Crisaborole是选择性的小分子PDE4抑制剂，具有广谱的抗炎活性。

IC50 & Target

PDE4 (Cell-free assay)

体内

Crisaborole is well tolerated and not tumorigenic in mice.

动物实验

Animal Models: Experimentally naïve male and female (325 each) Crl:CD1(ICR) mice
Formulation: 1% w/v carboxymethylcellulose (CMC)
Dosages: 0, 30, 100, or 300 mg/kg/day
Administration: oral administration
(Only for Reference)

Dipyridamole

MB4321

TAK-063;Balipodect

MB4324

Deltarasin

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.9833 mL

19.9164 mL

39.8327 mL

5 mM

0.7967 mL

3.9833 mL

7.9665 mL

10 mM

0.3983 mL

1.9916 mL

3.9833 mL

50 mM

0.0797 mL

0.3983 mL

0.7967 mL

Crizotinib hydrochloride 是有效的 c-Met 和 ALK 抑制剂，在细胞试验中，IC50 值分别为 11 nM 和 24 nM。

靶点

IC50: 11 nM (c-Met), 24 nM (ALK)

体内研究

PF-2341066在mIMCD3小鼠或MDCK犬上皮细胞中显示出相似的针对c-Met磷酸化的效力，IC50分别为5nM和20nM。 PF-2341066示出了改进的或针对工程改造以表达c-Met的ATP结合位点的突变体V1092I或H1094R或具有19纳米，2和15nM的IC50 P-环突变体M1250T NIH3T3细胞相似的活性，分别与NIH3T3细胞相比表达野生型受体，IC50为13 nM。相反，与野生型受体相比，观察到针对经工程改造以表达c-Met活化环突变体Y1230C和Y1235D的细胞的PF-2341066效力的显着变化，IC50分别为127nM和92nM。 PF-2341066还有效地阻止NCI-H69和HOP92细胞中c-Met的磷酸化，IC50分别为13nM和16nM，其分别表达内源性c-Met变体R988C和T1010I。 PF-2341066还有效抑制Karpas299或SU-DHL-1 ALCL细胞中的NPM-ALK磷酸化，IC50为24 nM。 PF-2341066有效地阻止细胞增殖，其与ALK阳性ALCL细胞中的G（1）-S期细胞周期停滞和诱导凋亡相关，IC50为30nM，但不是ALK阴性淋巴瘤细胞。此外，PF-2341066预防与原发性肿瘤生长（即增殖和存活）以及转移相关的骨肉瘤行为。

体外研究

PF-2341066揭示了在50 mg/kg/day和75 mg/kg/day治疗组中，能够引起大肿瘤(> 600 mm3)显著消退，在GTL-16模型中，与43天给药计划相比，平均肿瘤体积减少60%。在另一项研究中，PF-2341066表现出完全抑制GTL-16肿瘤生长>3个月的能力，12只小鼠中只有1只在3个月的治疗计划中肿瘤生长以50mg /kg/d显著增加。在GTL-16肿瘤中，cd31阳性内皮细胞以12.5 mg/kg/d、25 mg/kg/d、50 mg/kg/d剂量依赖性显著降低，说明抑制MVD与抗肿瘤疗效呈剂量依赖性相关。PF-2341066显示，在GTL-16和U87MG模型中，人VEGFA和IL-8血浆水平的显著剂量依赖性降低。显著抑制磷酸化c-Met, Akt、Erk PLCλ1,STAT5水平观察GTL-16肿瘤后卖方pf – 2341066。PF-2341066可预防原发性肿瘤生长和转移引起的骨肉瘤行为。在经口服灌胃PF-2341066治疗的裸鼠中，PF-2341066可阻止异种骨肉瘤的生长及相关骨溶解和骨外基质形成。用50mg /kg PF-2341066处理c- met扩增的GTL-16异种移植物可导致肿瘤消退，肿瘤消退与18F-FDG摄取缓慢降低和葡萄糖转运体1、GLUT-1表达降低有关。

(S)-crizotinib

MB2025

克里唑啼尼;克里唑替尼,Crizotinib

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0542 mL

10.2712 mL

20.5423 mL

5 mM

0.4108 mL

2.0542 mL

4.1085 mL

10 mM

0.2054 mL

1.0271 mL

2.0542 mL

50 mM

–

–

–

Crizotinib (PF-02341066)是一种有效的c-Met和ALK抑制剂，在细胞试验中IC50分别为11 nM 和 24 nM。

靶点

体外研究

PF-2341066作用于mIMCD3小鼠和MDCK犬上皮细胞，作用于c-Met磷酸化作用时具有相似效果，IC50分别为5 nM 和20 nM。PF-2341066作用于表达c-Met ATP-结合位点突变型V1092I 或H1094R或 P-环突变 M1250T 的NIH3T3 细胞，具有相似的活性，且活力增高，IC50分别为19 nM,2 nM 和15 nM,而作用于表达野生型受体的NIH3T3 细胞时，IC50为13 nM。相反, 观察到PF-2341066作用于表达c-Met活化环突变型Y1230C 和Y1235D的细胞时，与作用于野生型受体相比，效果发生显著改变，IC50分别为127 nM 和92 nM。PF-2341066 作用于分别表达内源性c-Met 突变体R988C和 T1010I 的NCI-H69 和HOP92 细胞，也有效抑制c-Met 磷酸化, IC50分别为13 nM 和16 nM。与作用于c-Met相比，PF-2341066作用于VEGFR2 和PDGFRβ RTKs, 选择性高1000多倍，作用于IRK和Lck选择性高250多倍，作用于Tie2, TrkA,和TrkB选择性高40到60倍。PF-2341066 作用于RON和 Axl RTKs时选择性为20到30倍。相反，PF-2341066 作用于表达ALK RTK 的核磷蛋白 (NPM)- 间变性淋巴瘤激酶(ALK) 致癌融合突变体和 KARPAS299人间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)细胞系时具有相近的IC50值，为24 nM。PF-2341066抑制c-Met依赖的癌细胞的肿瘤表现型，和内皮细胞的血管生成表现型。PF-2341066抑制人GTL-16胃癌细胞生长，IC50为9.7 nM。PF-2341066诱导 GTL-16细胞凋亡，IC50 为8.4 nM。PF-2341066 抑制HGF刺激的人NCI-H441肺癌细胞迁移和入侵，IC50分别为11 nM 和6.1 nM。PF-2341066抑制 MDCK细胞散射，IC50为16 nM。PF-2341066 抑制HGF-刺激的c-Met磷酸化,细胞存活，和Matrigel入侵，IC50分别为11 nM, 14 nM和35 nM。此外, PF-2341066抑制纤维蛋白胶中的血清刺激的 HMVEC分支小管形成 (形成血管)。PF-2341066 作用于Karpas299 或SU-DHL-1 ALCL细胞，也有效抑制 NPM-ALK磷酸化，IC50 为24 nM。PF-2341066 有效抑制细胞增殖，伴随着使细胞周期停在G(1)-S期，且诱导 ALK阳性的 ALCL 细胞凋亡，IC50为30 nM, 但是作用于ALK阴性的淋巴瘤细胞则无效果。此外, PF-2341066 抑制骨肉瘤的一些活动行为，及其肿瘤生长 (例如,增殖和存活)和转移 (例如，入侵和形成克隆)。

体内研究

PF-2341066每天按50 mg/kg和75 mg/kg剂量处理GTL-16 模型, 引起大肿瘤 (体积大于600 mm3) 明显衰退，且按43天处理日程处理后，平均肿瘤体积降低60%。在另一项研究中, PF-2341066处理3个月以上，完全抑制GTL-16肿瘤生长，PF-2341066每天按50 mg/kg剂量处理小鼠，3个月后，只有1/12小鼠的肿瘤生长得到提高。PF-2341066每天按50 mg/kg剂量处理NCI-H441 NSCLC 模型处理周期为38天，观察到平均肿瘤体积降低43%。PF-2341066 每天按50 mg/kg剂量作用于 Caki-1 RCC模型，处理周期为33天，观察到平均肿瘤体积降低53%，且每种肿瘤体积降低至少30%。PF-2341066每天按 50 mg/kg剂量作用于 U87MG 恶性胶质瘤或PC-3前列腺癌移植瘤模型,几乎完全抑制肿瘤生长，在实验最后一天，抑制分别达97% 或84%。相反, PF-2341066每天按50 mg/kg剂量口服给药处理 MDA-MB-231 乳腺癌模型,或 DLD-1 结肠癌模型，不会显著抑制肿瘤生长。PF-2341066每天按12.5 mg/kg, 25 mg/kg, 和50 mg/kg剂量作用于 GTL-16 肿瘤，观察到CD31阳性内皮细胞显著降低，这种作用存在剂量依赖性，说明 MVD 受抑制，且具有相关的抗癌高效性，这种作用也存在剂量依赖性。PF-2341066 作用于GTL-16 和 U87MG 模型，显著降低人VEGFA 和IL-8血浆水平，这种作用存在剂量依赖性。PF-2341066口服处理GTL-16 肿瘤，观察到磷酸化的c-Met, Akt, Erk, PLCλ1,和 STAT5水平显著受抑制。PF-2341066 每天按100 mg/kg剂量口服处理携带Karpas299 ALCL 移植瘤的SCID Beige 小鼠，具有抗癌高效性，这种作用存在剂量依赖性，处理15天，所有肿瘤完全衰退。此外, PF-2341066抑制关键NPM-ALK信号调节器, 包括磷脂酶C-γ, 信号转导器，及转录因子3, 细胞外信号调节激酶, 和Akt的激活剂，这些与 NPM-ALK 磷酸化和功能受抑制相关。 PF-2341066 抑制骨肉瘤的一些活动行为，及其肿瘤生长(例如, 增殖和存活)和转移 (例如，入侵和形成克隆)。PF-2341066口服饲喂裸鼠，抑制生长和相关的骨肉瘤裸鼠移植瘤的骨基质的形成。PF-2341066 按50 mg/kg 剂量处理 c-MET-扩增的GTL-16移植瘤，引起肿瘤衰退，这与18F-FDG 摄取的缓慢降低相关，且降低葡糖糖转运蛋白 1, GLUT-1的表达。

(S)-crizotinib

MB3593

克里唑啼尼盐酸;克里唑替尼盐酸

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2205 mL

11.1027 mL

22.2054 mL

5 mM

0.4441 mL

2.2205 mL

4.4411 mL

10 mM

0.2221 mL

1.1103 mL

2.2205 mL

50 mM

–

–

–

生化激酶实验:
使用连续耦合的分光光度测定c-Met催化活性，通过分析NADH消耗率而测定c-Met诱导的ADP产量，这种作用具有时间依赖性。在 340 nm处使用分光光度法在指定时间点测定吸光值的降低而计算NADH的消耗量。为了测定Ki值, 在含实验试剂的实验孔中加入不同浓度PF-2341066，然后在37oC下温育10分钟。加入c-Met酶开始进行实验反应。

细胞实验：

• Cell lines: GTL-16胃癌细胞和T47D乳腺癌细胞
• Concentrations: 0 nM-256 nM
• Incubation Time: 1小时
• Method:

GTL-16胃癌细胞和T47D乳腺癌细胞接种在96孔板上，孔中含培养基，培养基中含10% 胎牛血清(FBS)，然后转移到无血清培养基中[含0.04%牛血清蛋白(BSA)]，处理 24小时。 在调查配体依赖的RTK 磷酸化实验中，加入相应的生长因子，处理20分钟。细胞和 PF-2341066和/或适当配体在指定时间温育1小时，然后使用含 1 mmol/L Na3VO4的HBSS冲洗细胞一次,然后从细胞中获得蛋白裂解物。随后,通过夹心酶联免疫吸附试验法使用特定的捕获抗体在96孔板上测定选定蛋白激酶的磷酸化，使用特点检测抗体测定磷酸化的酪氨酸残基。抗体包被的实验板(a) 在蛋白裂解物存在时，在4oC下过夜;(b)在溶于PBS的1% Tween-20 中冲洗7次;(c)在辣根过氧化物酶标记的抗总磷酸（PY-20）抗体（1:500）中温育20分钟;(d) 再次冲洗7次;(e)在3,3′,5,5′-四甲基联苯胺过氧化物酶底物中温育，开始显示反应，加入0.09 N H2SO4终止反应; (f)在450 nm 处使用分光光度计测定吸光度。

动物实验：

• Animal Models: 携带NCI-H441,或DLD-1,或MDA-MB-231的雌性和雄性nu/nu小鼠
• Formulation: —
• Dosages: 12.5 mg/kg/day, 25 mg/kg/day, 和50 mg/kg/day
• Administration: 口服处理

206.15

化学式

C9H6N2O4

CAS号

6960-45-8

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

41 mg/mL (198.88 mM)

Ethanol

1 mg/mL (4.85 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

CRT0044876 是一种强效的选择性的APE1抑制剂，其IC50约为3μM。

靶点

体外研究

CRT0044876显著抑制APE1的脱嘌呤嘧啶内切核酸酶，3端磷酸二酯酶和3’端磷酸酯酶活性，对抑制核酸外切酶III家族具有选择性。CRT0044876增强几种靶向DNA碱基的化合物的毒性，导致未配对的AP位点积累。CRT0044876通过抑制BER信号通路增加氧化DNA损伤，进而增加酸性的肿瘤微环境中细胞外的活性氧，导致细胞周期抑制和增加DNA双链断裂，最终导致细胞死亡。

CUDC-907 是双重PI3K 和HDAC抑制剂，作用于PI3Kα和HDAC1/2/3/10，IC50分别为19 nM 和 1.7 nM/5 nM/1.8 nM/2.8 nM。

靶点

PI3Kα

HDAC1

HDAC3

HDAC10

HDAC2

IC50

19 nM

1.7 nM

1.8 nM

2.8 nM

5 nM

体外研究

PI3K/HDAC Inhibitor 抑制其他PI3K亚型，如 PI3Kβ, PI3Kγ, PI3Kδ和 PI3KɑE545K， IC50 分别为 54, 311, 39 和62 nM。而且, PI3K/HDAC Inhibitor 也抑制HDAC亚型HDAC8, HDAC6 和 HDAC11，IC50分别为191, 27 和 5.4 nM。此外, PI3K/HDAC Inhibitor 低效抑制其他类型 HDAC 酶活性。PI3K/HDAC Inhibitor 抑制一系列B细胞淋巴瘤生长，如Granta 519, DOHH2, RL, Pfeiffer, SuDHL4, Daudi和 Raji，IC50 分别为 7, 1, 2, 4, 3, 15 和 9 nM。PI3K/HDAC Inhibitor 也阻断 骨髓瘤增殖，如RPMI8226, OPM-2 和 ARH77，IC50分别为 2, 1 和5 nM。PI3K/HDAC Inhibitor 作用于多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤，具有有效抗癌活性。

体内研究

PI3K/HDAC Inhibitor 口服给药犬类具有生物有效性。PI3K/HDAC Inhibitor 治疗小鼠肿瘤具有长的半衰期。PI3K/HDAC Inhibitor 作用于移植瘤，诱导凋亡，且抑制癌细胞增殖。在高效性研究中， PI3K/HDAC Inhibitor 按最大耐受剂量(MTD)处理，作用于NHL和MM模型，比单独药剂PI3K或HDAC抑制剂参考化合物或两者联用更有效。而且, PI3K/HDAC Inhibitor 按MTD剂量处理，比PI3Kδ选择性抑制剂CAL-101更有效。

MB3888

BGT226 (NVP-BGT226)

MB5532

BYL719

MB3572

CAY10505

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9664 mL

9.8319 mL

19.6637 mL

5 mM

0.3933 mL

1.9664 mL

3.9327 mL

10 mM

0.1966 mL

0.9832 mL

1.9664 mL

50 mM

0.0393 mL

0.1966 mL

0.3933 mL

• Animal Models: 携带NHL和 MM模型的小鼠
• Formulation: —
• Dosages: 100 mg/kg
• Administration: 口服处理

CUDC-101是一种有效的，多靶点抑制剂，作用于HDAC，EGFR和HER2，IC50分别为4.4 nM， 2.4 nM，和15.7 nM，且抑制I/II型HDACs，但是对III型， Sir-type HDACs没有抑制作用。

特性

CUDC-101会同时造成HDAC 和 RTK 通路的阻断。

靶点

体外研究

CUDC-101作为特异性抑制一类和二类HDACs家族的抑制剂，不能抑制第三类HDACs家族。CUDC-101还对其他的蛋白激酶包括KDR/VEGFR2， Lyn,，Lck， Abl-1， FGFR-2， Flt-3和 Ret具有微弱的抑制活性。IC50分别是0.85 μM，0.84 μM，5.91 μM，2.89 μM，3.43 μM，1.5 μM和 3.2 μM。CUDC-101在很多人癌细胞中表现出广谱的抗增殖活性。IC50在0.04μM到0.80 μM之间。在很多癌细胞中，这种活性甚至超过了erlotinib，lapatinib，以及erlotinib和lapatinib与vorinostat共同使用时所表现出的抑制活性。CUDC-101能够抑制具有lapatinib 和 erlotinib抗性的癌细胞系的增殖能力。 CUDC-101 抑制erlotinib抗性的 EGFR突变型T790M细胞系，即使这种抑制效果不是很完全，在其酶活性最高峰是仍不超过60% 。在多种癌细胞系中，CUDC-101处理不仅能够以剂量依赖的方式增加组蛋白H3和H4的乙酰化水平，同时也能够使非组蛋白底物p53 和 α-tubulin的乙酰化水平升高。CUDC-101 同时还能够抑制肿瘤细胞中HER3 的表达， Met 的扩增 以及AKT 的重激活

体内研究

CUDC-101以120 mg/kg/天方式给药处理Hep-G2肝肿瘤模型能够诱导肿瘤的退化，比erlotinib 所用的最大耐药剂量(25 mg/kg/天) 以及vorinostat等摩尔剂量(72 mg/kg/天)时的抑制效果都要明显有效。CUDC-101 以剂量依赖的方式抑制erlotinib 敏感的H358 NSCLC移植瘤的生长。CUDC-101 也表现出抑制erlotinib 敏感的A549 NSCLC 移植瘤生长的能力。CUDC-101 在两个模型中均表现出明显促进肿瘤退化的效果，分别是 lapatinib 敏感，HER2阴性和EGFR过表达的MDA-MB-468乳腺肿瘤模型和EGFR过表达的CAL-27脑颈癌(HNSCC)模型。CUDC-101抑制 K-ras 突变的 HCT116 结肠模型和EGFR/HER2 (neu)表达的HPAC胰腺肿瘤模型中肿瘤生长

MB5022

MB7001

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3015 mL

11.5077 mL

23.0155 mL

5 mM

0.4603 mL

2.3015 mL

4.6031 mL

10 mM

0.2302 mL

1.1508 mL

2.3015 mL

50 mM

–

–

–

HDAC, EGFR 和HER2 抑制效果分析:
一类和二类HDACs酶活性是用HeLa细胞裂解液通过Biomol Color de Lys系统检测的。不用浓度的CUDC-101加入到HeLa细胞裂解液中检测底物的色度。 显影剂最后加入。酶活用Wallac Victor II 1420 微型读卡板检测405 nM时的峰值。EGFR和 HER2的激酶活性是用HTScan EGF受体和HER2 激酶活性检测试剂盒检测的。首先，GST-EGFR融合蛋白与合成的带有生物素标签的底物多肽孵育。然后加入不同浓度的CUDC-101和400 mM 的ATP。磷酸化的底物通过strapavidin扣板的96孔板获得。用抗酪氨酸磷酸化的抗体和铕标签的二抗检测磷酸化的水平。增强液最后加入，酶活性用Wallac Victor II 1420 微型读卡板检测613 nM时的峰值。

细胞实验

• Cell lines: HCC827, H358, H460, HepG2, Hep3B2, Sk-Hep-1, Capan1, BxPc3, MCF-7, MDA-MB-231,和 Sk-Br-3细胞
• Concentrations: 溶于 DMSO, 终浓度 ~10 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: 癌细胞按5000到10000个每孔接种到96孔板中并加入不同浓度的CUDC-101。在含有0.5%胎牛血清的培养环境中细胞与CUDC-101 孵育72 小时。通过Perkin-Elmer ATPlite试剂盒对ATP含量进行测定以此来分析细胞的生长抑制情况。利用Apo-ONE Homogeneous Assay 试剂盒，按照惯例通过对Caspase-3和 7的活性测量来分析细胞凋亡情况。

动物实验

• Animal Models: 携带 Hep-G2, H358, A549, MDA-MB468, HCT116, CAL-27, HepG2或 HPAC细胞的无胸腺雌性小鼠(nude nu/nu CD-1)
• Formulation: 在 30% Captisol环糊精溶液中配制
• Dosages: ~120 mg/kg/天
• Administration: 静脉注射

500.33

化学式

C23H21IN2O3

CAS号

1594094-64-0

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

<1 mg/mL 难溶或者不溶

CW069 是一种变构选择性microtubule motor protein HSET抑制剂，IC50为75 μM, 其选择性显著高于KSP.

特性

变构的，HSET-选择性抑制剂。

靶点

体外研究

CW069增加含有多余中心体的N1E-115细胞中多级纺锤体，而不改变正常人皮肤成纤维细胞中两极纺锤体的形态。CW069抑制癌症N1E-115细胞的生长，IC50 为10 μM，但是不影响NHDF或原代人骨髓细胞的生长。

Silmitasertib (CX-4945)是有效的，选择性CK2(casein kinase 2)抑制剂，无细胞试验中IC50为1 nM,对 Flt3, Pim1 和 CDK1作用效果稍弱(细胞试验中没有活性)。

特性

CX-4945是促进人类临床实验的CK2的第一个口服生物相容性小分子抑制剂。

靶点

体外研究

CX-4945是CK2特异的抑制剂，它只抑制238种激酶中的7种并且在0.5 μM浓度时它的抑制率超过90%，这是CK2的IC50的500多倍。虽然在无细胞系统中CX-4945抑制FLT3, PIM1和CDK1的IC50分别为35 nM, 46 nM和56 nM，但是在细胞基础上的功能实验中10 μM的CX-4945对FLT3, PIM1和 CDK1抑制作用不强。CX-4945有广谱的抗恶性细胞增生活性。乳腺癌细胞系对CX-4945敏感性最广泛，其EC50为1.71-20.01 μM。CX-4945的抗恶性细胞增生活性与CK2α mRNA和蛋白水平对应，但是与CK2α’催化亚基、调整CK2β亚族和PI3K/Akt 或 PTEN突变状态无关。CX-4945通过抑制CK2直接阻断Akt第129位丝氨酸的磷酸化作用来抑制PI3K/Akt信号通路，而不是通过抑制激活的PTEN起作用。用CX-4945处理可以引起磷酸化p21 (T145)减少，而p21和p27整体水平则会升高，同时诱导caspase 3/7活性。用CX-4945处理会诱导BT-474细胞阻断在细胞周期的G2/M期和BxPC-3细胞阻断在G1期。CX-4945会抑制HUVEC的增殖、迁移及血管新生，其IC50分别是5.5 μM, 2 μM和4 μM。在含氧量低的情况下BT-474和BxPC-3细胞用CX-4945处理，能阻断p53和pVHL下调，降低HIF-1α的转录活性。在Jurkat细胞中CX-4945能有效抑制内源细胞内的内源CK2的活性，其IC50是0.1 μM 。

体内研究

在BT-474模型中，一天两次口服25 mg/kg或75 mg/kg的CX-4945，具有强效的抗癌活性，TGI分别为88% 和97%，每组实验动物9只中有2只其肿瘤的体积大小比初期的要减少50%。在BxPC-3模型中，一天两次用75 mg/kg的CX-4945处理，TGI为93%，在治疗期结束时，有3只动物没发现还有残留的肿瘤[1]。在PC3异种移植的模型中，用25 mg/kg, 50 mg/kg或 75 mg/kg的CX-4945处理，能抑制肿瘤生长，TGI分别为19%, 40%和86%

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.8590 mL

14.2951 mL

28.5902 mL

5 mM

0.5718 mL

2.8590 mL

5.7180 mL

10 mM

0.2859 mL

1.4295 mL

2.8590 mL

50 mM

–

–

–

CK2激酶实验:
将10 μL稀释缓冲液(ADB; 20 mM MOPS, pH 7.2, 25 mM β-磷酸甘油, 5 mM EGTA, 1 mM原钒酸钠和 1 mM 二硫苏糖醇)，10 μL多肽底物(RRRDDDSDDD, 溶于ADB，浓度1mM)和10 μL重组的人源CK2(ααββ-全酶, 25 ng溶于ADB)混合，加入10 μL CX-4945。加入10μLATP溶液(90% 75 mM MgCl 2, 75 μM ATP (终浓度15 μM)溶于ADB; 10% [γ-33P]ATP (储存1 mCi/100 μL; 3000 Ci/mM起始反应，30 ℃反应10分钟。用100 μL的0.75%的磷酸终止反应，然后转移到磷酸纤维素滤板上过滤。每个孔用0.75%磷酸洗5次，真空抽干5分钟，再每孔加入15 μL闪烁液，然后用Wallac荧光计数器检测残留的放射性。通过对0.0001 μM 到1 μM的8个浓度的CX-4945实验结果的检测，计算出IC50。

细胞实验：

• Cell lines: SKBr3, MDA-MB-453, BT-474, ZR-75-1, MDA-MB-231, MDA-MB-468, T47D, MCF 7, Hs578T, MDA-MB-361, UACC-812, 等等
• Concentrations: 溶于 DMSO, 终浓度 ~100 μM
• Incubation Time: 4 天
• Method: 在用药处理前，在合适的培养基中按每孔3000个细胞的浓度接种细胞培养24小时，然后用不同浓度的CX-4945处理细胞。接种悬浮细胞并处理相同的天数。接着孵育4天，加入Alamar Blue (20 μL, 体积比每孔10%)，然后于37℃孵育4-5小时。检测荧光，激发光为530-560 nm，放射光为590 nm。

动物实验：

• Animal Models: 注射了BxPC-3 或BT-474细胞的免疫缺陷的雌鼠
• Formulation: 溶于DMSO, 用PBS稀释
• Dosages: 25或75 mg/kg
• Administration: 每日两次口服

CX-5461是一种rRNA synthesis抑制剂，选择性抑制Pol I驱动的rRNA转录，在HCT-116，A375，和 MIA PaCa-2细胞中IC50为142 nM，对Pol II没有作用，对rRNA转录的抑制比对DNA复制和蛋白翻译的抑制选择性高250到300倍。

靶点

体外研究

CX-5461能够选择性抑制HCT-116细胞中rRNA合成(Pol I IC50=142 nM；Pol II IC50 > 25 μM；选择性约200倍)。CX-5461对rRNA合成的选择性抑制在两种其他人类实体肿瘤细胞系，黑色素瘤 A375 (Pol I IC50 = 113 nM；Pol II IC50 > 25 μM)和胰腺癌MIA PaCa-2 (Pol I IC50=54 nM；Pol II IC50 ~25 mM)中得到证实。CX-5461对rRNA转录抑制作用的选择性是对DNA复制和蛋白质翻译的250~300倍。CX-5461对一组人类癌细胞系表现出光谱抗增殖活性，但是对非转化的人类细胞的作用活性很小。所有测试细胞系的中值EC50为147 nM，所有正常细胞系的EC50值大约为5, 000 nM。对HCT-116，A375，和MIA PaCa-2细胞系的抗增殖剂量响应评估的得到的EC50值分别为167，58，和74 nM。CX-5461通过p53-不依赖过程，诱导固体肿瘤细胞自吞噬或衰老，但不诱导细胞凋亡。

体内研究

异种移植人固体肿瘤的小鼠模型中，CX-5461口服生物可利用，且在体内具有抗肿瘤活性。CX-5461显示出显著的MIA PaCa-2 TGI，在第31天，TGI 为69%，与gemcitabine (63% TGI)相当。Gemcitabine是一种阳性对照，其每3天以120 mg/kg腹腔内给药。同样的，CX-5461表现出显著的A375 TGI，第32天的TGI为79%。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9470 mL

9.7350 mL

19.4700 mL

5 mM

0.3894 mL

1.9470 mL

3.8940 mL

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

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Pol I 和 Pol II 转录活性检测:
两个寿命短暂的RNA转录物(半衰期~20-30 分钟)，一个由聚合酶I产生，另一个由聚合酶II产生，通过qRT-PCR定量，作为CX-546对转录的相关作用的测量。45S前体rRNA作为聚合酶I转录物，原癌基因c-myc作为聚合酶II转录物的对比。聚合酶I和聚合酶II转录物均会被通常的细胞应激影响。为最小化应激作用的潜在影响，将细胞在测试试剂下仅暴露很短的时间(2 小时)。如果CX-5461影响它们的合成，暴露的时间足以使这些转录物减少90%以上。

细胞实验：

Cell lines: 一组癌细胞和正常细胞系

• Concentrations: 0-2 μM
• Incubation Time: 96小时
• Method: 将细胞接种在96孔板，第二天用剂量响应的CX-5461处理96小时。细胞活性使用Alamar Blue 和CyQUANT试验测定。

动物实验：

• Animal Models: 5×106 MIA Paca-2 和 A375 癌细胞皮下注射到5-6周大雌性无胸腺小鼠的右侧面
• Formulation: CX-5461溶解于50 mM NaH2PO4 (pH 4.5)
• Dosages: 50 mg/kg
• Administration: CX-5461通过口服给药，每天一次或每3天一次。

498.40

化学式

C26H24ClN3O3.HCl

CAS号

1353859-00-3

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

89 mg/mL warmed (178.57 mM)

DMSO

57 mg/mL warmed (114.36 mM)

Ethanol

1 mg/mL warmed (2.0 mM)

CX-6258 HCl 是强效的可口服的pan-Pim kinase抑制剂，其对Pim1, Pim2, 和 Pim3的IC50分别为5 nM, 25 nM 和 16 nM。

靶点

体外研究

CX-6258对一组人癌细胞系显示出抗增殖活性，IC50 为0.02-3.7 μM，对急性白血病细胞系最敏感。CX-6258与阿霉素(10:1摩尔比)结合，和CX-6258与紫杉醇(100:1 摩尔比)结合产生协同细胞杀伤力，复合指数(CI50)值分别为0.4和0.56。CX-6258剂量依赖性抑制两种促存活蛋白，Bad和4E-BP1的磷酸化作用，分别在Pim激酶特定位点S112 和 S65和T37/46。

体内研究

CX-6258表现出剂量依赖性功效，抑制MV-4-11异种移植的小鼠体内肿瘤的生长， 50毫克/千克剂量产生45%肿瘤生长抑制(TGI)，100毫克/千克剂量产生75% TGI