APY29, an ATP-competitive inhibitor, is an allosteric modulator of IRE1α which inhibits IRE1α autophosphorylation by binding to the ATP-binding pocket with IC50 of 280 nM. APY29 acts as a ligand that allosterically activates IRE1α adjacent RNase domain.

IC50 & Target

IC50: 280 nM (IRE1α)

体外

APY29 divergently modulates the RNase activity and oligomerization state of IRE1α. APY29 is exerting their opposing effects on RNase activity through the same binding site. APY29 divergently affects IRE1α oligomerization. APY29 demonstrates opposing dose-dependent effects on ER stress-induced activation of the RNase of endogenous IRE1α.

PD0325901

MB4496

Ouabain

MB5240

JNJ38877605

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0088 mL

15.0439 mL

30.0879 mL

5 mM

0.6018 mL

3.0088 mL

6.0176 mL

10 mM

0.3009 mL

1.5044 mL

3.0088 mL

50 mM

0.0602 mL

0.3009 mL

0.6018 mL

AR-A014418是一种ATP竞争性和选择性的GSK3β抑制剂，无细胞试验中IC50和Ki为104 nM和38 nM，而对被测试的其他26种激酶没有显著抑制作用。

特性

细胞渗透性GSK3选择性抑制剂。

靶点

体外研究

在3T3成纤维细胞中，AR-A014418抑制GSK3特定位点(丝氨酸396)τ蛋白磷酸化，其IC50 是2.7 μM，进而保护N2A细胞免遭抑制 PI3K/PKB信号通路引起的死亡。在海马切片中，AR-A014418抑制由β样淀粉肽诱导的神经退化。在NGP细胞和SH-5Y-SY细胞中，AR-A014418抑制神经内分泌标志物，抑制神经瘤细胞的生长。

体内研究

在SOD1蛋白G93A突变肌萎缩性脊髓侧索硬化症的小鼠模型中，腹腔注射AR-A014418 (0-4 mg/kg, i.p.)能够延长症状的发生，增加肌肉活力，减慢疾病发生。 此外，AR-A014418通过调节脊髓中的NMDA和代谢型受体信号通路和TNF-α 和 IL-1β的释放来发挥对小鼠乙酸和甲醛诱导的伤害感受的抑制作用。

AZD1080

MB4519

BIO-acetoxime

MB3793

GSK343

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.2435 mL

16.2174 mL

32.4349 mL

5 mM

0.6487 mL

3.2435 mL

6.4870 mL

10 mM

0.3243 mL

1.6217 mL

3.2435 mL

50 mM

0.0649 mL

0.3243 mL

0.6487 mL

GSK3闪烁迫近分析法:
竞争性实验是在干净底部的孔板中用10个不同的浓度梯度重复两次来测定的。 生物素标记的多肽biotin-AAEELDSRAGS(PO3H2)PQL以2μM的浓度加入到含有6单位的重组人GSK3（α 和β等量混合）12 mM MOPS，pH 7.0, 0.3 mM EDTA，0.01% β-mercaptoethanol，0.004% Brij 35，0.5% glycerol，和0.5 μg 牛血清蛋白/25 μl中孵育10-15分钟。在50mM Mg(Ac)2中加入0.04 μCi of [γ-33P]ATP和未标记的ATP，ATP的终浓度是1 μM，反应体积是25ul，使反应开始进行。使用不加多肽底物作为空白对照。 室温孵育20分钟以后，用含有5 mM EDTA，50 μM ATP，0.1% Triton X-100，以及 0.25 mg链霉亲和素包被具有35 pmol的结合能力的珠子来终止反应。6小时以后，用液体闪烁计数器测定放射性。用GraphPad Prism通过非线性回归来分析抑制曲线。

细胞实验

• Cell lines: N2A 细胞
• Concentrations: ~50 μM
• Incubation Time: 24小时
• Method:

细胞活性通过钙黄绿素和碘化吡啶摄入来测定。活细胞具有酯酶，能够将钙黄绿素摄入和排出，产生黄绿荧光。碘化吡啶只能被死细胞摄入，产生橘红色荧光。 简单的说，N2A细胞在体外培养2天，然后在AR-A014418或者载体(DMSO) 存在下用50 μM LY-294002处理24小时。然后，N2A细胞在2 μM PI 和1 μM钙黄绿素-AM存在下孵育30分钟。随后培养基用包含2 mM CaCl2的Hanks’缓冲盐溶液洗3次，细胞通过Zeiss Axiovert 135荧光显微镜进行观察。分析3个区域（随机挑选）至少3个不同实验中每孔的情况（大约300个细胞每个区域）。以PI染色阳性的细胞比上总的细胞的比值作为细胞死亡的百分比。在每次试验中，每次都是扣除空白对照中死亡的细胞数之后计算的。

动物实验

• Animal Models: 携带 G93A突变体人类SOD1的ALS小鼠模型。
• Formulation: 生理盐水
• Dosages: ~4毫克/千克
• Administration: 腹腔注射

TESTS

SPECIFICATIONS

RESULTS

Appearance

White to off white powder

Conforms

Solubility

10mg/ml,DMSO（ultrasonic）

Conforms

Purity(HPLC)

≥99%

99.84%

Conclusion

Passed

552.43

化学式

C28H24Cl2FN5O2

CAS号

1095253-39-6

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

100 mg/mL (181.01 mM)

Ethanol

100 mg/mL (181.01 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

ARQ621是一种变构选择性的Eg5 mitotic motor protein抑制剂。第1阶段。

靶点

体外研究

在体外实验中，ARQ 621对广谱人癌细胞系，包括结肠，肺，子宫内膜，膀胱，和血液肿瘤细胞系表现出抗肿瘤活性，而对造血细胞的细胞毒性显著降低。

体内研究

ARQ 621，作为一种新型临床期候选药物，抑制许多异种移植物在无胸腺小鼠体内的生长，比如胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌和卵巢癌，而不改变血液疾病。此外，在临床前小鼠疗效模型或在大鼠和狗体内的安全研究中表明，ARQ 621没有骨髓毒性。

ARRY-380是有效的，选择性HER2抑制剂，IC50为8 nM,等效作用于截短的p95-HER2,作用于HER2比作用于EGFR选择性高500倍。

靶点

HER2

p95-HER2

IC50

8 nM

7 nM

体外研究

ARRY-380是可用于口服的，生物有效性的选择性小分子抑制剂，有效抑制酪氨酸激酶HER2，IC50为8 nM。RRY-380作用于截短的p95-HER，抑制效果与HER2差不多，IC50为7 nM。然而，ARRY-380抑制EGFR，IC50为4 μM。与作用于EGFR相比，ARRY-380作用于HER2时，选择性高500倍。

体内研究

体内, ARRY-380作用于多种HER2依赖的移植瘤模型，明显抑制肿瘤生长，且与标准护理试剂联用显示出其他活性。

AC480 (BMS-599626)

MB3981

AEE788 (NVP-AEE788)

MB3985

TAK-285

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.7555 mL

8.7776 mL

17.5553 mL

5 mM

0.3511 mL

1.7555 mL

3.5111 mL

10 mM

0.1756 mL

0.8778 mL

1.7555 mL

50 mM

0.0351 mL

0.1756 mL

0.3511 mL

ARS-853是一种具有选择性的KRAS(G12C)共价结合抑制剂，通过结合GDP-肿瘤蛋白并阻止其激活，抑制突变型KRAS所驱动的信号通路。

靶点

体外研究

对携有KRAS突变（KRASG12C）的细胞处理以ARS-853，通过对细胞溶解产物的检验发现，ARS-853浓度依赖性地抑制CRAF-RBD(RBD)所介导的KRAS的pull down，IC50约为1 μM。对H358细胞处理以ARS-853将导致KRAS-CRAF的相互作用显著减少（丢失）。ARS-853一旦与KRASG12C的非活化状态结合，在H358细胞或其他KRASG12细胞系中，将抑制经由MAPK（包括pMEK, pERK和pRSK)和PI3K信号通路(pAKT)的下游通路。对RAF-RBD pulldown以及KRAS下游通路的抑制可持续72小时，伴随着G1期细胞周期阻止、cyclin D1和Rb表达的缺失、细胞周期抑制剂p27 KIP1的增多。除此之外，在处理过ARS-853后，在H358细胞中可观测到细胞凋亡的标记，包括剪切断裂的PARP和亚二倍体DNA。而在A549(KRASG12S)细胞中则无此作用。通过在A358细胞中异位表达KRASG12V，可挽救ARS-853对其造成的抑制作用。在2700多个细胞蛋白中，KRASG12C是ARS-853最有效的共价结合靶标，ARS-853对non-KARSG12C细胞的细胞信号通路及生长没有影响，即使其处理浓度高达对KRASG12C有效浓度的10倍。ARS-853只与处于非活性状态的KRAS（GDP-bound）反应，而不与活性状态KRAS(GTP-bound)反应。ARS853在表达KRASG12C的人胚胎肾细胞HEK293或H358细胞种，减少KRAS-GTP水平和ERK磷酸化。但在那些表达KRASG12C/A59G的细胞中无此作用。ARS853通过降低其对核苷酸交换因子的亲和力，来捕捉处于GDP-bound构象的KRASG12C。

ARQ621

MB0936

Derazantinib(ARQ087)

MB9673

Tivantinib (ARQ 197 )

MB5756

AZD4547

MB5516

BGJ398(NVP-BGJ398)

MB7546

BLU9931

MB4535

CH5183284

MB4541

FIIN-2

MB4643

JNJ-42756493 (Erdafitinib)

MB4645

LY2874455

MB4637

NSC-12

MB4540

SSR128129E

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3098 mL

11.5489 mL

23.0979 mL

5 mM

0.4620 mL

2.3098 mL

4.6196 mL

10 mM

0.2310 mL

1.1549 mL

2.3098 mL

50 mM

0.0462 mL

0.2310 mL

0.4620 mL

• 纯化的Kras（1μm）在室温下孵育EDTA（10 mm）和GDP（1 mm）或GTPγS（1 mm）1小时，然后加入MgCl 2（1毫米）终止反应。然后加入ARS853（1μm），将混合物在室温下再孵育一小时。用ARS853处理表达Kras突变体的HEK293细胞。用含有9M尿素、10毫米DTT和50毫米碳酸氢盐、pH 8、65℃加热15分钟的缓冲液和37℃下50烷基碘乙酰胺烷基化处理30分钟的蛋白质。样品在Zeba旋转脱盐板中加入凝胶过滤，然后加入序列。NG级胰蛋白酶浓度为10μg/ml，在37°C孵育1小时，加入KrASG12C靶肽和KRAS标准化肽重同位素标准（25 FMOL），然后在StRAG-X聚合物反相板中脱盐。LC-MS/MS分析在标准条件下的Q激发四极OrrrRAP质谱仪中进行。药物结合的KrASG12C的量是由修饰的G12C肽与重同位素标准的比值决定的。

细胞实验

• Cell lines: H358 (G12C) 细胞
• Concentrations: 0.05, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50 μM
• Incubation Time: 5 h
• Method:

用ARS853处理携有突变型KRASG12CH359细胞5小时。通过RAS-binding domain pull-down (RBD:PD)试验、免疫印迹法检测细胞中活性的或者GTP结合的RAS蛋白水平。

AS-252424是新型，有效的PI3Kγ抑制剂，IC50为30 nM，作用于PI3Kγ比作用于PI3Kα选择性高30倍,对PI3Kδ/β具有低的抑制活性。

靶点

PI3Kγ

CK2 (casein kinase 2)

PI3Kα

IC50

33 nM

20 nM

935 nM 

体外研究

AS-252424是一种呋喃-2-亚甲基噻唑烷二酮，作为一种选择性的ATP竞争性PI3Kγ抑制剂，IC50 为33 nM。AS-252424对PI3Kα表现出降低的效力，IC50为935 nM。对80种不同Ser/Thr和Tyr激酶进行筛选时，AS-252424在10 μM下，除了CK2，不会对它们中的任何一个表现出显著的抑制作用。AS-252424以浓度依赖的方式抑制C5a介导的PKB/Akt磷酸化，具有亚微摩尔或低-微摩尔的IC50值。AS-252424浓度依赖性抑制MCP-1介导的趋药性，在野生型原代单核细胞和单核细胞系THP-1中IC50 值分别为52 μM和53μM。通过细胞计数评估，AS252424特异性阻断胰腺癌细胞系HPAF 和Capan1的细胞分化。一项最近的研究表明，100 nM AS-252424显著减少HL-1 心肌细胞中[Ca2+]i，ICa 和Ca2+的瞬变现象。

体内研究

AS-252424以10 mg/kg口服给药导致中性粒细胞积聚(35%)适度减少，几乎与PI3Kγ缺失的小鼠体内观察到的结果一致。

AS-604850

MB3879

AS-605240

MB3572

CAY10505

MB5316

CZC24832

MB8065

TG100-115

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.2757 mL

16.3784 mL

32.7568 mL

5 mM

0.6551 mL

3.2757 mL

6.5514 mL

10 mM

0.3276 mL

1.6378 mL

3.2757 mL

50 mM

0.0655 mL

0.3276 mL

0.6551 mL

体外PI3Kγ激酶试验:
人PI3Kγ (100 ng)在室温下与激酶缓冲液(10 mM MgCl2，1 mM β-甘油磷酸盐，1 mM DTT，0.1 mM Na3VO4，0.1% 胆酸钠和15 M ATP/100 nCi γ[33]ATP，终浓度)，包含18 M PtdIns和250 M PtdSer (终浓度)的脂囊泡，以及AS-252424或DMSO进行培养。激酶反应通过加入250 g Neomycin包被的闪烁迫近分析(SPA)珠停止。

细胞实验：

• Cell lines: Raw-264巨噬细胞
• Concentrations: 0.01 nM 到 0.1 μM
• Incubation Time: 5分钟
• Method: 在无血清培养基中饥饿培养3小时后，Raw-264巨噬细胞用AS-252424 或 DMSO预处理30分钟，并用50 nM C5a刺激5分钟。PKB/Akt磷酸化使用磷酸-Ser-473 Akt特异性抗体和标准ELISA协议进行监测。

动物实验：

• Animal Models: 对雌性 C3H 小鼠腹腔注射巯基乙酸盐(40 ml/kg)以诱导产生腹膜炎小鼠模型
• Formulation: AS-252424溶解于载体(0.5% 羧甲基纤维素/0.25% Tween-20)，并将溶液调节为10 mL/kg体重。
• Dosages: 10 mg/kg
• Administration: Oral administration 15 minutes before injection of thioglycollate

AS-604850 是选择性的，ATP竞争性PI3Kγ抑制剂，IC50为250 nM, 作用于PI3Kγ比作用于PI3Kδ/β选择性高80倍以上,作用于PI3Kγ比作用于PI3Kα选择性高18倍。

靶点

PI3Kγ 

PI3Kα 

IC50

0.25 μM

4.5 μM

体外研究

AS-604850 是一种ATP竞争性PI3Kγ抑制剂，Ki值为0.18 μM。AS-604850是PI3Kγ亚型的选择性抑制剂，选择性是PI3Kδ和β的30倍，是PI3Kα的18倍 (PI3Kα: IC50 = 4.5 μM，PI3Kδ 和 β: IC50 > 20μM) 。AS-604850能够抑制RAW264小鼠巨噬细胞中C5a-介导的PKB磷酸化，IC50为10 μM。AS-604850浓度依赖性阻断Pik3cg +/+单核细胞中MCP-1介导的趋药性，IC50为21 mM，但是不影响Pik3cg-/-细胞中的趋药性，表明AS-604850通过PI3Kγ发挥作用。AS-604850减少大鼠肝细胞中甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)诱导的Akt磷酸化和细胞凋亡。在HepG2 Ntcp和Huh7-Ntcp 细胞中，AS-604850减少胆汁盐诱导的细胞凋亡。AS604850浓度依赖性抑制EoL-1细胞和血液噬酸细胞对血小板激活因子(PAF)的趋药响应。

体内研究

AS-604850降低RANTES诱导的腹膜中性粒细胞聚集，ED50为42.4 mg/kg。在巯基乙酸盐诱导的腹膜炎模型中，10 mg/kg AS-604850口服给药导致中性粒细胞减少31%。

AS-605240

MB3878

AS-252424

MB3572

CAY10505

MB5316

CZC24832

MB8065

TG100-115

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.5061 mL

17.5303 mL

35.0607 mL

5 mM

0.7012 mL

3.5061 mL

7.0121 mL

10 mM

0.3506 mL

1.7530 mL

3.5061 mL

50 mM

0.0701 mL

0.3506 mL

0.7012 mL

体外 PI3Kγ 激酶试验:
人PI3Kγ (100 ng)在室温下与激酶缓冲液(10 mM MgCl2，1 mM β-甘油磷酸盐，1 mM DTT，0.1 mM Na3VO4，0.1% 胆酸钠和15 M ATP/100 nCi γ[33]ATP，终浓度)和包含18 M PtdIns与250 M PtdSer (终浓度)的脂囊泡，以及AS-252424 或DMSO进行培养。激酶反应通过加入250 g新霉素-包被的闪烁迫近分析(SPA)珠停止。

细胞实验：

• Cell lines: HepG2 Ntcp 和 Huh7-Ntcp 细胞
• Concentrations: 2.5 μM
• Incubation Time: 2 – 4 小时
• Method: 肝细胞培养物用稀释剂(DMSO)，25 μM TLC，250 μM TCDC，50 μM GCDC，或50 ng/ml Fas处理2-4小时，HepG2-Ntcp和Huh7-Ntcp细胞用DMSO，20 μM TLC，75 μM TCDC或GCDC，200 μM etoposide或200 ng/ml TNFa 和28 ng/ml actinomycin D处理2-4小时。凋亡细胞数量使用荧光着色法测定，并表示为细胞百分比。人细胞系中的细胞凋亡通过测定caspase-3/-7活性确定，大鼠肝细胞中的细胞凋亡通过蛋白印迹法检测caspase-3的17 kDa蛋白裂解片段确定；等量蛋白质负荷通过肌动蛋白的蛋白印迹监测。

动物实验：

• Animal Models: RANTES(0.5 mg/kg 在200 ml 生理盐水中)或巯基乙酸盐(40 ml/kg)腹腔注射到C3H小鼠，以诱导产生腹膜炎小鼠模型。
• Formulation: AS-604850溶于载体(0.5% 羧甲基纤维素/0.25% Tween-20)，并将溶液调节为10 mL/kg体重。
• Dosages: 对RANTES为 0，1，3，10 或 30 mg/kg，对巯基乙酸盐为 10 mg/kg
• Administration: 注射 RANTES或巯基乙酸盐之前30或15分钟口服给药

AS-605240 选择性抑制PI3Kγ，IC50为 8 nM,作用于PI3Kγ比作用于PI3Kδ/β和 PI3Kα选择性分别高30和7.5倍以上。

靶点

PI3Kγ

PI3Kα

PI3Kβ

PI3Kδ

IC50

8 nM

60 nM

270 nM

300 nM

体外研究

AS-605240抑制PI3Kγ，IC50为8 nM。AS-605240是PI3Kγ的ATP竞争性抑制剂，Ki值为7.8 nM。AS-605240也抑制PI3Kα,β,和δ,IC50分别为60,270, 和300 nM。AS-605240抑制C5a调节的PKB磷酸化，IC50为90 nM。1 μM AS-605240作用于骨髓单核细胞(BMDMs), 抑制MCP-1或CSF-1诱导的PKB磷酸化。100 nM AS-605240作用于鼠的SC-CA1突触,消除NMDAR LTD,不会影响mGluR LTD,和 LTP。

体内研究

AS-605240作用于RANTES诱导的患腹膜炎鼠模型，降低中性粒细胞趋化性，ED50为9.1 mg/kg。AS-605240按50 mg/kg剂量作用于αCII诱导的关节炎,保护其免受αCII-IA症状。AS-605240按50 mg/kg剂量作用于胶原诱导的关节炎鼠模型,也抑制关节炎症和损伤。AS-605240按 10 mg/kg剂量作用于肥胖症诱导的糖尿病ob/ob鼠模型, 降低血糖水平, 明显提高胰岛素敏感性和葡萄糖耐量，且不会影响体重。AS-605240按30 mg/kg剂量处理显示出更好的效果，只是稍微影响体重。而且, AS-605240降低ATMs量和MCP-1循环水平。

特征

AS-605240是最有效的新型PI3Kγ选择性抑制剂。

AS-604850

MB3878

AS-252424

MB3572

CAY10505

MB5316

CZC24832

MB8065

TG100-115

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.8870 mL

19.4348 mL

38.8697 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

体外PI3K油脂激酶实验 :
(1)测定PI3Kγ: 100 ng人类PI3Kγ和激酶buffer(10 mM MgCl2,1 mM β-甘油磷酸盐,1 mM DTT,0.1 mM Na3VO4,0.1% Na Cholate，及15 μM ATP/100 nCi γ[33P]ATP)和含18 μM PtdIns 与250 μM PtdSer的脂质囊泡, 在有AS-605240或DMSO存在时，在RT中温育处理。加入250 μg Neomycin包被的闪烁迫近分析(SPA)珠终止激酶反应。(2) 测定PI3Kα,β,和δ:不同量的ATP和不同纯化的PI3K亚型及浓度饱和的PtdIns温育。因此,测定PI3Kα,β,和δ的IC50值，用于评估抑制剂选择性：60 ng PI3Kα和激酶buffer（与PI3Kγ的激酶buffer类似，但是不含89 μM ATP/300 nCi γ[33P]ATP，也没有Na Cholate)和含212 μM PtdIns 与58 μM PtdSer的脂质囊泡在RT中温育。100 ng PI3Kβ和激酶buffer(含 70 μM ATP/300 nCi γ[33P]ATP, 4 mM MgCl2，没有 Na Cholate)和含225 μM PtdIns与45 μM PtdSer的脂质囊泡在RT中温育。90 ng PI3Kδ和激酶buffer (含65 μM ATP/300 nCi γ[33P]ATP,1 mM MgCl2, 没有Na Cholate)和含 100 μM PtdIns与170 μM PtdSer的脂质囊泡在RT中温育。2小时后终止反应。

细胞实验：

• Cell lines: RAW264巨噬细胞
• Concentrations: 1 nM-10 μM,溶于DMSO
• Incubation Time: 30分钟
• Method:

在无血清培养基上饥饿处理3小时后，细胞用AS-605240或DMSO预处理30分钟，然后用50 nM C5a刺激5分钟。使用Ser473位点磷酸化的Akt特定抗体和标准ELISA法监测PKB磷酸化。

动物实验：

• Animal Models: RANTES诱导的患腹膜炎的雌性Balb/C或C3H鼠模型，αCII诱导的患关节炎和胶原诱导的患关节炎的雄性DBA/1鼠模型
• Formulation: 溶于0.5%羧甲基纤维素/0.25% Tween-20
• Dosages: 50 mg/kg
• Administration: 口服处理