25, 或 22.5 mg/kg
• Administration: 口服处理

GDC-0084是一种能透过血脑屏障的PI3K和mTOR的抑制剂。

靶点

体外研究

在微粒体和干细胞培养中，GDC-0084具有良好的人类代谢稳定性，能在正常脑组织中抑制PI3K通路中的关键信号pAKT。GDC-0084抑制多种神经胶质瘤细胞的增殖，IC50范围为0.3-1.1 μM。GDC-0084与血浆蛋白质的结合率比较低，在CD-1小鼠血浆中游离分数为29.5±2.7（%，n=3，5μM），而在CD-1小鼠中与脑组织结合率较高，游离分数为6.7%(±1; n=3)。

体内研究

在小鼠脑中，GDC-0084显著地抑制PI3K信号通路，造成高达90%的pAkt信号受到抑制。GDC-0084 在U87和GS2原位移植瘤模型中，分别抑制了70%和40%的肿瘤生长。其在大脑和颅内肿瘤中的广泛分布使得它成为非常有效的PI3K信号通路抑制剂。目前，GDC-0084的疗效正处于临床患者检测评估阶段，暴露的耐受剂量与在小鼠模型中的有效剂量一致。

BGT226 (NVP-BGT226)

MB5532

BYL719

MB3572

CAY10505

MB3888

BGT226 (NVP-BGT226)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6149 mL

13.0746 mL

26.1493 mL

5 mM

0.5230 mL

2.6149 mL

5.2299 mL

10 mM

0.2615 mL

1.3075 mL

2.6149 mL

50 mM

–

–

–

• Cell lines: 狗肾传代细胞(MDCK)（MDR1-MDCKI cells）
• Concentrations: 5 μM
• Incubation Time: 2 h
• Method: 将细胞接种于24孔板，接种密度为1.3×105cells/ml。按不同的方向加入5 μM GDC-0084（从顶端到基地侧或从基地侧到顶端）。化合物溶于transport buffer中，buffer中含有Hanks’ balanced salt solution和10 mM HEPES。Lucifer Yellow 被用作细胞旁途径和单层完整标记。应用LC-MS/MS分析来测定在供体和受体部分GDC-0084的浓度。加入化合物2小时后，分别在两个加药方向计算表观渗透系数(Papp)。

动物实验：

• Animal Models: Sprague−Dawley雄性大鼠或CD-1雌性小鼠
• Formulation: 60% PEG400/10% 乙醇(i.v.)；0.5% 甲基纤维素/0.2% Tween 80（p.o.）
• Dosages: 1 mg/kg（i.v.）;5或25 mg/kg(p.o.)
• Administration: 静脉注射或口服

产品描述

GDC-0152是有效的XIAP-BIR3, ML-IAP-BIR3, cIAP1-BIR3和cIAP2-BIR3 拮抗剂，Ki分别为28 nM, 14 nM, 17 nM 和 43 nM, 对cIAP1-BIR2 和 cIAP2-BIR2具有低的亲和力。

靶点

IC50

体外研究

体内研究

溶解性

DMSO 99 mg/mL，水 3 mg/mL，乙醇 99 mg/mL

稳定性

2年 -20°C粉状，6月-80°C溶于DMSO

特征

Pictilisib (GDC-0941) 是一种有效的PI3Kα/δ抑制剂，在无细胞试验中IC50为 3 nM，对p110β (11倍)和p110γ (25倍)具有适度的选择性。

靶点

体外研究

GDC-0941也等效作用于PI3Kα和 PI3Kδ和PI3Kα突变型E545-K和H1047-R,也选择性作用于PI3Kβ(10倍)和 PI3Kγ(25倍), 选择性更高地作用于PI3K II, III, 和IV类成员，包括, C2β, Vps34, DNA-PK和mTOR。GDC-0941 作用于U87MG, PC3, 和 MDA-MB-361 细胞，有效抑制Akt磷酸化，IC50分别为46 nM, 37 nM,和 28 nM。GDC-0941抑制U87MG, A2780, PC3, 和MDA-MB-361细胞增殖，IC50分别为 0.95 μM, 0.14 μM, 0.28 μM, 和0.72 μM。GDC-0941处理，有效抑制对Trastuzumab敏感和不敏感的HER2扩增细胞增殖，IC50为149-944 nM,与 Trastuzumab敏感性无关。GDC-0941抑制含PIK3CA突变的HER2扩增的细胞增殖，IC50<500 nM, 且有效抑制抗trastuzumab 的HER2 扩增乳腺癌细胞增殖和活力。GDC-0941 显著抑制HCT116, DLD1和 HT29细胞生长，GI50分别为1081 nM, 1070 nM 和157 nM。

体内研究

在微粒体中，GDC-0941仅有有限的代谢，其口服生物利用度为78%。GDC-0941 每天按 75 mg/kg剂量处理携带人U87MG 恶性胶质移植瘤的雌性NCr无胸腺小鼠，显著抑制生长，肿瘤生长抑制率为 83%。GDC-0941 每天按 150 mg/kg剂量口服处理携带HER2扩增的抗Trastuzumab的MDA-MB-361.1移植瘤 的小鼠，抑制肿瘤生长，且显著延迟肿瘤衰退，与肿瘤中强诱导型凋亡相关。GDC-0941 每天按75 mg/kg剂量处理携带自发性B细胞滤泡性淋巴瘤的PTEN+/-LKB1+/hypo小鼠，持续2周，诱导肿瘤体积下降~40%，伴随着AKT, S6K 和SGK(血清和糖皮质激素蛋白激酶)蛋白激酶的磷酸化被切除。GDC-0941抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡和抑制中心母细胞数。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9469 mL

9.7344 mL

19.4689 mL

5 mM

0.3894 mL

1.9469 mL

3.8938 mL

10 mM

0.1947 mL

0.9734 mL

1.9469 mL

50 mM

0.0389 mL

0.1947 mL

0.3894 mL

闪烁接近检测:
使用p85α调节亚基，使重组人PI3Kα, PI3Kβ, 和PI3Kδ在 Sf9 杆状病毒系统中共表达，在谷胱甘肽-琼脂糖凝胶上进行亲和层析而纯化GST-融合蛋白。重组人 PI3Kγ表达作为单体 GST融合，也想上述相似方法纯化。GDC-0941 溶于DMSO，加到含200 μg硅酸钇(Ysi) 聚赖氨酸SPA 磁珠, 4 mM MgCl2, 1 mM 二硫苏糖醇 (DTT), 1 μM ATP, 0.125 μCi [γ-33P]-ATP, 和4% (v/v) DMSO的20 mM Tris-HCl (pH 7.5)上，总体积为 50 μL。PI3Kα (5 ng), PI3Kβ(5 ng), PI3Kδ(5 ng), 或PI3Kγ(5 ng)的重组GST-融合 ，加到实验混合物中，开始激酶反应。在室温下温育1小时后, 加入150 μL PBS终止反应。混合物在2000 rpm 转速下离心2分钟，然后使用Wallac Microbeta计数器读数。在 MDL Assay Explorer系统中使用S型，剂量-反应曲线，计算进行至少2次独立重复实验，取平均值，作为IC50值。

细胞实验

• Cell lines: SKBR-3, BT474-M1, AU-565, HCC-1419, ZR75-30, KPL-4, JIMT-1, BT474-EEI, HCC-1954, MCF-7, CALU-3, SKOV-3, 和MKN-7
• Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为~10 μM
• Incubation Time: 48,和72小时
• Method:

使用不同浓度 GDC-0941处理细胞48,和 72小时。通过CellTiter-Glo Luminescent细胞活性检测实验测定细胞增殖/活力。通过Western Blot分析pAKT (Ser473), cleaved caspase-3, 和cleaved PARP通过 Caspase-Glo 3/7实验和细胞死亡检测 ELISAplus 实验分别测定caspase 3/7活性, 和凋亡。

动物实验

• Animal Models: 移植MDA-MB-361.1细胞的NCR裸鼠, 皮下移植BT474-M1 细胞的SCID, C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid 小鼠
• Formulation: 溶于10% DMSO, 5% Tween-20, 85% 水
• Dosages: ~150 mg/kg/day
• Administration: 口服饲喂

Cobimetinib (GDC-0973, RG7420)是一种有效的高选择性MEK1抑制剂，IC50 为 4.2 nM。其对MEK1的选择性比对MEK2高100倍以上，对其他很多丝氨酸-苏氨酸和酪氨酸激酶没有显著抑制作用。

靶点

体外研究

Cobimetinib对一组广泛类型的肿瘤细胞的生长表现出强烈的抑制活性，特别是对BRAF或KRAS突变型癌细胞系。结合GDC-0941，GDC-0973在888MEL和A2058细胞中导致生存能力降低，通路抑制，以及细胞凋亡增加。GDC-0973和vemurafenib联合给药显著增加所有BRAFV600E系中细胞膜上减少的GLUT-1水平。

体内研究

在负荷BRAFV600E和KRAS突变型肿瘤的小鼠体内，Cobimetinib (10 mg/kg, p.o.)产生抗肿瘤作用，结合GDC-0973和GDC-0941能够提高疗效。在负荷耐药的A375异种移植物小鼠体内，GDC-0973与GDC-0941结合诱导己糖激酶II，c-RAF，Ksr 和p-MEK蛋白质的水平减少。

Binimetinib, ARRY-438162

MB5452

PD184352 (CI-1040)

MB4068

PD318088

MB4064

Pimasertib (AS-703026)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8821 mL

9.4107 mL

18.8214 mL

5 mM

0.3764 mL

1.8821 mL

3.7643 mL

10 mM

0.1882 mL

0.9411 mL

1.8821 mL

50 mM

0.0376 mL

0.1882 mL

0.3764 mL

• Animal Models: 负荷Molm-13，Molm-16，MX-1，DLD-1，HCT-116，LoVo，FaDu，537MEL，A2058，A2058-X1，A375，A375.X1，A427，A549，Calu-6，EBC-1，NCI-H441，NCI-H2122，NCI-H460，NCI-H520.X1，SKOV-3，KP4-X1.1，MiaPaCa-2，22Rv1，DU-145.X1，S，NCI-H69 异种移植瘤的小鼠
• Formulation: —
• Dosages: 10 mg/kg
• Administration: p.o.

Apitolisib (GDC-0980, RG7422)是一种有效的，I型PI3K抑制剂，作用于PI3Kα/β/δ/γ，无细胞试验中IC50分别为5 nM/27 nM/7 nM/14 nM，也是mTOR抑制剂，无细胞试验中Ki为17 nM，比作用于其他PIKK家族激酶选择性高。Phase 2。

靶点

PI3Kα

PI3Kβ

PI3Kδ

PI3Kγ

mTOR

IC50

5 nM

27 nM

7 nM

14 nM

17 nM (Ki)

体外研究

GDC-0980对I类PI3K和mTOR激酶比对其他大多数激酶表现出有效的选择性抑制作用，对mTOR的Ki为17 nM，对PI3Kα，β，δ，和γ的IC50 分别为5 nM，27 nM，7 nM，和14 nM。在体外，GDC-0980显著抑制PC3和MCF7细胞的细胞增殖，IC50分别为307 nM和255 nM。一项最近的研究表明，GDC-0980通过抑制细胞周期进程，并诱导细胞凋亡降低癌细胞活性，在前列腺癌(IC50 < 200 nM 50%，<500 nM 100%)，乳腺癌(IC50 <200 nM 37%，<500 nM 78%) 和NSCLC(IC50 <200 nM 29%，<500 nM 88%)中具有最大效能，在胰腺癌(IC50 <200 nM 13%，<500 nM 67%) 和黑色素瘤细胞系(IC50 <200 nM 0%，<500 nM 33%)中效能较低。

体内研究

在PC-3和MCF-7 neo/HER2异种移植模型中，GDC-0980在1 mg/kg剂量下，通过引起肿瘤生长延迟，表现出显著的抗肿瘤活性。此外，GDC-0980导致肿瘤郁积或退化，最大耐受剂量为7.5 mg/kg。在小鼠体内，1 mg/kg GDC-0980静脉内给药导致低清除率(Clp: 9.2 mL/min/kg，Vss: 1.7 L/kg)。同时，以5 mg/kg的80% PEG400溶液，或50 mg/kg在0.5%甲基纤维素/0.2% Tween-80中以晶体悬浮液口服给药，具有良好的药代动力学参数。

特征

一种有效的，选择性的，口服生物可利用的 PI3Kα，β，δ，γ 和 mTORA 抑制剂。

PI-103

MB3867

PIK-75

MB3869

GSK2126458 (GSK458)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0056 mL

10.0281 mL

20.0562 mL

5 mM

0.4011 mL

2.0056 mL

4.0112 mL

10 mM

0.2006 mL

1.0028 mL

2.0056 mL

50 mM

–

–

–

酶活性:
I类PI3K亚型的酶活性使用荧光偏振试验测量，其监测产物3,4,5-三磷酸肌醇分子的形成，该产物与荧光标记的PIP3竞争性结合到GRP-1普列克底物蛋白同源域。磷脂酰肌醇酯-3-磷酸产物的增加，使标记的荧光从GRP-1蛋白结合位点被取代，从而导致荧光偏振信号减少。I类PI3K亚型以异二聚体重组蛋白表达并纯化。PI3K亚型在初速率条件下，在10 mM Tris (pH 7.5)，25 μM ATP，9.75 μM PIP2，5% 甘油，4 mM MgCl2，50 mM NaCl，0.05% (v/v) Chaps，1 mM 二硫苏糖醇，2% (v/v) DMSO存在下测定，各种亚型的浓度为: PI3Kα,β 为60 ng/mL；PI3Kγ为8 ng/mL；PI3Kδ 为45 ng/mL。测定在25°C下进行30分钟后，以终浓度为9 mM EDTA，4.5 nM TAMRA-PIP3，和4.2 μg/mL GRP-1检测蛋白质终止反应，然后在Envision酶标仪上读取荧光偏振数据。IC50s通过将剂量反应曲线拟合到4参数方程计算。人重组mTOR(1360−2549)在昆虫细胞中表达并纯化，使用Lanthascreen荧光能量共振转移法测定，其中重组绿色荧光蛋白(GFP)-4-EBP1的磷酸化使用铽标记的抗4-EBP1的磷酸-苏氨酸37/46抗体检测。反应通过ATP起始，在50 mM Hepes (pH 7.5)，0.25 nM mTOR，400 nM GFP-4E-BP1，8 μM ATP，0.01% (v/v) Tween 20，10 mM MnCl2，1 mM EGTA，1 mM 二硫苏糖醇，和1% (v/v) DMSO存在下进行。试验在初始速率于室温下进行30分钟，然后终止反应，在2 nM Tb-抗-p4E-BP1抗体和10 mM EDTA存在下检测产品。将剂量反应曲线拟合到竞争性紧密结合抑制的方程，表观Ki使用测定的6.1 μM ATP的 Km进行计算。

细胞实验：

• Cell lines: PC3 和 MCF7.1
• Concentrations: 0 到 10 μM
• Incubation Time: 72小时或 96小时
• Method: 抗增殖细胞试验使用PC3和MCF7.1人肿瘤细胞系进行。MCF7.1是体内挑选的细胞系，最初衍生自亲本人MCF7乳腺癌细胞系。细胞系在RPMI中于3°C，5% CO2中培养，并用10%胎牛血清，100 units/mL 青霉素，和100 μg/mL 链霉素，10 mM HEPES，和2 mM 谷氨酸盐增补。MCF7.1细胞或PC3细胞分别以1000细胞/孔或3000细胞/孔接种在384孔板的培养基中，培养过夜，再加入GDC-0980，使终DMSO浓度为0.5% v/v。MCF7.1细胞和PC3细胞分别培养3天和4天，然后加入CellTiter-Glo试剂，并使用Analyst酶标仪读取荧光。对于抗增殖试验，细胞生长抑制剂，比如aphidicolin，和细胞毒素剂，比如staurosporine，作为对照。剂量反应曲线拟合为4参数方程，相对的IC50s使用Assay Explorer软件计算。

动物实验：

• Animal Models: PC3 和 MCF7.1 细胞皮下注射到无胸腺 nu/nu(裸)小鼠的右右前肢
• Formulation: GDC-0980在0.5%甲基纤维素与0.2% Tween-80 (MCT)中溶解。
• Dosages: ≤7.5 mg/kg
• Administration: 口服给药

GDC-0994 是一种有效的，可口服的， 具有选择性的 ERK1/2 抑制剂, 其IC50分别为1.1 nM和0.3 nM。 Phase 1。

靶点

体外研究

GDC-0994有效抑制肿瘤细胞中磷酸-p90RSK。

体内研究

GDC-0994(口服)在体外癌症模型中引起显著的多重单剂量活性，包括KRAS突变型和 BRAF突变型人异种移植肿瘤的小鼠。在体内，GDC-0994 (口服)抑制ERK磷酸化和ERK介导的信号转导通路的激活，随后防止ERK依赖性肿瘤细胞增殖和存活。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2735 mL

11.3675 mL

22.7350 mL

5 mM

0.4547 mL

2.2735 mL

4.5470 mL

10 mM

0.2274 mL

1.1368 mL

2.2735 mL

50 mM

0.0455 mL

0.2274 mL

0.4547 mL