AZD6482是PI3Kβ抑制剂，IC50为10 nM,作用于PI3Kβ比作用于PI3Kδ, PI3Kα 和PI3Kγ选择性分别高8,86，和109倍。

靶点

PI3Kβ

PI3Kα

PI3Kγ

PI3Kδ

IC50

21 nM

1.4 μM

1.2 μM

80 nM

体外研究

AZD6482是PI3Kβ抑制剂，IC50为21 nM, 然而, AZD6482也抑制PI3Kα,γ,和δ, IC50为80 nM到1.4 μM, 明显比其(+)-对印异构体(S型)低很多。AZD6482是抗血小板药，在洗涤血小板聚集(WPA)实验中，抑制活化血小板粘附/聚集，且促进血小板解聚，IC50为6 nM。而且, AZD6482靶向作用于PI3Kβ，特定抑制血栓形成而不影响正常止血。因此, AZD6482作为抗血栓药，用于预防血栓疾病。

特征

AZD6482是PI3Kβ抑制剂，作为抗血小板和抗血栓的药剂。

GSK2636771

MB5532

BYL719

MB3886

GDC-0032

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4483 mL

12.2414 mL

24.4828 mL

5 mM

0.4897 mL

2.4483 mL

4.8966 mL

10 mM

0.2448 mL

1.2241 mL

2.4483 mL

50 mM

0.0490 mL

0.2448 mL

0.4897 mL

抑制PI3K酶实验 :
通过AlphaScreen酶活性测定使用人重组酶测定对PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ和 PI3Kδ的抑制效果。该法测量PI3K调节的PIP2和PIP3之间的转换。生物素化的PIP3，即GST-标记的血小板-白细胞C 激酶底物同源(PH) 域和两个AlphaScreen 磁珠形成复合体，在680 nm处形成激光信号。在酶反应复合体中形成的PIP3与生物素化的 PIP3竞争性地结合到PH 域，引起提高酶产物，降低信号。AZD6482 溶于DMSO，加到385孔板上。PBKβ, PBKα, PBKγ, 或PBKδ加到 Tris buffer(50 mM Tris pH 7.6, 0.05% CHAPS, 5 mM DTT, 和24 mM MgCl2) 中，和AZD6482 预温育20分钟，然后加入含 PIP2和ATP的底物溶液。20分钟后，加入含EDTA 和生物素-PIP3的终止液，而终止酶反应,随后加入含GST-grpl PH 和AlphaScreen磁珠的检测液。实验板在暗中放置最少5小时，然后用于实验分析。实验中DMSO, ATP和 PIP2 的最终浓度分别为0.8%, 4 μM, 和40 μM。计算IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: 人血小板颗粒
• Concentrations: 0-60 nM, 溶于 DMSO
• Incubation Time: 5分钟
• Method: 在洗涤血小板聚集 (WPA)实验中,从人血液中分离血小板颗粒，再悬浮在含1 μM水蛭素和0.02 U/mL三磷酸腺苷双磷酸酶的2×1015/L Tyrodes buffer 中。然后，血小板悬浮液在室温下搁置30分钟。实验开始前，加入CaCl2，终浓度为2 mM。AZD6482, 溶于DMSO,加到96孔板中，然后 加入洗涤的血小板悬液。血小板悬液和 AZD6482预温育5分钟。在650 nm处记录吸光值，然后震荡板5分钟再记录吸光值，记为R0和Rl。每孔加入特定浓度的小鼠 抗人CD9抗体 ，震荡板10分钟，记录吸光值，记为R2。用于数据分析, 除去所有数据中和TB结合而测定的吸光值，然后根据公式: [(R1-R2)/R1]×100 计算聚集百分数。另外，根据同样公式 [(R0-Rl)/R0]×100 评定抑制剂的自发聚集效果。然后测定IC50值。

AZD6738是一种口服具有活性的，选择性ATR 激酶抑制剂，IC50 为 1 nM。

靶点

ATR

IC50

1 nM

体外研究

在四个Kras突变细胞系：H23，H460，A549，和H358中，AZD6738抑制ATR激酶活性，并损害细胞活性。在ATM缺失的H23细胞中，AZD6738强烈增强顺铂诱导快速细胞死亡的作用。在p53 或 ATM缺失的细胞中，AZD6738治疗引起复制叉停滞和未修复DNA损伤的积累，导致有丝分裂障碍，从而使细胞死亡。

体内研究

在负荷H460和H23肿瘤的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg, p.o.)导致肿瘤生长抑制(TGI)，结合顺铂引起ATM缺失的H23肿瘤快速退化。在负荷LoVo异种移植物的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg) + IR (2 Gy)的组合避免了毒性，同时仍保持疗效。

AZ20

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4242 mL

12.1209 mL

24.2418 mL

5 mM

0.4848 mL

2.4242 mL

4.8484 mL

10 mM

0.2424 mL

1.2121 mL

2.4242 mL

50 mM

0.0485 mL

0.2424 mL

0.4848 mL

Cell lines: H23，H460，A549，和 H358 细胞

• Concentrations: ~30 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞在白色壁，透明底的96孔板中与指示剂量的AZD6738，cisplatin，gemcitabine，或它们的组合处理48小时。ATP水平通过CellTiter-Glo发光细胞活性试验和Safire2酶标仪测量代替品活性评估。进一步分析之前，原始数据对本底发光进行校正。对于AZD6738治疗，在GraphPad Prism 6中将对数转化(x=log(x))的数据归一化为未处理对照组的平均值，通过非线性回归(log(抑制剂) vs. 对可变斜率的响应值) 生成对数剂量响应曲线。GI50值，定义为Y = 50%时，X的剂量，根据剂量反应曲线推导得出。

动物实验： 

Animal Models: 负荷 H23 或 H460 异种移植物的雌性无胸腺裸鼠

• Formulation: 10% DMSO，40% 丙二醇，和 50% 无菌 dH2O
• Dosages: 25 或 50 mg/kg
• Administration: p.o.