AHU-377 hemicalcium salt is a potent NEP inhibitor with an IC50 of 5 nM. AHU-377 is a component of the heart failure medicine LCZ696.

靶点

IC50: 5 nM (NEP)

体外研究

LCZ696是由缬沙坦(ARB)和AHU377(1:1比例)分子组成的单一分子。AHU377是由乙基酯的酶切反应转化为抑制代谢产物LBQ657的活性新生蛋白。非活性NEPi前体AHU377不能抑制成纤维细胞中的胶原积累，也不能抑制心肌细胞肥大。在心脏成纤维细胞中，活性NEPi LBQ657没有明显的作用。相反，LBQ657温和抑制心肌细胞肥大。

体内研究

在人类中，AHU37 7（Tmax 0.5-1.1h）被迅速吸收。AHU377迅速转化为LBQ657，其tmax在1.9-3.5h内达到，生物活性LBQ657的平均t1/2值为9.9-11.1h，ANF使犬尿钠排泄量从17.3±3.6增加到199.5±18.4pequivkglmin。这种效果在接受AHU37 7的动物中显著增强。在接受AUH37 7静脉给药的动物中，尿量也增强。

AI-10-49是CBFβ-SMMHC与 RUNX1结合的选择性抑制剂，IC50为 260 nM。

靶点

CBFβ-SMMHC  260 nM

体外研究

AI-10-49对inv(16)-阳性细胞系ME-1表现出特异性生长抑制。AI-10-49选择性结合CBFβ-SMMHC，干扰其对RUNX1的结合，并恢复RUNX1转录活性。

体内研究

在移植Cbfb+/MYH11;Nras+/G12D白血病细胞的小鼠中，AI-10-49 (200 mg/kg, i.p.)减少白血病扩撒。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.5140 mL

7.5698 mL

15.1396 mL

5 mM

0.3028 mL

1.5140 mL

3.0279 mL

10 mM

0.1514 mL

0.7570 mL

1.5140 mL

50 mM

0.0303 mL

0.1514 mL

0.3028 mL

FRET 试验:
Cerulean-Runt结构域被表达并纯化。Venus-CBFβ-SMMHC通过将6xHis tag和Venus植入NdeI 与NcoI位点间的pET22b载体，以及将CBFβ-SMMHC (CBFβ-SMMHC构架包含369个氨基酸，1-166来自CBFβ，166-369来自MYH11 (氨基酸1526-1730))植入NcoI和BamHI位点间构建。融合蛋白通过标准Ni-亲和色谱法纯化，在核酸酶柱上处理以除去残基DNA污染物。使用前，将蛋白质透析到FRET缓冲液(25mM Tris-HCl，pH 7.5，150mM KCl，2mM MgCl2)。蛋白质浓度通过Cerulean和Venus分别在433与513 nm下的UV吸光度测定。Cerulean-Runt结构域和Venus-CBFβ-SMMHC以1:1混合，在96孔黑色COSTAR板中得到10 nM的终浓度。将化合物的DMSO溶液加入，得到终DMSO浓度为5% (v/v)，板在室温下于黑暗中培育1小时。PHERAstar酶标仪用于测量荧光性(433 nm下激发，474和525 nm下发射测量)。对于IC50测定，525 nm和474 nm下的荧光强度比率对化合物的浓度作图，并将得到的曲线使用Origin7.0拟合。进行三次独立测定，它们的平均值和偏差用于IC50数据拟合。

细胞实验：

• Cell lines: HL-60，KG-1，THP-1，Kasumi-1，TUR 9，U937，和 MOLM-13 细胞
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞系在IMDM中培育，用10%~20%胎牛血清(FBS)根据ATCC和1% 青霉素/链霉素 (Pen/Strep)指示的培养条件进行增补。所有细胞系进行支原体测试。细胞以300,000细胞/ ml接种到96孔板，在DMSO，或不同的AI-10-47，AI-410-49，AI-4-57，或AI-4-88中培养24和48小时，分别以一式两份或一式三份进行。细胞活性使用DAPI根据流式细胞术评估。数据使用FlowJo软件和Graphpad Prism软件分析。

动物实验：

• Animal Models: 移植Cbfb+/MYH11;Nras+/G12D白血病细胞的小鼠
• Formulation: DMSO
• Dosages: 200 mg/kg
• Administration: i.p.

AK 7是具有血脑屏障渗透性的SIRT2抑制剂，IC50为15.5 μM。

IC50 & Target

SIRT2： 
15.5 μM

体外

Treatment with AK7 increases lysine 40 (K40) acetylation of α-tubulin in neuronal cells. AK7 ameliorates alpha-synuclein toxicity in vitro.

体内

AK7 is neuroprotective in models of Parkinson’s disease and prevents 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)-induced dopamine depletion and dopaminergic neuron loss in vivo. AK7 does not show beneficial effects in mouse models of amyotrophic lateral sclerosis and cerebral ischemia.

动物实验：

• Animal Models: SOD1-G93A transgenic mice
• Formulation: 5% Cremaphor in PBS
• Dosages: 20 mg/kg
• Administration: i.p.
  (Only for Reference)

3-TYP

MB3760

SRT1720

MB3761

EX527 (Selisistat)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.2865 mL

11.4325 mL

22.8650 mL

5 mM

0.4573 mL

2.2865 mL

4.5730 mL

10 mM

0.2286 mL

1.1432 mL

2.2865 mL

50 mM

0.0457 mL

0.2286 mL

0.4573 mL

Akti-1/2是高度选择性的Akt1/Akt2抑制剂，IC50分别为58 nM/210 nM，对Akt1的选择性比对Akt3高36倍。

靶点

体外研究

在基于细胞的IPKA (C33A)试验中，Akti-1/2抑制Akt1和Akt2，IC50分别为305 nM和2086 nM。在HT29，MCF7，和A2780细胞中，Akti-1/2通过急剧增加caspase-3活性诱导细胞凋亡。在肝细胞中，Akti-1/2阻断胰岛素调节PEPCK，G6Pase表达，和FOXO1活性。 Akti-1/2也会通过阻断PKB强烈增强PAR-1-介导的血小板聚集。在HCC827，NCI-H522，NCI-1651，和PC-9细胞中，Akti-1/2抑制细胞生长，IC50 为4.7 μM，7.25 μM，和9.5 μM，结合gefitinib时，Akti-1/2会增强细胞生长和凋亡的抑制。

体内研究

在小鼠中，Akti-1/2 (50 mg/kg, i.p.)抑制肺中基底和IGF-刺激的Akt1和 Akt2磷酸化作用。

A-674563

MB4498

AT13148

MB4497

GSK-2141795,Uprosertib

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.8128 mL

9.0639 mL

18.1278 mL

5 mM

0.3626 mL

1.8128 mL

3.6256 mL

10 mM

0.1813 mL

0.9064 mL

1.8128 mL

50 mM

–

–

–

激酶筛选:
简而言之，所有试验(25.5 μl在21°C下进行30 min)使用Biomek 2000实验室自动化工作站在96孔格式中进行。反应包含5–20 mU纯化的激酶和底物肽或蛋白质，通过加入10 mM 乙酸镁和5，20，或50 μM ATP ([γ-33P]-ATP, 800 cpm/pmol)起始。

细胞实验

• Cell lines: HCC827，NCI-H522，NCI-1651，和 PC-9 细胞
• Concentrations: ~10 μM
• Incubation Time: 96小时
• Method: AKTi-1/2的细胞生长抑制作用使用96小时磺酰罗丹明B试验(SRB)研究。每个化合物抑制50%细胞生长的浓度(IC50)在GraphPad Prism 6.0中使用非线性回归分析和S形剂量-反应(可变斜率)方程计算。

CH5424802是有效的ALK抑制剂，IC50为1.9 nM,对L1196M突变型敏感，作用于ALK比 PF-02341066, NVP-TAE684 和PHA-E429选择性高。

靶点

ALK

ALKF1174L

ALKR1275Q

IC50

1.9 nM

1 nM

3.5 nM

体外研究

CH5424802作用于ALK 为ATP竞争性的，解离常数(KD)为2.4 nM。CH5424802对ALK 和L1196M 具有强大的抑制效果，Ki分别为0.83 和1.56 nM。 CH5424802作用于表达EML4-ALK的NCI-H2228 NSCLC细胞，抑制ALK自磷酸化。CH5424802 也抑制STAT3 和AKT,而不是 ERK1/2的磷酸化。CH5424802 完全抑制STAT3在Tyr705位点的磷酸化。CH5424802优先有效作用于表达EML4-ALK的NCI-H2228细胞，而不作用于融合ALK的阴性 NSCLC细胞系，包括单层培养的HCC827细胞(EGFR外显子19缺失), A549细胞(KRAS突变), 或NCI-H522细胞(EGFR 野生型, KRAS 野生型, 和ALK野生型)。CH5424802作用于 NCI-H2228球体细胞，引起凋亡标记—caspase-3/7样激活。CH5424802抑制含NPM-ALK融合蛋白的两种淋巴瘤细胞, KARPAS-299和SR生长,为不影响不含ALK融合的 HDLM-2淋巴瘤细胞生长。CH5424802 作用于KARPAS-299具有高度靶向选择性和更强的抗增殖活性。CH5424802抑制KAPRAS-299，IC50为3 nM, 抑制KDR， IC50为1.4 μM。CH5424802代谢稳定性很高。

体内研究

CH5424802口服处理，抑制肿瘤生长，这种作用存在剂量依赖性，ED50为0.46 mg/kg。CH5424802按20 mg/kg剂量处理，引起肿瘤快速衰退，衰退达168%,处理11天后(在第28天)每个鼠中的肿瘤体积<30 mm3, 维持有效的抗肿瘤效果，且在4周的无药处理期间，不会出现肿瘤再生长。CH5424802 处理小鼠的半衰期和口服生物有效性分别为8.6 小时和 70.8%。按6 mg/kg重复剂量处理，在2,7,和24小时后，平均血浆水平达到1.7,1.5,和0.3 nM。CH5424802处理抑制肿瘤生长。CH5424802按20 mg/kg剂量处理 KARPAS-299 和 NB-1，在第20天，肿瘤生长抑制达 119% 和104%。CH5424802 抑制STAT3磷酸化，这种作用存在剂量依赖性(2-20 mg/kg)。CH5424802处理的移植瘤中，观察到AKT磷酸化部分降低。

ASP3026

MB3330

PF-06463922

MB4539

RXDX-101

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.0720 mL

10.3601 mL

20.7202 mL

5 mM

–

–

–

10 mM

–

–

–

50 mM

–

–

–

体外激酶抑制检测:
在CH5424802存在时，通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）分析或荧光偏振（FP）法测量磷酸化各种底物肽的能力，而测评抑制各种激酶（除了MEK1和 Raf-1）的能力。在CH5424802存在时，通过定量分析重组ERK2 蛋白对底物的磷酸化而测评对MEK1的抑制活性。在 CH5424802存在时，通过测定激酶磷酸化MEK1的能力而测评对Raf-1的抑制活性。

细胞实验

• Cell lines: NSCLC, A549 和 HCC827 细胞
• Concentrations: 0-1 μM
• Incubation Time: 5天
• Method: NSCLC, A549 和HCC827细胞接种在96孔板中过夜，与不同浓度CH5424802按指定时间温育。球体细胞生长抑制实验中，细胞接种在球板上，温育过夜，然后在指定时间用化合物处理。通过发光细胞活性检测存活细胞。使用Caspase-Glo 3/7 检测试剂盒进行Caspase-3/7检测。

动物实验

• Animal Models: 携带NCI-H2228细胞的 SCID 或裸鼠
• Formulation: 0.02 N HCl, 10% DMSO, 10% Cremophor EL, 15% PEG400, 和 15% HPCD (2 – 羟丙基-β-环糊精)
• Dosages: 20 mg/kg
• Administration: 口服处理

Alendronate sodium trihydrate，含氮双膦酸盐，是骨吸收的强抑制剂，用于治疗和预防骨质疏松症。

靶点

IC50: 460 nM (farnesyl diphosphate synthase)

体外研究

Alendronate，直接作用于破骨细胞，抑制破骨细胞功能所必需的胆固醇生物合成途径的限速步骤。Alendronate抑制类异戊二烯生物合成途径，并干扰蛋白质异戊烯化，从而降低香叶基香叶基二磷酸水平。Alendronate抑制[(3)H]甲羟戊酸内酯整合到18-25 kDa蛋白质和非皂化脂，包括破骨细胞中的甾醇。Alendronate剂量依赖性抑制[(3)H]MVA整合到固醇，并伴随整合到IPP 和DMAPP的放射性标记增加。

体内研究

Alendronate引起兔子胃糜烂，但不引起大鼠胃窦溃疡。Alendronate增加indomethacin诱发的胃窦溃疡的发病率和面积。在大鼠体内，Alendronate也会增强indomethacin诱发的胃损伤，并延缓胃溃疡恢复。Alendronate (0.04-0.1 mg/kg一周两次，或0.1 mg/kg 一周一次)部分阻断人PC-3 ML细胞对骨转移的建立，并导致腹膜和其它软组织肿瘤形成。Alendronate预处理小鼠(0.1 mg/kg，一周两次或一周一次)，并联合紫杉醇给药(10-50 mg/kg/day，一周两次或一周一次)统计学上显著阻断骨髓和软组织中PC-3 ML肿瘤的生长，并显著将生存时间提高到4-5周。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

3.0663 mL

15.3313 mL

30.6626 mL

5 mM

0.6133 mL

3.0663 mL

6.1325 mL

10 mM

0.3066 mL

1.5331 mL

3.0663 mL

50 mM

0.0613 mL

0.3066 mL

0.6133 mL

• 大鼠肝细胞溶质由来自大鼠的单独肝脏制备。 测定的总体积为0.1mL，含有10mg胞质蛋白和根据Rilling的组分。 将所有反应组分（IPP除外）混合并在冰上保持15分钟。 通过加入[14 C] IPP并在37℃温育来引发反应。5分钟后，通过加入0.4mL MeOH / HCl（4/1，按体积计）终止反应，并将样品再温育15分钟以将烯丙基焦磷酸酯水解成石油醚可提取产物。 加入0.5mL水和1mL石油醚后，取50％上层（石油醚可萃取的）相进行液体闪烁分析。 初步实验表明，在这些条件下，反应与时间和蛋白质呈线性关系，并且不超过10％的底物被消耗。

阿利苯多(标准品)

MLN8237 (Alisertib) 是选择性的Aurora A抑制剂，IC50为1.2 nM，作用于Aurora A比作用于Aurora B选择性高200倍以上。

靶点

Aurora A

IC50

1.2 nM

体外研究

MLN8237作用于Aurora A选择性比作用于结构相关的Aurora B 高200多倍，IC50为396.5 nM, 而对205种其他激酶则没有显著活性。0.5 μM MLN8237处理MM1.S和OPM1 细胞，抑制 Aurora A磷酸化，而不影响 Aurora B调节的组蛋白H3磷酸化。MLN8237作用于多发性骨髓瘤(MM) 细胞系，显著抑制细胞增殖，IC50为0.003-1.71 μM。在BM 基质细胞，IL-6和 IGF-1 存在时，MLN8237作用于原代MM 细胞和MM细胞系，抗增殖活性比只有MLN8237单独作用时高很多。0.5 μM MLN8237 作用于原代MM细胞和细胞系，使G2/M 期细胞提高2到6倍，且显著诱导凋亡和衰老，涉及p53, p21 和p27的上调,及 PARP,caspase 3,和 caspase 9的裂解。此外, MLN8237和 Dexamethasone联用具有协同作用，具有强抗MM 功效, 而和Doxorubicin 及Bortezomib联用则具有另外的功能。0.5 μM MLN8237处理 FLO-1, OE19, 和OE33食管腺癌细胞系，抑制集落形成，且显著提高多倍体细胞百分数,随后提高G1期细胞百分数,而与 Cisplatin (2.5 μM)联用则效果进一步提高，与单独用药相比，诱导产生更多, TAp73β, PUMA, NOXA, cleaved caspase-3, 和cleaved PARP。

体内研究

MLN8237口服处理，显著降低肿瘤负担，按15 mg/kg 和30 mg/kg剂量处理肿瘤生长抑制率(TGI) 分别为42%和80%,且与对照组相比，延迟小鼠寿命。MLN8237 (30 mg/kg) 与Cisplatin (2 mg/kg) 联用作用于FLO-1移植瘤，与单独用药相比，抗癌活性增强，伴随着Ki-67表达受抑制，细胞核p73蛋白和cleaved caspase 3表达增强。

特征

MLN8237 是第一个口服有效的小分子Aurora A激酶选择性抑制剂。

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.9271 mL

9.6354 mL

19.2708 mL

5 mM

0.3854 mL

1.9271 mL

3.8542 mL

10 mM

0.1927 mL

0.9635 mL

1.9271 mL

50 mM

0.0385 mL

0.1927 mL

0.3854 mL

Aurora A放射性闪光板酶实验:
进行Aurora A放射性闪光板酶实验，测定体外MLN8237抑制程度。在Sf9细胞中表达重组Aurora A，然后使用GST亲和层析进行纯化。Aurora A 肽底物与生物素联合形成生物素-GLRRASLG。在50 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0.05% Tween-20, 2 μM 肽底物, 3.3 μCi/mL [γ-33 P]ATP 2 μM, 和浓度不断增高的MLN8237 的混合物中进行Aurora A激酶 (5 nM)实验。

细胞实验

Cell lines: MM1.S, MM.1R, LR5, RPMI 8226, DOX40, OPM1, OPM2, INA6, 和U266

• Concentrations: 溶于DMSO,终浓度为~10 μM
• Incubation Time: 24, 48, 和72小时
• Method: 使用不同浓度MLN8237处理细胞24, 48,和72小时。通过MTT实验测定细胞活力，通过测定 3[3H]-胸甘渗透而测定细胞增殖。为了分析细胞周期，使用70%乙醇在-20oC下使细胞通透，然后与50 μg/mL PI 和20 单位/mL RNase-A温育。 通过流式细胞仪使用 BDFACS-Canto II和FlowJo软件分析DNA含量。 为了测定凋亡和衰老，使用异硫氰酸荧光素-annexin V和PI对细胞进行染色。通过流式细胞仪使用 BDFACS-Canto II和FlowJo软件测定凋亡细胞。

动物实验

Animal Models: 皮下接种 MM1.S 细胞的SCID鼠

• Formulation: 在10% 2-羟丙基-β-环糊精/1％碳酸氢钠中配制
• Dosages: ~30 mg/kg/day
• Administration: 口服处理

Aliskiren Hemifumarate是一种直接肾素抑制剂，IC50为1.5 nM。

靶点

体外研究

Aliskiren hemifumarate似乎会结合到疏水性S1/S3-结合口袋和从S3-结合位点延伸到肾素疏水核的大的，明显的亚口袋。Aliskiren hemifumarate的口服利用度在大鼠，狨猴和人类中分别为2.4%，16%和2.5%。

体内研究

在钠耗竭的狨猴体内，Aliskiren hemifumarate (< 10 mg/kg，口服)抑制血浆肾素活性，并降低血压。在轻度至中度高血压患者中，Aliskiren hemifumarate每天一次口服治疗有效降低血压，并且具有安全性和耐受性。

阿利克仑-5

MB25653

盐酸阿利克仑-d6

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

1.6398 mL

8.1990 mL

16.3980 mL

5 mM

0.3280 mL

1.6398 mL

3.2796 mL

10 mM

0.1640 mL

0.8199 mL

1.6398 mL

50 mM

0.0328 mL

0.1640 mL

0.3280 mL